초록 ▼

장내세균 및 세포내기생 병원성세균에서 phoP-phoQ 유전자를 클로닝하기 위하여 Escherichia. coli K 12 strain인 ANCK 10, Salmonella typhimurium LT2, Pseudomonas aeruginosa, Shigella dysenteriae, Enterobacter cloacae, Serratia marscescens, Proteus mirabilis 등의 장내세균과 Mycobacterium tuberculosis, M. bovis BCG드의 항산균 (acid-fast bacilli), 그

장내세균 및 세포내기생 병원성세균에서 phoP-phoQ 유전자를 클로닝하기 위하여 Escherichia. coli K 12 strain인 ANCK 10, Salmonella typhimurium LT2, Pseudomonas aeruginosa, Shigella dysenteriae, Enterobacter cloacae, Serratia marscescens, Proteus mirabilis 등의 장내세균과 Mycobacterium tuberculosis, M. bovis BCG드의 항산균 (acid-fast bacilli), 그리고 intracellular pathogenic bacteria인 Listeria monocytogenes 등을 대상으로 phoP-phoQ 유전자의 존재를 알아본 결과 장내세균인 E. coli, S. dysenteriae, alc E. cloacae는 S.typhimurium의 phoP 유전자와 hybridization을 한 반면, 세포내기생세균인 L. monocytogenes와 여러 항산균들은 S.typhimurium의 phoP- 유전자와 유사한 DNA 배열 을 갖고 있지 않았다. 이는 L. monocytogenes나 항산균들의 경우, phoP-phoQ operon에 의존하지 않는 어떤 다른 기전에 의해 이들 세균의 세포내생존이 간으한 것임을 제시한다. 반면에 세포내 생존은 할 수 없음에도 불구하고 phoP- 유전자가 존재하는 E. coli, S. dysenteriae, 및 E. cloacae중 S. dysenteriae 및 E. cloacae를 대상으로 phoP 유전자를 함유하는 DNA 단편의 크기를 Southem hybridization법에 의하여 분석하였다. S. dysenteriae의 경우 BamHI, EcoRI, EcoRV 혹은 HindIII 에 의하여 각각 16kb, 5.5 및 4kb, 6.5 kb, 혹은 26kb의 DNA 단편이 phoP를 함유함을 알 수 있었다. 세포내 생존이 불가능한 이들 장내세균에서의 phoP 유저자의 역할을 규영하기 위하여는 보다 많은 연구가 있어야 할 것이다.

Abstract ▼

The phop genes of various bacteria were analyzed which included shigella dysenteriae, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosa, Shigella dysenteriae, Enterobacter cloacae, Serratic marscescens, Proteus mirabilis, Mycobacterium tuberculosis, M. bovis BCG

The phop genes of various bacteria were analyzed which included shigella dysenteriae, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosa, Shigella dysenteriae, Enterobacter cloacae, Serratic marscescens, Proteus mirabilis, Mycobacterium tuberculosis, M. bovis BCG, and Listeria monocytogenes. Intracellular pathogenic bacterias such as M. tuberculosis. M. bovis BCG, and L. monocytogenes did not contain phoP-like DNA sequences. Several enteric bacteria, including S.dysenteriae, E. cloacae, E. coli, and S. typhimurium , were revealed to have phoP-like sequences. These results suggest that these intracellular pathogenic bacteria have phoP-like sequences. These results suggest that these intracellular pathogenic bacteria have different mechanism of intracellular survival from S.typhimurium, which are not dependent on phoP gene. The sizes of phoP-containing DNA fragments were analyzed by Southem hybridization. The phoP-containing fragment of S.dysenteriae were 16kb, 5.5 and 4 kb, 6.5 kb or 26kb, when digested by BamHI, EcoRI, EcoRV, and HindIII, resxpectively. The phoP-containing fragment of E. cloacae were 30kb, 11kb, 5.5kb, or 4.7 and 1.33 kb, when digested by BamHI, EcoRI, EcoRV, or HindIII, respectively. Our results suggested that phoP-phoQ operons are highly conserved in enteric bacteria, thoough they could not survive in intracellular environment. The role of these genes in enteric bacteria should be further studied.

목차 Contents

• 제출문...2
• 요약문(당초계획서, 국문)...3
• Summary(당초계획서, 영문)...4
• 요약문 (최종보고서, 국문)...5
• Final Report Summary (최종보고서, 국문)...6
• (1) 연구재료 및 방법...8
• (a) 연구재료...8
• 가. 균 주...8
• 나. plasmids...8
• (b) 방법...8
• 가. 각 세균에서 염색체 DNA의 분리...8
• 나. phoP probe의 준비...9
• 다. 각 세균에서 phoP 및 phoQ 유전자와 유사한 DNA배열의 존재확인...9
• 라. phoP유사 DNA를 함유하는 DNA단편의 크기확인...9
• 마. Genomic library의 작성...10
• 바. Functional complementation에 의한 screening...10
• (2) 결과...11
• (a) 각 균주의 배양과 염색체 DNA의 분리...11
• (b) 분리된 염색체 DNA들의 순도 및 농도 측정...13
• (c) Probe DNA의 준비...13
• (d) Probe DNA를 함유하는 pSM003의 제한효소 소화, polyacrylamide gel 전기영동, 및 Probe DNA의 용출...16
• (e) Enhanced chemiluminescence법에 의한 Probe DNA의 표식...16
• (f) Dot blot hybridiation에 의한 phoP유전자의 검출...16
• (g) Southern hybridiation에 의한 phoP 함유 DNA단편의 분석...18
• (h) Functional complementation을 통한 phoP의 cloning...21
• 인용문헌...22
• 논문발표실적 또는 계획...25
• 학위배출실적...26
• 연구비 항목별 집행내역...27