초록 ▼

재조합trp operon의 발현을 증대시키기 위하여 E. coli와 K. pneumoniae에 trpR?, tyrR?, ssd? 변이주들을 구성하였다. trp operon 과 aroF 유전자를 cloning하기 위한 유전자원으로 사용하기 위하여 feedback inhibition 저항성 변이주를 선별하고 cloning 하였다. 또한 재조합 trp plasmid 의 안정성을 증대 시키기 위하여 cer과 par 유전자를 재조합 trp plasmid에 도입하였다. 재조합 plasmid들은 tyrR? 숙주에서 가장 불안정하였고 , ce

재조합trp operon의 발현을 증대시키기 위하여 E. coli와 K. pneumoniae에 trpR?, tyrR?, ssd? 변이주들을 구성하였다. trp operon 과 aroF 유전자를 cloning하기 위한 유전자원으로 사용하기 위하여 feedback inhibition 저항성 변이주를 선별하고 cloning 하였다. 또한 재조합 trp plasmid 의 안정성을 증대 시키기 위하여 cer과 par 유전자를 재조합 trp plasmid에 도입하였다. 재조합 plasmid들은 tyrR? 숙주에서 가장 불안정하였고 , cer 유전자는 안정성을 증대시켰다. ssd? 변이는 valine 생성을 감소시키고 트립토판 생산성을 4배 증대시켰다.

Abstract ▼

In order to increase the expression of trp operon, tyrR?, trpR?, ssd? of E. coli and K.pneumoniae mutants were constructed. For the used trp and aroF genes source for cloning of trp operon and aroF gene, the genes with mutated to feedback inhibition registance were constructed in E. coli. Also, in o

In order to increase the expression of trp operon, tyrR?, trpR?, ssd? of E. coli and K.pneumoniae mutants were constructed. For the used trp and aroF genes source for cloning of trp operon and aroF gene, the genes with mutated to feedback inhibition registance were constructed in E. coli. Also, in order to increase the stability of recombinant trp plasmid, cer and par genes introduced in recombinant trp plasmid. The recombinant trp plasmids were very unstable in tyrR? host bacteria and cer gene was slightly increased the stability of recombinant trp plasmid. The ssd? mutation acused 4-fold increased in the tryptophan yield over ssd? strain and removed the by-product amino acid such as valine.

목차 Contents

• 1 서론...7
• 2. 재료 및 방법...11
• 1)재료...11
• (1) 사용균주와 plasmid...11
• (2) 배지...11
• (3) 시약 및 제한효소...11
• 2) 방법...11
• (1) trp$E^{FBR}$ 변이주 구성...11
• (2) aro$F^{FBR}$ 변이주 구성...13
• (3) rec$A^-$ 변이의 도입...13
• (4) L-serine deaminase defective(ss$d^-$) 변이주 선별...13
• (5) E.coli 염색체 및 plasmid DNA 분리 및 정제...14
• 가) 염색체 DNA의 분리와 정제...14
• 나) plasmid DNA 분리와 정제...14
• (6) 재조합 trp$E^{FBR}$ 및aro$F^{FBR}$ plasmid의 제조...14
• (7) 재조합 cer 및 par plasmid의 제조...14
• (8) 제한효소에 의한 DNA 절단 및 접합...14
• (9) 형질전환과 형질전환체의 선별...15
• (10) 조효소액의 제조...15
• (11) 효소 활성 측정...15
• 가) DAHP synthase 활성 측정...15
• 나) anthranilate synthase 활성 측정...15
• 다) tryptophan synthase 활성 측정...15
• 라) serine deaminase 활성 측정...15
• (12) 단백질 정량...15
• (13) 재조합 plasmid의 안정성 조사...15
• (14) Thin layer chromatography...16
• (15) Amino acid 분석...16
• 3. 결과...17
• 1) trp$E^{FBR}$ 변이주의 구성...17
• 2) aro$F^{FBR}$ 변이주 구성...17
• 3) trp$E^{FBR}$ operon의 cloning 및 확인...21
• 4) aro$F^{FBR}$ 유전자의 cloning 및 확인...21
• 5) 재조합 pBR322::partrp$E^{FBR}$ plasmid의 구성...21
• 6) 재조합 pBR322::certrp$E^{FBR}$ plasmid의 구성...21
• 7) 숙주박테리아의 유전적 특성에 따른 재조합 trp$E^{FBR}$ plasmid의 발현과 안정성...30
• (1) E.coli에서 재조합 trp plasmid의 발현...30
• (2) E.coli에서 재조합 trp operon plasmid의 안정성...30
• (3) K. pneumoniae에서 E.coli 재조합 pBR322-trp$E^{FBR}$plasmid의 발현...35
• (4) K. penumonia 유도체들에서 E.coli 재조합 trp$E^{FBR}$plasmid의 안정성...35
• 8) 재조합 pBR322-trp$E^{FBR}$aro$F^{FBR}$ plasmid의 발현과 안정성...35
• 9) 재조합 trp plasmid의 안정성에 대한 cer,par 유전자의 효과...41
• 10) 배양조건에 따른 재조합 trp plasmid의 안정성...41
• 11) 트립토판 생산성 검토...41
• 4. Reference...48