초록 ▼

본 시험에서는 현재까지 in vivo로 수행되어 왔던 전반적인 독성시험을 대체할 수 있는 in vitro 표적장기독성시험법, 국소독성시험법, 단기생식독성시험법, 광독성시험법 및 포유동물 배양세포를 이용한 항돌연변이물질 검색법을 개발 확립코져 하였다. 1. In vitro 표적장기독성시험법 중 신장독성분야에서는 랫드 신장으로부터 근위세뇨관을 분리하여 1차 배양법을 확립하였으며 신장세포주를 사용한 in vitro 시스템에서 -MG를 이용한 glucose uptake 기능 측정법이 기존의 효소유리 측정법보다 독성의 초기에 검색할 수

본 시험에서는 현재까지 in vivo로 수행되어 왔던 전반적인 독성시험을 대체할 수 있는 in vitro 표적장기독성시험법, 국소독성시험법, 단기생식독성시험법, 광독성시험법 및 포유동물 배양세포를 이용한 항돌연변이물질 검색법을 개발 확립코져 하였다. 1. In vitro 표적장기독성시험법 중 신장독성분야에서는 랫드 신장으로부터 근위세뇨관을 분리하여 1차 배양법을 확립하였으며 신장세포주를 사용한 in vitro 시스템에서 -MG를 이용한 glucose uptake 기능 측정법이 기존의 효소유리 측정법보다 독성의 초기에 검색할 수 있는 예민한 지표로 생각되었다. 또한 glucose uptake에 관여하는 효소와 세포기능을 조사함으로써 독성물질이 장애를 일으키는 표적부위와 기전에 대한 정보를 얻을 수 있으리라 기대되었다. 신경독성분야에서는 cerebellar granule cell과 astrocyte의 배양조건을 확립하였으며 독성지표로서 SRB assay와 MTT assay를 실시한 결과, in vitro 모델이 신경독성이 의심되는 물질을 단기간에 검색하는데 유용하다는 것을 확인하였다. 간장독성시험에서는 랫드 간세포의 1차 배양법을 확립하였으며, 독성지표로서 LDH leakage assay 및 GSH 정량을 실시한 결과, 독성발현시간 및 독성을 유도하는 물질의 농도가 1차배양 시스템에서는 중요한 조건이라고 판단되었다. 2. Skin 구성세포를 이용한 in vitro 국소자극시험 결과 LDH leakage assay와 MTT reduction test는 계면활성제의 상대적인 독성을 평가하는 방법으로 사용될 수 있으며, MTT test에서 감지하지 못한 독성도 LDH leakage assay 방법으로 독성 정도를 평가 할 수 있음을 알 수 있었다. 3. 생식독성물질을 단기간에 검색할 수 있는 in vitro 시험법을 개발하고자, 일차중뇌 소세포괴배양법의 조건을 확립하였으며, 이 배양법을 이용하여 화학물질의 최기형성을 검색한 결과, 민감도가 높아 최기형성검색법의 한 model로서 효과적으로 이용될 수 있으리라 사료되었다. 4. 포유동물배양세포를 이용한 항돌연변이물질 검색법을 확립하고자, in vitro, in vivo 염색체이상시험을 실시한 결과, mitomycin C와 bleomycin에 대하여 rubrofusarin이 항돌연변이효과가 있음을 나타내었고, 지표물질인 β-carotene도 항돌연변이효과가 있는 것으로 확인되었다. 5. 광독성을 일으키는 여러가지 시험물질을 이용하여 MTT assay 및 neutral red uptake assay 시험법으로 광독성시험을 실시하였다. 시험결과 대부분의 시험물질에서 광독성을 나타내었으며 이 시험법들은 in vitro 광독성 시험법으로서 활용가능성이 있다고 사료된다.

