초록 ▼

백삼(Panax ginseng C. A. Meyer, 4년근)을 가루로 한 다음petroleum ether로 24시간 추출후 감압농축시켜 인삼석유에텔추출물(GPE)로 하였다. 이때GPE의 수율은 평균 2.24%였다. 또한 GPE를 petroleum ether 소량에 녹이고 petroleumether:ether 용매계열로 silicage column chromatography에 의한 partition을 실시하여P1,P2,P3,P4,P5의 5개의 분획을 얻었다. 본 실험에서는 소핵생성

백삼(Panax ginseng C. A. Meyer, 4년근)을 가루로 한 다음petroleum ether로 24시간 추출후 감압농축시켜 인삼석유에텔추출물(GPE)로 하였다. 이때GPE의 수율은 평균 2.24%였다. 또한 GPE를 petroleum ether 소량에 녹이고 petroleumether:ether 용매계열로 silicage column chromatography에 의한 partition을 실시하여P1,P2,P3,P4,P5의 5개의 분획을 얻었다. 본 실험에서는 소핵생성 물질인N-methyl-N-nitrosource(MNU), benzo(a)Pyrene[B(a)P] 및 mitomycin C(MMC)를 이용하여 소핵생성 억제 실험을 하였다. 본 실험에서 사용한 소핵유발 물질 중 MNU는 1차 발암물질인 alkylating agent로 DNA에 작용하며, B(a)P는 2차 발암물질로서 대사활성 후DNA에 작용하는 물질이며 MMC는 DNA cross-linking agent이다. 상기의 5가지 분획중에서 MNU에 대해서는 GPE,P1,P2에서 억제효과가 나타났다. 한편, B(a)Pp에 대해서는GPE,P1,P2,P3,P4,P5 모두에서 억제효과를 나타내었다. MMC에 대해서는 GPE,P1,P2,P3,P4에서 억제효과가 나타났다. 그러나 여러 가지 활성을 보인 분획 중에서 여러가지 양성대조물질들에 대해서 가장 두드러져보이는 것은 P2였다. P2는 MMC, MNU,B(a)p 모두에 대해서 GPE와 유사한 억제경향을 보이면서 억제활성은 크게 나타났다. 따라서 P2가 GPE가 보이는 소핵생성억제효과에 깊은 관련이 있는 물질로 판단되었다. 이와같은 유전독성억제효과의 작용기전을 알기 위하여 B(a)P의 대사에 미치는 영향을 연구한결과 GPE와 P2는 S-9에 의해 유도된 B(a)P대사를 억제시켰으며, DNA-B(a)P binding도감소시켰다. 한편 MNU에 의한 DNA binding과 O6-methyl guanine 및 7-methylguanine 생성에 있어서도 억제적인 경향을 나타내었다. 따라서 GPE와 P2는 B(a)P와 같은 2차발암물질과 MNU와 같은 알킬화제에 의한 유전독성을 활성대사억제 및 methylation억제, DNA binding억제 등의 기전으로 감소시키고 있는 것으로 판단되었다. 또한, 인삼지용성성분의 항산화작용과 프리라디칼소거작용 및 이에 의한 산화적 유전독성억제효과등을검토하였다. GPE와 P2의 항산화효과는 Vit.E 보다 강한 활성을 나타내었다. 한편, 프리라디칼소거작용에 있어서도 GPE와 P2는 Vit.E보다 높게 나타났다. 또한, H2O2 및 KO2유도 DNA 손상에 대하여 억제적으로 작용하였다. 또한, H2O2 및 KO2유도 세포독성에대해서도 GPE와 P2는 약한 활성을 나타내었으며 GPE의 경우에는 고농도에서 약한 세포독성을 나타내었다. 이와 같은 결과들을 종합해볼 때 인삼지용성성분인 GPE와 P2는 항산화활성과 프리라디칼소거작용을 나타내었으며 H2O2는 KO2유도 DNA 손상에 대해서도 억제적으로 작용하여 이들에 의한 세포독성에 대하여 억제효과를 나타내었다. 한편, 소핵생성억제효과에서 가장활성이 좋았던 P2를 NMR과 GC/MS결과, aliphatic ketone류의 혼합물로서 주성분은 분자량 330과 386의 두 개물질이 함유되어 있는 혼합물이었으며 향후 계속적으로 분리동정이 필요한 물질이다.

