초록 ▼

대량의 L-아미노산 속에 존재하는 미량의 D-아미노산을 분리하여 미량정량하는 방법은 검출법도 좋아야 하지만 적어도 바탕선의 분리능이상이 되어야 한다. 따라서 cyclodextrin이 기반이 되는 β-Cyclodextrin(β-CD),(R)-또는 (S)-형의 Naphthylethylcarbamate-β-CD의 키랄정지상을 이용하여 아미노산의 분리에 성공했으나 위의 조건에 알맞는 경우는 제한적이었다. 또, β-CD에 octadecyl 기를 결합시켜 만든 octadecyl-β-CD를 C?? 칼럼에 코우팅한 경우도 시도했으나 키랄분리에는

대량의 L-아미노산 속에 존재하는 미량의 D-아미노산을 분리하여 미량정량하는 방법은 검출법도 좋아야 하지만 적어도 바탕선의 분리능이상이 되어야 한다. 따라서 cyclodextrin이 기반이 되는 β-Cyclodextrin(β-CD),(R)-또는 (S)-형의 Naphthylethylcarbamate-β-CD의 키랄정지상을 이용하여 아미노산의 분리에 성공했으나 위의 조건에 알맞는 경우는 제한적이었다. 또, β-CD에 octadecyl 기를 결합시켜 만든 octadecyl-β-CD를 C?? 칼럼에 코우팅한 경우도 시도했으나 키랄분리에는 적합하지 않았다. 따라서 우유 식품에 존재하는 아미노산을 진공증발법, 고상추출법 및 용매추출법 등을 통하여 전처리하고 단실화반응 (dancylation)시켜 HPLC 로 분리정량했다. HPLC의 분리정량법으로는 신속하고 간편한 비키랄/키랄분리쌍 컬럼법 (achiral/chiral coupled column)을 이용하여 아미노산의 역상 LC 분리와 column switching 을 통하여 연속적으로 키랄분리하여 검출하였다. 비키랄용 컬럼은 C?? column, 키랄분리는 Cu(N-benzyl-L-proline)? 킬레이트를 사용한 키랄이동상첨가법으로 정량했다. 이 방법으로는 시료속에 존재하는 12가지의 D-아미노산의 미량정량이 가능하나 시판 우유 속에서는 D-glutamic acid 와 D-alanine 만이 발견됐다. 또 β-CD 를 완충용액에 넣어 사용한 모세관 전기영동법과 새로 개발한 p-chloro-L-proline 이나 p-chlorobenzyl-L-hydroxyproline 의 구리착물을 이용한 키랄이동상 첨가법으로 많은 아미노산의 유도체난 유리 아미노산의 키랄 분리가 가능했다.

Abstract ▼

The microdetermination of D-amino acids in the excess of L-amino acids is required to have at least baseline resolution as well as to develop high secitivity of the detection. Cyclodextrin(CD) and its derivatized columns (i. e (R)-or(S)-naphtylethylc-arbamate-β-CD) was used to find the optimum separ

The microdetermination of D-amino acids in the excess of L-amino acids is required to have at least baseline resolution as well as to develop high secitivity of the detection. Cyclodextrin(CD) and its derivatized columns (i. e (R)-or(S)-naphtylethylc-arbamate-β-CD) was used to find the optimum separation of the amino acid enantioners derivatized with various derivatizing reagents. Limited numbers of the derivatized amino acids enantiomers are completely separated on these columns. An octadecyl-β-CD coated column prepared in the Lab. was not useful for the chiral separation. A chiral mobile phase additive with copper (Ⅱ) (N-benzyl-L-plorine)? chelate was also used to separate dancyl-amino acids in a commercial milk. This was accomplished by using a ligand chromatigraphic achiral/chiral coupled column with a column switching methods. Free amino acids were isolated from milk by vacuum evaporation, solvent extractin and solid phase extraction before derivatization with dancyl chloride. It was found that the determination of 16 different amino acids is feasible in the milk sample in a reversed phase LC and 12 D-amino acids aut of the 16 amino acids can be determined Sevaral % cocentration of D-glutamic acid and D-alanine were found in the milk sample. A capillary electro phoresis using a buffer solution with addition of β-CD and a new chiral mobile phase additive with copper(Ⅱ) (p-chloro-L-proline or p-chloro benzyl-L-hydroxy proline) complex are successfully used for the chiral separation of free amino acids and /or various derivatized amino acids.

목차 Contents

• I. 서론...8
• II. 실 험...12
• 1. 기기장치...12
• 2. 시 약...13
• 3. 아미노산의 유도체화 반응...13
• 4. 우유로부터 아미노산의 추출과 유도체화 반응...14
• 5. 리간드의 합성...15
• 6. 아미노산의 정성 및 정량법...18
• 7. Column-Switching system 을 이용한 정량법...18
• III. 결과 및 고찰...20
• 1. 우유에 존재하는 아미노산의 정량분석...20
• 2. Column-Switching system 을 이용한 D-아미노산의 정량...21
• 1)표준 DNS-아미노산의 키랄분리...21
• 2)우유시료에서의 D-아미노산의 분리정량...21
• 3. 모세관 전기영동법에 의한 단실 아미노산 거울상체의 분리...23
• 4. $\beta$-CD 및 그 유도체화된 키랄정지상에 의한 분리...24
• 5. Coated Chiral Stationary Phase(OCSP)의 제조와 이용...25
• 6. 염소치환 프로핀계 구리착물의 키랄이동상 첨가법...26
• 1)키랄 complex 농도의 영향...26
• 2)pH의 영향...26
• 3)리간드 종류의 영향...27
• 인용문헌...30
• 논문발표실적 또는 계획...70
• 학위배출실적...71
• 연구비 항목별 집행내역...72