목차 Contents

• 제1장 서론...55
• 제1절 In vitro 신장독성 시험법 개발...56
• 제2절 In vitro 신경독성 시험법 개발...58
• 제3절 In vitro 간장독성 시험법 개발...60
• 제2장 실험방법...61
• 제1절 In vitro 신장독성 시험법 개발...61
• 1. 시험물질...61
• 2. 세포배양 및 약물처리...62
• 3. -Methylglucose uptake의 측정...62
• 4. ATP assay...63
• 5. Enzyme assay...63
• 6. 단백지 정량...63
• 7. 랫드 신장으로부터의 근위세뇨관 세포의 1차배양...64
• 제2절 In vitro 신경독성 시험법 개발...65
• 1. 섬유아세포배양...65
• 2. 소뇌과립세포배양...65
• 3. Astrocyte 배양...66
• 4. 시험물질 및 투여약물 조제...67
• 5. Colorimetric MTT assay...67
• 6. SRB assay...68
• 제3절 In vitro 간장독성 시험법 개발...68
• 1. 간세포 분리 및 배양...68
• 2. 시험물질 처치...69
• 3. LDH leakage assay...70
• 4. Glutathione 측정...70
• 5. 통계처리 및 분석...71
• 제3장 연구결과 및 고찰...71
• 제1절 In vitro 신장독성 시험법 개발...71
• 1. 세포형태 관찰...71
• 2. 효소유리 측정...72
• 3. -Methylglucose uptake의 측정...74
• 4. 세포내 ATP양 측정...75
• 5. Na -K ATPase 활성 측정...75
• 6. Alkaline Phophatase의 활성 측정...76
• 제2절 In vitro 신경독성 시험법 개발...76
• 1. 소뇌과립세포(cerebellar granule cell) 배양...76
• 2. 신경교세포 (astrocyte) 배양...77
• 3. SRB assay에 의한 섬유아세포의 생존율과 형태적 변화...78
• 4. MTT assay에 의한 소뇌과립세포의 생존율 측정...78
• 제3절 In vitro 간장독성 시험법 개발...81
• 1. 랫드 간장으로부터 간세포의 분리 및 1차배양...81
• 2. LDH leakage assay...81
• 3. Glutathione 측정...82
• 제4장 결론...83
• 제1절 In vitro 신장독성 시험법 개발...83
• 제2절 In vitro 신경독성 시험법 개발...84
• 제3절 In vitro 간장독성 시험법 개발...85
• 제5장 참고문헌...86
• 제1장 서론...119
• 제2장 연구내용 및 방법...123
• 제1절 시험물질...123
• 제2절 시험방법...125
• 1. In vitro 시험...125
• 2. In vivo 시험...127
• 제3절 결과분석...130
• 제3장 연구결과...131
• 제4장 고찰...133
• 제5장 참고문헌...135
• 제1장 서론...158
• 제2장 연구추진방법(실험방법)...163
• 제1절 실험동물...163
• 제2절 태자중뇌세포의 일차배양...163
• 제3절 세포독성검사를 위한 고정 및 염색...166
• 제4절 세포분화도 검색을 위한 배양후 고정 및 염색...166
• 제5절 면역조직학적 염색...167
• 제3장 연구결과 및 고찰...168
• 제1절 일차중뇌세포 배양법 확립...168
• 제2절 배양된 중뇌세포에 대한 약물의 영향...171
• 제4장 결론...176
• 제5장 참고문헌...177
• 제1장 서론...207
• 제2장 실험방법...212
• 제1절 실험재료...212
• 1. 시약...212
• 2. 실험기기 및 기구...212
• 3. 실험동물...213
• 제2절 In vitro 염색체이상시험...213
• 1. 사용세포 및 배양방법...213
• 2. 세포독성시험...214
• 3. In vitro 염색체이상시험...214
• 4. In vitro 염색체표본 제작방법...215
• 5. 결과의 판정...215
• 제3절 In vivo 염색체 이상시험...217
• 1. 예비독성시험...217
• 2. In vivo 염색체이상시험...217
• 3. In vivo 염색체표본 제작방법...218
• 4. 결과의 판정...218
• 제3장 실험 결과 및 고찰...220
• 제1절 In vitro 염색체이상시험...220
• 1. 세포독성시험...220
• 2. In vitro 염색체이상시험...220
• 제2절 In vivo 염색체이상시험...222
• 1. 예비독성시험...222
• 2. In vivo 염색체이상시험...226
• 제3절 고찰...230
• 제4장 결론...238
• 제5장 참고문헌...240
• 제1장 서론...259
• 제2장 실험방법...263
• 제1절 시험세포...263
• 제2절 시험물질...264
• 제3절 UV조사...264
• 제4절 MTT assay...265
• 제5절 Neutral red uptake assay...266
• 제6절 MTT 및 neutral red uptake assay에서 광독성의 결정...267
• 제3장 연구결과 및 고찰...268
• 제4장 결론...274
• 제5장 참고문헌...275