초록 ▼

T 림프구 증식인자로 알려져 왔던 interleukin2(IL2)의 다양한 면역반응조절작용은 최근의 많은 연구 결과로서 입증되고 있으며, 특히 IL2에 의해 활성화된 킬러(lymphokine-activated killer;LAK) 세포의 강력한 암세포 파괴능은 이들 세포를 이용한 암의 면역요법에 지대한 관심을 불러 일으키게 하였다.
본 연구는 LAK 세포의 임상응용을 위해, 시험관내에서 용이하게 LAK 세포를 유도하는 방법을 수립하고자 계획되었으며, 또한 이를 위해 사람 백혈구로 부터 LAK 세포 유도용 IL2를 효과적으로 생

T 림프구 증식인자로 알려져 왔던 interleukin2(IL2)의 다양한 면역반응조절작용은 최근의 많은 연구 결과로서 입증되고 있으며, 특히 IL2에 의해 활성화된 킬러(lymphokine-activated killer;LAK) 세포의 강력한 암세포 파괴능은 이들 세포를 이용한 암의 면역요법에 지대한 관심을 불러 일으키게 하였다.
본 연구는 LAK 세포의 임상응용을 위해, 시험관내에서 용이하게 LAK 세포를 유도하는 방법을 수립하고자 계획되었으며, 또한 이를 위해 사람 백혈구로 부터 LAK 세포 유도용 IL2를 효과적으로 생산하기 위한 방법을 검토하였다.
여러가지 배양조건에서 IL2를 생산 비교한 결과, 5 x 10? cells/㎖ 농도의 단핵구를 2-mercaptoethanol, indomethacin 존재하에 24시간 사전 배양한 후 0.15 % PHA를 가하고 다시 18시간 배양하였을 때 IL2 생산이 가장 높았다.
황산암모늄 침전과 이온 교환 크로마토그래피 방법은 IL2 수획률이 낮았으며, 무혈청 배양액을 사용하여 IL2 를 생산하고 이를 농축시킨 후 겔을 여과함으로써 85%의 높은 수획률을 얻을 수 있었으며, 이때 순도는 1.2 x 10? U/㎎ protein 정도였다.
이를 LAK 세포의 유도에 사용한 결과 조 IL2보다 훨씬 높은 세포 파괴능을 지닌 LAK 세포를 유도할 수 있었으며, 상기 방법으로 간단하면서도 활성이 높은 LAK 세포를 얻을 수 있었다.

Abstract ▼

Interleukin2(IL2) discovered as a T cell growth factor has been demonstrated to have a variety of immunomodulating activity by numerous studies. The lymphokine-activated killer(LAK) cells generated by tre tment with IL2 are capable of lysing a broad range of tumor cells, and much attentions nas been

Interleukin2(IL2) discovered as a T cell growth factor has been demonstrated to have a variety of immunomodulating activity by numerous studies. The lymphokine-activated killer(LAK) cells generated by tre tment with IL2 are capable of lysing a broad range of tumor cells, and much attentions nas been directed toward th adoptive immunotherapy of cancer patients with IL2 and LAK cells.
This study was carried out to develope techniques for easier production of human IL2 and induction of LAK cells in vitro. IL2 production was evaluated at various conditions such as cell preparations, cell concentration, medium supplement, mitogen concentration and incubation period. Best results were obtained when mononuclear cells(5x10?/ml) were preincubated for 24hrs and followed by stimulation with 0.15% of PHA for 18hrs in RPMI 1640 medium supplemented with 5x10?? M 2-mercaptoethanol and 1μg/ml of indomethacin.
Partial purification of serum free crude IL2(CIL2) with concentration and gel filtration was more convenient than ammonium sulfate precipitation and ion exchange chromatography for great recovery.
This partially purified IL2 induced LAK cells much more reactive to tumor target cells when compared to those with CIL2.

목차 Contents

• 사람 Interleukin-2(IL-2)의 분리 정제 및 Lymphokine-Activated Killer (LAK) 세포의 활성화에 관한 연구...1
• 표지...1
• 1. 연구배경 및 목적...9
• 2. 연구방법...9
• 2-1. 세포 배양액...9
• 2-2. IL2 의 생산...9
• 2-2-1. 백혈구 및 단핵구의 분리...9
• 2-2-2. 조 IL2 의 생산...10
• 2-3. IL2 의 정제...10
• 2-3-1. 농축...10
• 2-3-2. 황산암모늄 침전...10
• 2-3-3. 겔 여과...11
• 2-3-4. 이온교환크로마토그래피...11
• 2-3-5. 흡착크로마토그래피...11
• 2-3-6. 전기영동...11
• 2-4. IL2 역가 검정...12
• 2-5. IL2 활성 측정...12
• 2-6. 인터페론(IFN) 역가 측정...12
• 2-7. 단백질 함량측정...12
• 2-8. LAK 세포의 유도...12
• 2-9. LAK 세포의 암세포파괴기능 측정...12
• 3. 결과...13
• 3-1. IL2 의 생산...13
• 3-1-1. 백혈구와 MNC 를 이용한 IL2 생산의 비교...13
• 3-1-2. 2ME 및 IDM 이 IL2 생산에 미치는 영향...13
• 3-1-3. 비양액 종류에 따른 IL2 생산의 비교...13
• 3-1-4. 사전배양의 IL2 생산에 미치는 영향...14
• 3-1-5. PHA-free IL2 의 생산...14
• 3-2. IL2 의 정제...14
• 3-2-1. 농축...14
• 3-2-2. 이온교환크로마토그래피...14
• 3-2-3. 겔 여과...15
• 3-2-4. 흡착크로마토그래피...15
• 3-2-5. 전기영동...15
• 3-3. LAK 세포의 유도...15
• 3-3-1.IL2 농도가 LAK 세포 활성에 미치는 영향...15
• 3-3-2. CIL2 및 PPIL2 에 의해 유도된 LAK 세포의 활성비교...15
• 3-3-3. 혈청 및 혈장을 사용하여 유도된 LAK 세포의 활성비교...15
• 3-3-4. Lysosomotrpic 물질이 LAK 세포 활성에 미치는 영향...15
• 4. 고찰 및 결론...16