초록 ▼

■ Na, K-ATPase와 HRF의 결합에 관여하는 신호전달분자나 조절물질을 Co-imunoprecipitation, pull down assay를 통해서 얻거나 yeast tow hybrid 방법으로 알아내었다.
■ HRF가 인산화되는 부위와 어떤 isoform에 의해서 인산화되는지를 확인
■ 인산화되는 부위를 탈인산화시키는 효소를 동정
■ HRF 결합 단백질을 yeast tow-hybrid 방법으로 동정
■ Transgenic mice의 이용하여 DP세포에서 CD8 SP로의 분화를 관찰하였으며, 본 연구

■ Na, K-ATPase와 HRF의 결합에 관여하는 신호전달분자나 조절물질을 Co-imunoprecipitation, pull down assay를 통해서 얻거나 yeast tow hybrid 방법으로 알아내었다.
■ HRF가 인산화되는 부위와 어떤 isoform에 의해서 인산화되는지를 확인
■ 인산화되는 부위를 탈인산화시키는 효소를 동정
■ HRF 결합 단백질을 yeast tow-hybrid 방법으로 동정
■ Transgenic mice의 이용하여 DP세포에서 CD8 SP로의 분화를 관찰하였으며, 본 연구에서는 CD8 SP세포만 분화 가능한 TCR transgenci mice모델을 선택하여 이들 thymocytes에서 CD8 SP를 depletion한 thymocytes를 이용, soluble factors에 의해 CD8 SP가 분화되는지를 확인하였다.
-Soluble factors에 의한 Thymocyte의 분화측정을 위하여, cytokines(IL-2, IL-4, IL-10, INF-r 등)들은 시제품을 구입하여 이들의 단독 혹은 combinatory effects를 DP세포를 이용하여 확인하였다. Rat derived Con A sup은 Rat splenocytes를 Con A로 자극하여 배양하여 얻은 supernant를 사용하였다.
-Cell division assay를 통하여 in vitro에서 원하는 세포를 CFSE dye로 labeling하여 세포 분열 시 CFSE dye의 감소를 측정함으로써 몇 번 dividing 했는가를 Flow cytometry를 이용하여 측정하였다.
-Apoptosis analysis를 수해하였으며, in vitro 배양시 나타나는 thymoyctes의 programed cell death process를 cell cycle analysis 방법을 이용하여 Flow cytometry상에서 apoptosis percent를 결정하였다.
■ Glutamate 수용체 효능제(NMDA, kainate)의 뇌내 투여에 의한 흥분성독성(excitotoxicity) 유발상태에서의 oxidative stress와 뇌신경세포 변화를 관찰하고 이에 대한 melatonin의 in vivo 효과를 조사하기 위해 Cu, Zn SOD 활성과 반응성 산소 유리기에 의한 지질과산화를 측정함으로서 melatonin 투여에 의한 항산화 효소의 활성변화와 반응성 산소 유리기의 생성 변화를 평가하고, 선조체 신경활성의 지표로 사용되는 choline acetyltransferase (ChAT)의 활성 측정 및 cresyl violet을 이용한 뇌 조직 염색실험을 시행.
■ LPS-유도된 뇌조직에서의 산화적 스트레스를 관찰하고 그에 대한 NOS/GC 저해제의 영향을 조사하기 위해 복강내 투여된 LPS 처리 동물의 뇌 내로 NOS/GC 저해제의 직접 주입에 의한 ROS 생성 및 지질 과산화 변화를 측정.
■ 6-Hydroxydopamine으로 유도된 deprenyl의 도파민 신경 병변쥐의 뇌내 도파민 고갈에 대한 1-deprenyl의 효과를 조사하기 위해 1-deprenyl을 투여한 후 정상쥐 및 선조체내 DA 고갈을 일으킨 파킨슨씨병 모델 병변쥐에서 뇌부위별로 DA, 5-HT 및 대사체들의 함량변화를 조사
-SY-5YSY neuroblastoma 및 PC12 세포에서 독성물질에 의한 독성 유발여부는 MTT 분석 또는 형태학적으로 관찰하고 산소유리기 형성을 2,7-dichlorofluorescein(DCFH)를 이용한 FACS분석으로 측정
■ Racl의 신호전달체계에서의 역할 및 target molecule등을 발견하였다.
■ Proteomics를 이용한 새로운 molecule의 확인기술을 확보하였다.
■ 연구의 범위는 단백질의 형광 소멸시간 및 비등방성 측정으로 rac 단백질의 형광 소멸 시간 및 비등방성 측정을 통한 rac 단백질의 tryptophan 연구와 caspase 단백질의 tryptophan 형광 소멸시간 및 소광현상 측정을 통한 caspase 단백질의 active site 부근에서의 미세구조 연구를 하였다.

Abstract ▼

In this study, effects of potential neuroprotective agents (melatonin and 1-deprenyl) on cellular changes induced by several toxic conditions in animal models and neuronal cell lines were examined First, whether melatonin protects against oxidative stresses and neuronal damage by glutamate receptor

In this study, effects of potential neuroprotective agents (melatonin and 1-deprenyl) on cellular changes induced by several toxic conditions in animal models and neuronal cell lines were examined First, whether melatonin protects against oxidative stresses and neuronal damage by glutamate receptor agonists and LPS in rat striatum was examined. Melatonin micro-implant protects against rat striatal damages mediated by glutamate receptors, both non-NMDA and NMDA receptors, and its protective effects are comparable to those of DNQX and MK801 which are the KA and NMDA-receptor antagonists. Intraperiteneal administration of LPS (2 mg/kg) significantly increase in both ROS formation and lipid peroxidation in rat brain. Intrastriatal pretreatment of melatonin blocked LPS-induced ROS formation whereas NOS or soluble GC inhibitors (NAME, DPI, ODQ) produced no significant effects rat striatum, indicating the involvement of LPS-induced oxidative stress independent of NOS/cyclic GMP pathway. Whethere 1-Deprenyl protects against dopamine depletion neurotoxicity and Oxidative Stress by 6-Hydroxydopamine was also exmanined in rat striatum and SH-SY5Y neuronal cells. Pretreatment of 1-Deprenyl, a MAO-B inhibitor, prevented 6-OHDA-induced depletion of dopamine and its metabolites in rat striatum and protected against 6-OHDA-induced neurotoxicity and oxidative stress in SH-5YSY cells that are known to lack MAO-B activity. These results indicate that the neuroprotective effect of 1-deprenyl, possibly do its increased scavenger activity, through the mechanism independent of MAO-B inhibition. In order to investigate whether the action of melatonin and 1-deprenyl is involved in caspase activity, caspase(-3) activity was measured by evaluation of the cleavage of poly (ADP-ridose) polymerase (PARP) by employing anti-PARP antibody in SH-5SY cells. Both melatonin and 1-deprenyl did not show any changes in 6-OHDA-induced cleavage of PARP, indicating no effect of 1-deprenyl on 6-OHDA-induced caspase-3 activation in SH-5SY cells.

목차 Contents

• 제 1 장 서론...15
• 제 2 장 국내외기술개발 현황...20
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...22
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도...53
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...54
• 제 6 장 참고문헌...55