초록 ▼

지렁이의 표피에서 항균 펩티드를 얻기위해, 지렁이 추출액을 얻어 항균력 존재 유무를 확인한 후에 확인이 되어, 지렁이 추출액을 대량으로 얻어 이로부터 항균 펩티드를 여러 생화학적인 방법으로 정제했다. 정제한 항균펩티드의 N-말단 아미노산 서열 분석을 통해 새로운 물질인가를 탐색하였고, 항균력을 기존의 보고된 항균성 펩티드와 비교하여 과연 보다 우수한 항균력을 지니고 있는가를 밝혔고 보다 우수한 항균력을 지니고 있어 이 신규 항균 펩티드의 cDNA 클로닝을 시도하였다. 1) 지렁이로부터 순수한 항균 펩타이드의 분리 지렁이의 추출액은

지렁이의 표피에서 항균 펩티드를 얻기위해, 지렁이 추출액을 얻어 항균력 존재 유무를 확인한 후에 확인이 되어, 지렁이 추출액을 대량으로 얻어 이로부터 항균 펩티드를 여러 생화학적인 방법으로 정제했다. 정제한 항균펩티드의 N-말단 아미노산 서열 분석을 통해 새로운 물질인가를 탐색하였고, 항균력을 기존의 보고된 항균성 펩티드와 비교하여 과연 보다 우수한 항균력을 지니고 있는가를 밝혔고 보다 우수한 항균력을 지니고 있어 이 신규 항균 펩티드의 cDNA 클로닝을 시도하였다. 1) 지렁이로부터 순수한 항균 펩타이드의 분리 지렁이의 추출액은 B. subtilis에 강한 항균력을 나타내었으나 이 추출액에 단백질 분해효소인 Protreinase K를 처리하면 항균력이 사라졌다. 이로부터 항균 펩타이드의 존재를 확인하였고 지렁이의 추출액을 heparin column으로 일차 분획을 하였다. Heparin column을 이용하여 추출액에 존재하는 여러 종류의 펩타이드들로부터 수종의 펩타이드들만을 분획하였다. Heparin column으로 분획된 펩타이드들은 다시 C18 reversed-phase HPLC으로 순수한 펩타이드로 분리되어 그중 항균력을 가진 항균 펩타이드를 선발하였다. 분리된 항균 펩타이드는 90% 이상의 순수하였다. 분리된 항균 펩타이드의 분자량을 MALDI 질량분석기를 이용하여 측정한 결과 6902 dalton임이 확인되었다. 또한 자동아미노산서열기를 이용하여 분리된 항균 펩타이드의 아미노산서열을 Arg-Gln-Arg-Val-Glu-Glu-Leu-Ser-Lys-Phe-Ser-Lys-Lys-Gly -Ala-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Lys로 밝혔고 이 아미노산서열을 기존에 알려져 있는 다른 항균 펩타이드들의 아미노산 서열과 비교한 결과 분리된 항균 펩타이드가 새로운 항균 펩타이드임을 확인하였다. 2) 지렁이 항균펩타이드의 항균능력 C18 reverse-phase HPLC로 순수 분리한 항균 펩타이드는 몇 분안에 대부분의 B. subtilis를 죽였다. 또한 분리된 항균펩타이드는 넓은 범위의 미생물에 대하여 강한 항균력을 나타내었고 머게이닌이라는 항균 펩타이드와 비교하여 약 2배이상 강한 항균능력을 가짐을 확인하였다.

Abstract ▼

A potent and structurally novel antimicrobial peptide was isolated and characterized from the earthworm. The 69-amino acid peptide, named misgurin, was purified to homogeneity by a heparin-affinity column, C18 reverse-phase and gel-permeation high-performance liquid chromatography. The N-terminal 21

A potent and structurally novel antimicrobial peptide was isolated and characterized from the earthworm. The 69-amino acid peptide, named misgurin, was purified to homogeneity by a heparin-affinity column, C18 reverse-phase and gel-permeation high-performance liquid chromatography. The N-terminal 21-amino acid sequence of misgurin, which was determined by an automated amino acid sequencer, was Arg-Gln-Arg-Val-Glu-Glu-Leu-Ser-Lys-Phe-Ser-Lys-Lys-Gly -Ala-Ala-Ala-Arg-Arg-Arg-Lys. Comparison of the amino acid sequence with those of other known antimicrobial peptides revealed that this peptide is a novel antimicrobial peptide. This pepttide showed strong antimicrobial activities in vitro against a broad-spectrum of microorganisms and was found to be more potent than magainin 2. However, no significant hemolytic activity was observed.

목차 Contents

• 제 1 장 서론...8
• 제 2 장 국내$ \cdot $외 기술개발 현황...10
• 제 3 장 연구개발수행내용 및 결과...11
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외 기여도...16
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...17
• 제 6 장 참고문헌...18