초록 ▼

이 연구는 우리나라 톡소포자충의 병원성, 면역학적 및 분자생물학적 특성을 규명하고자 시행하였다.
제1세부과제에서는 우리나라에서 톡소포자충 유행 및 감염이 매우 낮거나 거의 사라지지 않았나 하는 의문점에 대한 해결책의 일환으로 우리나라 소아를 대상으로 간접 latex 응집반응을 이용하여 혈청내 혈청가를 검사하였다. 1990년 9월 30일부터 11월 30일까지 3개월간 서울대학교 어린이병원에 내원한 715명의 혈청을 채취하였으며, 양성자들의 지역적 분포, 나이 및 성별 차이 및 다른 질병과의 상관관계를 분석하고자 하였다.

이 연구는 우리나라 톡소포자충의 병원성, 면역학적 및 분자생물학적 특성을 규명하고자 시행하였다.
제1세부과제에서는 우리나라에서 톡소포자충 유행 및 감염이 매우 낮거나 거의 사라지지 않았나 하는 의문점에 대한 해결책의 일환으로 우리나라 소아를 대상으로 간접 latex 응집반응을 이용하여 혈청내 혈청가를 검사하였다. 1990년 9월 30일부터 11월 30일까지 3개월간 서울대학교 어린이병원에 내원한 715명의 혈청을 채취하였으며, 양성자들의 지역적 분포, 나이 및 성별 차이 및 다른 질병과의 상관관계를 분석하고자 하였다. 양성 항체가는 1:32로 설정하였다. 연구 결과, 톡소포자충 항체 양성자가 대상 소아에서 총 6.0％였으며, 양성자의 44.4％가 선천성기형, 변형 및 염색체 이상의 질환을 갖고 있다는 매우 흥미로운 결과를 얻을 수 있었다. 이는 선천성 질환이 있는 소아가 톡소포자충에 쉽게 감염될 수 있다는 가능성을 강력히 시사하였다.
제2세부과제에서는 톡소포자충의 강독주 및 약독주를 감염시켰을 때 숙주 면역 반응의 차이를 규명하고자 강독주인 RH주와 약독주인 Beverley주를 마우스에 감염시키고 혈액 및 조직을 일정 간격으로 채취하여 ELISA, Western blot, PCR을 이용, 항원, 항체의 검출 시기 및 양상을 알아보았다. 강독주를 감염시킨 마우스의 혈청내 순환 항원 및 혈액내 충체는 감염 2일부터 검출되었으며, 혈액, 간, 뇌 및 비장에서 감염 3일부터 충체 특이 DNA band를 볼 수 있었다. 약독주 감염 마우스의 혈청내 순환 항원은 감염 10일부터 35일까지 검출되었다. 강독주 감염 마우스에서는 항체는 검출되지 않고 항원이 감염 2∼3일부터 검출되었으며, 약독주 감염 마우스는 감염 10일부터 특이 항원 및 항체 반응을 나타내어 충주에 따라 숙주에서 뚜렷한 면역학적 반응의 차이가 있음을 알 수 있었다.
제3세부과제에서는 톡소포자충의 P30 유전자를 중합효소반응(PCR)으로 증폭시켜 plasmid에 삽입한 후 형질변형시킨 Escherichia coli에서 발현시켜 융합단백질의 형태로 다량 얻고자 하였다. P30 유전자를 얻은 후 이를 Eco RI으로 처리하여 pGEX-4T-1 plasmid에 삽입시키고, 이를 E. coli의 JM105주에 형질변형시킨 후 각 colony에서 plasmid를 분리하고 정위치 삽입을 확인한 후 IPTG를 첨가하였더니 GST와 P30의 융합단백질인 약 50KDa의 단백질이 다량 발현되는 것을 확인하였다. 이 단백질은 E. coli 내에서 불용성의 inclusion body로 발현되어 순수하게 분리되지는 않았으나, GST detection kit로 융합단백질임이 확인되었으며, Western blot에서 음성 및 양성으로 판정된 혈청에 대해서 항원성이 있었다.

Abstract ▼

This study was performed to observe the pathogenicity, immunological and molecular biological characteristics of Toxoplasma gondii Korea strain.
The first subject was to study on the seropositive rate of T. gondii among children group using indirect latex agglutination test. From Sept. to Nov.

This study was performed to observe the pathogenicity, immunological and molecular biological characteristics of Toxoplasma gondii Korea strain.
The first subject was to study on the seropositive rate of T. gondii among children group using indirect latex agglutination test. From Sept. to Nov. 1990, serum samples of a total of 715 children patients in Seoul National University Hospital were collected and tested for T. gondii antibody. The total seropositive rate was 6.0％, and there was an increasing tendency of the positive rate according to increase of age. Their residence was variable ; Seoul, Kyonggi, and others. An interesting finding was that 44.4％ of the seropositive cases were combined with congenital diseases such as heart, extremeity or chromosomal anomalies. It was strongly suggested that pediatric patients with congenital diseases are more susceptible to T. gondii infection than children.
The second subject was to clarify the difference of host immune responses to T. gondii infection by ELISA, western blot, and PCR. When virulent strain (RH tachyzoites) was infected to mice, circulating antigen and organisms were detected in the blood from 2 days post-infection, and from 3 days Toxoplasma-specific DNA bands were found from the blood, liver, brain, and spleen. Antibodies were not detected from RH-infected mice since they were dead in 7 days post-infection with less virulent strain(Beverley cysts). The results suggested that there should be a marked difference in the host immune responses to different virulence of T. gondii strain infection.
The third subject was to amplify the gene encoding P30 membrane protein of T. gondii using PCR and expression in E. coli as a fusion protein. After the P30 protein was obtained, it was treated with Eco R1 and inserted into plasmids. when the plasmids were isolated, and IPTC was added, abundance of 50 kDa protein, i.e., the fusion protein of GST and P30, was produced. This product was unsoluble, but identified using GST-detecting kit. The protein revealed antigenicity when analyzed by western blot.

목차 Contents

• 목 차...13
• 총괄연구과제...15
• 서 론...16
• 재료 및 방법...19
• 결 과...26
• 결 론...32
• 논문목록서...34
• 제1세부과제...35
• 서 론...36
• 재료 및 방법...40
• 결 과...42
• 고 찰...52
• 결 론...57
• 논문목록서...63
• 총 평...64
• 제2세부과제...65
• 서 론...66
• 재료 및 방법...68
• 결 과...73
• 고 찰...84
• 결 론...87
• 논문목록서...91
• 총 평...92
• 제3세부과제...93
• 서 론...94
• 재료 및 방법...96
• 결 과...98
• 고 찰...110
• 결 론...112
• 논문목록서...116
• 총 평...117