초록 ▼

Inulinase에 관한 연구는 수십년 전부터 수행되어져 오고 있으며 Inulinase를 code하는 유전자에 관한 연구는 극소수가 알려져 있는 실정이다. 본 연구는 fructose의 polymer인 inulin으로부터 fructose의 생산성이 높은 미생물, 특히 Aspergillus 속의 곰팡이 속이 생산하는 열안정성 inulinase를 생상하는 균주를 분리하고, 분리된 균주가 생산하는 inulinase의 정제, 효소적인 성질의 검토 및 inulinase를 code 하는 유전자의 분리를 목표로 수행하였다. 그리하여 inulina

Inulinase에 관한 연구는 수십년 전부터 수행되어져 오고 있으며 Inulinase를 code하는 유전자에 관한 연구는 극소수가 알려져 있는 실정이다. 본 연구는 fructose의 polymer인 inulin으로부터 fructose의 생산성이 높은 미생물, 특히 Aspergillus 속의 곰팡이 속이 생산하는 열안정성 inulinase를 생상하는 균주를 분리하고, 분리된 균주가 생산하는 inulinase의 정제, 효소적인 성질의 검토 및 inulinase를 code 하는 유전자의 분리를 목표로 수행하였다. 그리하여 inulinase의 생산성이 높은 곰팡이를 분리한 결과 penicillium 속이 검색된 균주중에서 가장 높은 효소활성을 나타내었으므로 이 균주를 시험균주로 하여 효소의 열안정성을 평가 하였으며, 이렇게 선택된 효소의 황산암모늄침전, DEAE-cellulose 및 Sepharose 4B를 이용한 column chromatography로 정제하여, 효소적인 성질을 규명하였다. Sepharose로 정제된 효소는 열안정성이 상당히 있는 것으로 판정되어 N-말단의 아미노산 배열의 결정하여 probe의 합성에 필요한 정보를 얻으려고 기초과학연구지원센타에 결정을 의뢰 하였으나 N-말단의 아미노산의 배열결정이 성공적으로 되지 않아서, 결국 시험균주의 genomic DNA 로부터 직접 유전자를 분리하고자 이 DNA 를 여러가지의 제한 효소로 절단한 후 전기영동하여 nitrocellulose filter 에 옮긴 후 INU gene을 probe로 하여 Southern hybridization하였을 때 EcoRI절단시의 9kb위치에서 hybridization되는 band가 발견되어 이 부위의 길이에 해당하는 EcoRI 분해산물을 모아서 pUC18의 EcoRI site에 ligation 한 후 JM109에 transformation시켜 생성된 colony중에서 recombinant plasmid를 가지는 것을 colony hybridization으로 분리하여 제한 효소분석을 수행한 결과 약 9kb의 insert DNA 를 가지고 있음이 확인되었다.

Abstract ▼

Enzymatic studies on inulinase have been carried out for several decades, but genetic studues on inulinase were carried out in a few cases.
I isolated a species of microor ganisms which produced thermostable inulinase, and named it penicillium sp. HA-06. Inuliase produced by this strain was puri

Enzymatic studies on inulinase have been carried out for several decades, but genetic studues on inulinase were carried out in a few cases.
I isolated a species of microor ganisms which produced thermostable inulinase, and named it penicillium sp. HA-06. Inuliase produced by this strain was purified with ammonium sulfate, DEAE-cellulose and Sepharose 4B in partially purified state. The specific activity of this sample was 13 folds of that of culture fluid. identification of the product of hydrolysis by this enzyme, optimal temperature on enzyme activity, thermal stability, optimal pH, pH stability, effect of metal salts on inulinase were studied.
To obtain some information on the gene encoding inulinase in this strain, Southern hybridization was carried out. The genomc DNA was digested with several restriction enzymes, transferred to nitrocellulose and hybridization was carried out with the probe made of INU gene isolated from yeast Kluyveromyces sp. Hybribized band was identified in 9kb in EcoRI digestion. About 9 kb fragments were fooled, ligated in the EcoRI site of pUC18, and then transformed to JM109. With colony hybridization an clone which could hybridied with probe was detected. Now characterization of that fragment is going on.

목차 Contents

• 본문...8
• 인용문헌...33
• 논문발표실적 또는 계획...34
• 학위배출실적...34
• 연구비 항목별 지출내역...36