초록 ▼

폐 섬유 자원의 이용성을 높이기 위한 기초연구의 목적으로 효소적 리그닌(lignin) 제거에 유력한 효소, laccase 의 생산, 추출 및 효소적 특성에 관하여 연구하였다. 사용균주는 백색 부후균의 일종인 Pleurotus ostreatus 이며 각종의 배지를 사용하여 배양시간별 효소 생성량을 측정하고 추출하여 그 특성을 조사 하였다.
배양중 각 배지의 laccase의 활성은 균사 접종후 11 일째에 최대 활생치를 보이며 glucose 나 CMC 첨가배지 보다는 양파 200 그림배지가 우수한 laccase 생산배지임을

폐 섬유 자원의 이용성을 높이기 위한 기초연구의 목적으로 효소적 리그닌(lignin) 제거에 유력한 효소, laccase 의 생산, 추출 및 효소적 특성에 관하여 연구하였다. 사용균주는 백색 부후균의 일종인 Pleurotus ostreatus 이며 각종의 배지를 사용하여 배양시간별 효소 생성량을 측정하고 추출하여 그 특성을 조사 하였다.
배양중 각 배지의 laccase의 활성은 균사 접종후 11 일째에 최대 활생치를 보이며 glucose 나 CMC 첨가배지 보다는 양파 200 그림배지가 우수한 laccase 생산배지임을 알 수 있다.
침전제로 사용한 여러 유기용매중 TCA 를 제외한 다른 용매에 의한 효소의 실활은 없으며 Na-azide 에 의하여는 100% 저해를 받으나 다시 acetone 으로 첨전시키면 활성의 회복된다. laccase 의 활성은 TCA에 의하여 100% 실활된다.
이 효소의 최적 pH 는 5.94이며 4.7-8.7의 비교적 넓은 pH 영역에서 안정성을 보였다.
온도 안정성 에서는 30℃에서 40분간 방치 하였을때 90% 이상 활성을 보존 하였으나 50℃에서는 40%의 실활을 보였다.
SDS-Poly acrylamide gel 전기영동법으로 측정된 laccase 의 분자량은 55,000 이었다.

Abstract ▼

The production media, extraction and the enzymatic characteristics of laccase from Pleurotus ostreatus was investigated for the purpose of providing fundamental informations on the enzymatic delignification of waste cellulosic materials.
The activity of laccase during incubation reached to the

The production media, extraction and the enzymatic characteristics of laccase from Pleurotus ostreatus was investigated for the purpose of providing fundamental informations on the enzymatic delignification of waste cellulosic materials.
The activity of laccase during incubation reached to the maximum at the 11 days of incubation.
Among various media tried the double strength onion media showed much higher production of laccase compared to glucose and/or CMC added media.
Most organic solvents, except trichloroacetic acid did not inactivate the laccase to any significant degree when they were used for precipitation. Trichloroacetic acid inactivated the laccase completely.
The laccase from pleurotus ostreatus has the optimum pH of 5.94 for the activity and appears to be stable at relatively broad pH spectrum (4.7-8.72).
The experiments on the temperature stability shows that 93% activity could be preserved after holding at 30? for 40 min., 60% activity was remained after 40 min. at 50?.
The Km value of the laccase from pleurotus ostreatus was estimated to be 3.209mM and the molecular weight of laccase was determined to be 55,000 by SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis.

목차 Contents

• 1.서론...8
• 2.재료 및 방법...11
• 2.1 균주...11
• 2.2 배지 및 배양...11
• 2.2.1 양파기본배지...11
• 2.2.2 양파 200 g 배지...11
• 2.2.3 Glucose 첨가 배지...11
• 2.2.4 포도당, CMC 첨가 배지...11
• 2.2.5 CMC 첨가 배지...11
• 2.2.6 톱밥 첨가 배지...11
• 2.2.7 보리짚 배지...11
• 2.2.8 염화 암모늄 배지...12
• 2.3 배양중의 laccase 활성의 변화...12
• 2.4 조효소액의 조제...12
• 2.5 효소활성의 측정...12
• 2.6 효소활성을 저해하는 물질...13
• 2.7 최적 pH...13
• 2.8 pH안정성...14
• 2.9 온도 안정성...14
• 2.10 km 값...14
• 2.11 효소액의 정제...14
• 2.12 분자량 측정...14
• 2.13 Energy of activation...14
• 3.결과 및 고찰...15
• 3.1 기질 (Substrate)...15
• 3.2 각배지별 배양중 효소활성의 변화...15
• 3.3 효소활성을 저해하는 물질...15
• 3.4 최적 pH...20
• 3.5 $\underline{Pleurotus \: ostreatus}$ 균주로부터 추출한 laccase의 pH 안정성...21
• 3.6 $\underline{Pleurotus \: ostreatus}$ 군주로부터 추출한 laccase의 온도 안정성...23
• 3.7 km 값...24
• 3.8 효소의 정제...26
• 3.9 분자량 측정...27
• 3.10 Energy of activation...28