초록 ▼

흰느타리버섯 (pleurotus cornucopiae(pers.) Rolland ) 중의 protease를 DEAE-Sephadex A-50, CM-cellulose, DEAE-cellulose 및 sephadex G-75를 사용하여 분리정제하고 그 성질을 조사하였다. 이 버섯중에서는 bovine serum albumin을 기질로 하였을때 2종류의 활성분획을 함유하고 있었고, protease (분획 I)의 최적 PH는 4.0, 최적온도는 50 ˚C PH 안정도는 3.0 - 4.0, 열안정도는 40˚C 이하에서 안정하였다. Ca?

흰느타리버섯 (pleurotus cornucopiae(pers.) Rolland ) 중의 protease를 DEAE-Sephadex A-50, CM-cellulose, DEAE-cellulose 및 sephadex G-75를 사용하여 분리정제하고 그 성질을 조사하였다. 이 버섯중에서는 bovine serum albumin을 기질로 하였을때 2종류의 활성분획을 함유하고 있었고, protease (분획 I)의 최적 PH는 4.0, 최적온도는 50 ˚C PH 안정도는 3.0 - 4.0, 열안정도는 40˚C 이하에서 안정하였다. Ca??, Zn??, Fe?? 및 MgS??이온은 이 효소의 활성도를 저해하였으나, Co??이온은 활성도를 증가시켰다. 이 효소의 Subunit는 1개였고, 걷보기 분자량은 56,000들 통이었으며, 아미노산 조성은 17종이었다. Hippuryl-L-phenylalanine 기질에 대한 이 효소의 Km 값은 0.45mM이었고, glycyl-L-phenylalanine의 펠티드 결합을 분해시키는 특이성을 보였다. L-cysteine, L-lysine, DAN, EPNP, EDTA, SO???은 활성율 증가시켰다. L-cysteine은 경쟁적 방해제로 작용하였고, 그것의 Ki값은 2.4mM 였고, Pka 값은 4.4이었다.

Abstract ▼

The enzyme properties of protease of the Pleurotus Cornucopiae (Pers.) Rolland were investigated by purification with gel filtration using DEAE-Sephadex A-50, CM-Cellulose, DEAE-Cellulose and sephadex G-75. Two kind of active fractions were isolated from this mushroom study. The active fraction sh

The enzyme properties of protease of the Pleurotus Cornucopiae (Pers.) Rolland were investigated by purification with gel filtration using DEAE-Sephadex A-50, CM-Cellulose, DEAE-Cellulose and sephadex G-75. Two kind of active fractions were isolated from this mushroom study. The active fraction showed protease activity for the bovine serum albumin substrate, and its optimum PH, optimum teperature, PH stability and thermal stability were 4.0, 50˚C 3.0-4.0 and 20-40˚C, respectively. The activity of the enzyme was inhibited by Ca??, Cu??, Zn??, Fe?? and Mg??, but increased with Co??. The enzyme had one subunit composed of 17 amino acids. The apparent molecular weight was about 56,000 daltons. The Km value was 0.45 mM when hippuryl-L-phenylalanine was used as a substrate. This enzyme showed substrate specificity hydrolyzing the peptide bond of glycyl-L-phenylalanine. This diazoacetyl-DL-norleucine methylester (DAN), 1.2-epoxy-(P-nitrophenoxy) propane (EPNP) and EDTA, also was inhibited by anion as SO???, SO???, and HPO???, but increased with NO??? ion. The L-cysteine was found to be competitive inhibitor, and its Ki value was determined to be 2.4 mM by Dixon plot. PKa value was 4.4.

목차 Contents

• 1. 서 론...9
• 2. 재료 및 방법...10
• 2.1 재료 및 시약...10
• 2.2 protease 의 분리정제...11
• 2.3 효소의 활성도 측정...12
• 2.4 Disc-PAG 전기영동 및 subunit 측정...12
• 2.5 protease 의 분자량 측정...13
• 2.6 아미노산 분석...13
• 2.7 기질과 protease 와의 반응...13
• 2.8 Km 값 측정...14
• 2.9 양이온,음이온 및 여러 유기화합물에 으한 활성도 변화...14
• 3. 결과 및 고찰...15
• 3.1 protease 의 분리정제...15
• 3.2 Disc-PAG 전기영동 및 subunit...15
• 3.3 protease 의 분자량...19
• 3.4 PH 변화에 따른 활성도 변화...19
• 3.5 온도변호에 따른 활성도 변화...19
• 3.6 PH 안정성...22
• 3.7 열 안정성...22
• 3.8 양이온,음이온 및 여러 유기화합물에 의한 활성도 변화...22
• 3.9 기질과 protese 와의 반응...22
• 3.10 아미노산 분석...25
• 3.11 km 값...29
• 3.12 시간변화에 따른 저해제에 의한 활성도 변화...29
• 3.13 시간 및 온도변화에 따른 저해제에 의한 활성도 변화...29
• 3.14 ki 값...34
• 3.15 PH 의존에 따른 효소 활성도 변화...34
• 4. 결 론...37
• 5. 참고문헌...38
• 6. 논문 발표 실적...40