Abstract ▼

Panax ginseng has been extensively used in the traditionaloriental medicine as a restorative, tonic and prophylatic agent. Specific aim of thisstudy was to develop a chemorpreventive agent from panax ginseng to be able tosuppress the genotoxicity and oxidative damages by reactive oxyg

Panax ginseng has been extensively used in the traditionaloriental medicine as a restorative, tonic and prophylatic agent. Specific aim of thisstudy was to develop a chemorpreventive agent from panax ginseng to be able tosuppress the genotoxicity and oxidative damages by reactive oxygen species, which areinvolved with cancer or aging.Petroleum ether extract of panax ginseng C.A. meyer(GPE) and its severalfractions(P1-P5) were tested for the evaluation of antigenotoxicity againstbenzo(a)pyrene[B(a)P], N-methyl-N-nitrosourea(MNU) or mitomycin C(MMC)-inducedmicronucleated reticulocytes in mouse peripheral blood. GPE and P2 showed moresignificant anticlastogenicity than other fractions.To elucidate the anticlastogenic action mechanism GPE and P2 againstbenzo(a)pyrene, alternation of benzo(a)pyrene metabolism was studied. GPE and P2inhibited benzo(a)pyrene metabolism in presence of S-9 mix and decreasedbenzo(a)pyrene-DNA binding in calf thymus DNA with S-9 mix. They also decreased[3H] N-methyl-N-nitrosourea induced DNA binding and methylation to 7-methylguanine and O6-methyl guanine adducts in calf thymus DNA by HPLC analysis.These results suggest that anticlastogenicity of GPE and P2 on the B(a)P orMNU-induced clastogenicity is due to decrease of DNA binding with B(a)P or MNU,the inhibition of metabolism with B(a)P and the Inhibition of methylation in DNA.GPE and P2 showed an antioxidative effect on the lipid peroxidation of ethyllinoleate with fenton's reagents and free radical scavenging effect to DPPH radicalgeneration. They also showed the suppressive effect of DNA damage withdose-dependant manner in COMET assay. Results from our study indicate that GPEand P2 are capable of suppressing the genotoxicity induced by B(a)P, MNU and MMC.They also are capable of protecting lipid peroxidation, and oxidative DNA damage.Therefore, GPE and P2 may be useful chemopreventive agents which are involved withcancer and aging.

목차 Contents

• 1. 서론...7
• 2. 연구방법...11
• 2-1 인삼석유에텔추출물의 제조와 세부분획...11
• 2-2 Animals...11
• 2-3 Cells...11
• 2-4 Micronucleus test...11
• 2-5 Total binding of MNU and analysis of alkylated purine bases in calf thymus DNA...11
• 2-6 Total binding of Benzo(a)pyrene to DNA...12
• 2-7 Analysis of Benzo(a)pyrene metabolites...12
• 2-8 Antioxidative effect...12
• 2-9 Free radical scavenging effect...12
• 2-10 Cytotoxicity...13
• 2-11 Single cell gel electrophoresis(SCGE)...13
• 2-12 통계처리...13
• 3. 연구결과...14
• 3-1 인삼지용성성분의 분리...14
• 3-2 인삼지용성성분들의 유전독성억제효과...14
• 3-2-1 소핵생성억제효과...14
• 3-2-2 GPE와 P2의 유전독성억제효과의 작용기전...23
• 3-3 인삼지용성성분의 항산화효과 및 산화적 DNA손상에 미치는 영향...26
• 3-3-1 항산화효과...26
• 3-3-2 프리라디칼소거작용...27
• 3-3-3 Oxidative DNA 손상에 미치는 영향...28
• 3-3-4 세포독성에 미치는 영향...29
• 3-4 분획물들의 구조분석...30
• 4. 고찰...34
• 5. 결론...36
• 6. 인용문헌...37
• 7. 연구수행관련 논문발표목록서...40
• 8. 자체평가서...41