초록 ▼

본 연구는 사람의 피부 편평상피세포암에서 기원한 SCC 13 세포주의 raft culture를 이용하여 calcipotriol이 편평상피암세포의 증식 및 분화에 미치는 효과를 실험한 것이다. Calcipotriol의 농도를 10??-10??M로 하여 배양액에 첨가하였을 때 SCC 13 세포주에서 유도되는 최종 분화의 정도를 형태학적 관찰, 면역조직화학염색, immunoblotting등으로 관찰하였다. 먼저 형태학적 변화를 살펴보면 raft culture 상층부에 과립세포층이 출현하였으며 핵이 없고 세포질이 풍부하며 호산성으로 염

본 연구는 사람의 피부 편평상피세포암에서 기원한 SCC 13 세포주의 raft culture를 이용하여 calcipotriol이 편평상피암세포의 증식 및 분화에 미치는 효과를 실험한 것이다. Calcipotriol의 농도를 10??-10??M로 하여 배양액에 첨가하였을 때 SCC 13 세포주에서 유도되는 최종 분화의 정도를 형태학적 관찰, 면역조직화학염색, immunoblotting등으로 관찰하였다. 먼저 형태학적 변화를 살펴보면 raft culture 상층부에 과립세포층이 출현하였으며 핵이 없고 세포질이 풍부하며 호산성으로 염색되는 세포가 다수 출현하였다. 이러한 형태학적 변화와 일치하여 각질형성세포의 분화표식자가 되는 단백질인 케라틴 1, involucrin, filaggrin의 발현이 raft culture 상층부에서 증가되는 것이 면역조직화학 염색에서 관찰되었다. Immunoblotting 분석에서도 이러한 단백질의 발현이 증가됨을 확인하였다. Calcipotriol의 농도를 10??-10??M로 하여 배양액에 첨가하였을 때 raft culture한 SCC 13 세포에서 기저세포의 표식자가 되는 단백질인 케라틴 14, 표피성장인자 수용체, fibronection 수용체의 발현에 미치는 효과를 검색하기 위해 면역조직화학 염색과 immunoblotting을 시행하였다. Immunoblotting을 시행한 결과 케라틴 14의 양은 상당히 증가되었으며 표피성장인자 수용체의 양은 약간 증가되었고 fibronectin 수용체에는 커다란 변화가 없었다. 그러나 면역조직화학 염색에서 이들 기저새포의 표식자를 발현하는 세포의 수는 감소되어 있었으며 이 세포들의 위치는 raft culture에서 가장 안쪽에 국한되어 있었다. 또한 본 연구자들은 SCC 13 세포주를 submerged culture한 배양액에 calcipotriol을 첨가하고 첫 16시간동안 표피 성장인자 수용체의 생합성 양을 면역침전법으로 측정하고 24시간 동안 [?H]-thymidine incorporation을 관찰한 결과 표피성장 인자 수용체의 생합성은 증가하나 [?H]-thymidine incorporation은 감소하는 것을 관찰하였다. 이러한 결과는 calcipotriol이 표피의 여러 표식자가 되는 단백질 발현에 특이하게 영향을 준다기보다 SCC 13 세포주에서 저해되어 있는 세포의 증식 및 분화 조절에 복합적으로 작용한다는 것을 시사한다. 결론적으로 본 연구결과는 calcipotriol이 사람 피부의 편평상피세포암의 강력한 분화 유도자로서 앞으로 임상에서 이용 가능성이 있다고 하겠다.

Abstract ▼

This study investigated whether calcipotriol, a novel synthetic derivative of vitamin D? has the ability to corect defects in the control of proliferation and differentiation of human squamous carcinoma cells using a three dimensional culture(raft culture) of SCC 13 cell line. When calcipotriol at

This study investigated whether calcipotriol, a novel synthetic derivative of vitamin D? has the ability to corect defects in the control of proliferation and differentiation of human squamous carcinoma cells using a three dimensional culture(raft culture) of SCC 13 cell line. When calcipotriol at concentrations 10??-10??M was applied to the culture medium during entire period of the raft culture, considerable enhancement in terminal differentiation was observed. It was supported by the appearance of anucleareosinophilic cells and granular cells in their upper cell layers. Immunohistochemical staining with antisera to a variety of differentiation-marker proteins resulted in marked increase of keratin 1, involucrin, and filaggrin expressing cells in upper cell layers, which is well correlated with those morphologic observations. Their elevated expressions at protein level were also confirmed by immunoblotting analysis. Calcipotriol also stimulated basal cell marker proteins such as keratin 14 and EGF receptor. However, numbers of basal marker expressing cells were markedly reduced and their localization within the raft culture was mainly restricted in the inner most cell layer. In addition, calcipotriol considerably inhibited [?H]-thymidine incorporation of SCC 13 cells at 24 hours after its treatment. Those results suggest that calcipotriol exerts complex effects on the regulation of proliferation and differentiation inherently impaired in SCC 13 cells rather than specifically affects the expression of each marker protein. In summary, our findings provide an evidence that calcipotriol can be a potent differentiation inducer in human squamous cell carcinoma for future clinical application.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...2
• 요약문 ...3
• SUMMARY ...4
• 목차 ...7
• 1. Title...8
• 2. Introduction...9
• 3. Materials and Methods...11
• chemicals...11
• Raft culture of SCC 13 cell line...11
• Morphological examination and immunohistochemistry...11
• Immunoblot analysis...12
• Biosynthetic labeling with [$^{35}S$] methioninc and immunoprecipitation...13
• [$^3H$] Thymidine incorporation...13
• 4. Results...13
• Calcipotriol stimulates terminal differentiation of the SCC 13 raft culture based on morphological examination...13
• Calcipotriol induces expression of terminal differentiation-associated proteins in the suprabasal layer of SCC 13 raft culture...14
• Calcipotriol restricts K14, EGF-R, and FN-R expressin cells to innermost cell layer of the raft culture and stimulate their expression at protein level...15
• Calcipotriol inhibited [$^3H$]thymidine incorporation but stimulated EGF-R biosynthesis in submerged culture of SCC 13 cell lines...17
• 5. Discussion...18
• 6. Figures...20
• 7. Table...26
• 8. References...27