초록 ▼

DNA 의 인지부위와 절단부위가 서로 다른 제한효소인 Class-IIS제한 효소의 성질을 이용하여 point mutation을 검진하느ㅌ 방법을 연구하였다. 한쪽 끝은 FokI 제한효소의 double strand (ds)인지부위를 갖고 또 다른 한쪽은 single strand를 갖도록 하여 hairpin구조를 갖는 oligomer를 만들어 FokI이 oligomer의 ds와는 결합은 하되 절단부위가 single strand라 절단을 못하도록 고안하였다. 이 oligomer의 single strand 부위를 유전자 DNA의 검

DNA 의 인지부위와 절단부위가 서로 다른 제한효소인 Class-IIS제한 효소의 성질을 이용하여 point mutation을 검진하느ㅌ 방법을 연구하였다. 한쪽 끝은 FokI 제한효소의 double strand (ds)인지부위를 갖고 또 다른 한쪽은 single strand를 갖도록 하여 hairpin구조를 갖는 oligomer를 만들어 FokI이 oligomer의 ds와는 결합은 하되 절단부위가 single strand라 절단을 못하도록 고안하였다. 이 oligomer의 single strand 부위를 유전자 DNA의 검진부위에 complementary되게 만들어 정상인 DNA와는 완전히 match가 되고 변이주는 mismatch가 되도록 하여 FokI이 이들을 구별하며 절단할 수 있는 지를 연구하였다. FokI은 절단부위에 mismatch가 1개 있는 경우 절단의 정도에 영향을 받지 않았으며 mismatch가 2개인 경우에도 2개의 mismatch가 연속적으로 있는 경우보다 mismatch 가 서록 떨어져 있는 경우 절단효율이 더 크게 감소하였다. 특히 떨어져있는 2개의 mismatch가 FokI의 절단부위에 위치한 경우 FokI은 DNA를 거의 절단하지 않았다. 본 실험결과 Class-IIS제한효소인 FokI을 이용하고 이에 맞게 hairpin구조의 oligomer를 만들어 mismatch가 절단지점에 놓이도록 만들어 point mutation에 기인한 유전병 검진방법으로 이용하면 신속하면서 정확한 검진방법이 될 수 있다.

Abstract ▼

A method for detection of genetic diseases caused by point mutation was developed using a Class-IIS restriction enzyme, FokI which recognition site is separate from the cutting site. A special hairpin acapter contatining both a double strand(ds) recognition domain and a single strand (ss) somain w

A method for detection of genetic diseases caused by point mutation was developed using a Class-IIS restriction enzyme, FokI which recognition site is separate from the cutting site. A special hairpin acapter contatining both a double strand(ds) recognition domain and a single strand (ss) somain was designed. FokI bound to the ds domain of such an adapter, but could not cleave the ss domain unless it was paired with a complementary region of the target ssDNA. By specifying the proper complementary sequence of the ss domain in the adapter, we could distinguish the mutation DNA from wild type DNA depending on the number of mismatches introduced at the cutting region, FokI could cut the mismatched ds DNA very efficiently regardless of the location of the mismatch on the cutting region. More than two mismatches, however, were introduced, the FokI cutting decreased dramatically; especially FokI did not cut the DNA when the two mismatches introduced separate and one of them was placed at either cut site.

목차 Contents

• 5. 본문...8
• 6. 인용문헌...32
• 7. 연구인력 활용배출 및 연구실적...34
• 8. 연구비 집행내역...35