초록 ▼

I. 생체내 정보전달의 기전최근 세포 외부의 신호를 세포내로 전달하는데 관여하는 많은 단백질들이 밝혀지게 되었고 그들 단백질과 세포막에 존재하는 수용체와의 상호작용에 관한 연구가 활발해지고 있다. 특히 platelet-derived growth factor(PDGF) 수용체와 결합하는 phopholipase C-$\gamma$1(PLC-$\gamma$1), GAP, P13K등을 대상으로 하는 각종 연구가 활발한 상태인데 본 연구에서는 이들중 PLC-$\gamma$1을 대상물

I. 생체내 정보전달의 기전최근 세포 외부의 신호를 세포내로 전달하는데 관여하는 많은 단백질들이 밝혀지게 되었고 그들 단백질과 세포막에 존재하는 수용체와의 상호작용에 관한 연구가 활발해지고 있다. 특히 platelet-derived growth factor(PDGF) 수용체와 결합하는 phopholipase C-$\gamma$1(PLC-$\gamma$1), GAP, P13K등을 대상으로 하는 각종 연구가 활발한 상태인데 본 연구에서는 이들중 PLC-$\gamma$1을 대상물질로 하여 이 단백질중에서 특히 수용체와의 상호작용에 직접적인 역할을 하는 Src-homology region 2(SH 2)를 분자생물학적인 방법을 이용하여 대장균 system에서 발현시키고자 하였다.또한 세포의 성장과정중 신호전달과정의 흐름을 파악하는데 특히 세포조절 과정에 있어서의 second messenger인 인지질들의 역할에 관하여 많은 관심이 집중되고 있다. 따라서 생체시료중에서 세포의 조절과정중 인지질을 연구하기 위해서는 빠르고 감도가 좋은 분석방법이 요구되어진다. 지금까지는 주로 크로마토그래피법이나 전기영동법을 이용한 분석방법들이 행하여졌다$.^{1)-4)}$ 그러나 이들 방법은 유도체화나 방사성 동위원소를 이용하는등의 시간적, 경제적으로 많은 시간 및 비용이 소요되므로 본 연구에서는 최근 개발된 Capillary Electrophoresis (CE)를 이용하여 인지질의 일종인 phosphatidylcholine (Lecithin)을 정확하고 효율적인 방법으로 분석하고자 시도하였다.II. 싸이토그롬 P-450에 의한 약물대사의 폴리모피즘최근 들어 싸이토크롬 P-450에 의한 약물대사의 폴리모피즘 연구의 중요성이 점차로 증가되고 있는데, 이는 치료시 약물의 반응이나 독성 또는 부작용에 밀접한 관계가 있기 때문이다. 싸이토크롬 P-450 효소가 관여하는 약물대사의 인종적 폴리모피즘에는 debrisoquine type과 mephentoin type 두가지를 일반적으로 들 수 있다. Debrisoquine type에 관련되는 약물중 Metoprolol이 있는데, Metoprolol은 racemic mixture로 시판되고 있다. 메토프롤롤은 주로 O-demethylation, α-hydroxy-metoprolol 및 N-dealkylation등의 산화적 경로를 통해 대사되는데, 사람의 경우 투여량의 10%가 α-hydroxymetoprolol로 대사되며, 투여량의 65% 정도는 O-demethylmetoprolol로 대사된 다음 더욱 더 산화되어 Carboxylic acid로 대사된다. 이 메토프롤롤의 산화적 대사는 debrisoquine type의 인종적 폴리모피즘이 있는데 싸이토크롬 P-450 IID6가 관여한다고 알려져 있다.본 연구에서는 생체에서 R과 S 메토프롤롤 대사체를 가스크로마토그래피/질량분석기에 의해 분석하는 법을 확립하고, 인종적 폴리모피즘에 관련된 연구를 위하여 예비실험으로 Human liver를 이용하여 메토프롤롤 대사체의 stereoselectivity에 대한 연구를 하고자 하였다.

Abstract ▼

I. Mechanism of Signal TransductionRecently, several signalling proteins have been identified and actively investigated regarding the protein - protein interaction with the membrane receptors. Especially the interaction of platelet-drived growth factor(PDGF) receptor with signalling proteins, such a

I. Mechanism of Signal TransductionRecently, several signalling proteins have been identified and actively investigated regarding the protein - protein interaction with the membrane receptors. Especially the interaction of platelet-drived growth factor(PDGF) receptor with signalling proteins, such as phospholipase C-$\gamma$1(PLC-$\gamma$1), GTPase activating protein(GAP) and Phosphatidyl inositol-3-kinase (P13k), has been increasingly focused in the last few years.The functional role of phospholipids as second messengers during the signal transduction pathways in the cell development has also been actively investigated. Since, current technology, such as chromatographic or electrophoretic methods, to analize phospholipids from the biological samples has some drawbacks, we need to have a powerful technique to analyze phospholipids during the cell development.In this study we report over expression of Src homology region 2(SH2 region) of PLC-$\gamma$1, which is known to be directly involved in the protein-protein interaction with growth factor receptors, in bacterial system. We also demonstrate the development of new method to analyze phosphatidyl choline(Lecithin) both qualitatively and quantitatively from human biological samples using Capillary Electrophoresis(CE).II. Polymorphism in Drug Metabolism by Human Cytochrome P-450.The important of genetic polymorphisms as a cause of interindividual variability in therapeutic drug response and drug toxicity has increasingly been recognized in the last few years. The debrisoquine/sparteine polymorphism and the mephenytoin polymorphism are two common genetic polymorphisms of drug metabolism involved in cytochrome P-450 enzyme system.Metoprolol, a β-adrenoreceptor antagonist, is used as a racemic mixture of its enantiomers. Metoprolol is mainly metabolised by oxidative pathways including O-demethylation, α-hydroxylation, and N-dealkylation processes. In humans α-hydroxymetoprolol is a relatively minor metabolite(10% of dose)which has some pharmacological activities, while the O-demethylmetoprolol undergoes further oxidized to the carboxylic acid(65% of dose). The oxidative metabolism of metoprolol has been shown to display genetic polymorphism of the debrisoquine type which representing cytochrome P-450IID6.In this paper reports the results of work done both to establish the analytical method of GC/MS for metoprolol metabolites in vitro samples and to establish substrate stereoselectivity in O-demethylation and α-hydroxylation of metoprolol with human liver microsomes related to genetic polymorphisms.

목차 Contents

• Ⅰ. 생체내 정보전달의 기전...19
• 제 1 장 서 론...21
• 제 2 장 이론적 배경...23
• 제 1 절 Src Homology Region 2(SH2) Domain을 갖는 단백질과 생체내 정보전달 체계...23
• 제 2 절 인지질의 구조...31
• 제 3 절 생체막에서의 인지질의 역활...33
• 제 4 절 Second Messenger로서의 인지질...36
• 제 5 절 Capillary Electrophoresis(CE)의 원리...38
• 제 3 장 실 험...41
• 제 1 절 장치 및 시약...41
• 제 2 절 실험재료 및 방법...44
• 제 4 장 결과 및 고찰...48
• 제 1 절 PLC-γ1 유전자의 구성...48
• 제 2 절 대장균 system에서 PLC-SH2[N], PLC-SH2[C]의 발현을 위한 subcloning...48
• 제 3 절 대장균 system에서 PLC-SH2[N+C]의 발현을 위한 subcloning...53
• 제 4 절 Phosphatidylcholine의 분석을 위한 CE의 조건 확립...59
• 제 5 절 분리효과 및 재현성...65
• 제 6 절 phosphatidylcholine의 검량곡선...65
• 제 7 절 정상인 담즙에서의 phosphatidylcholine의 정량...69
• 제 5 장 결 론...73
• 제 6 장 참고문헌...74
• Ⅱ. 싸이토크롬 P-450에 의한 약물대사의 폴리모피즘...79
• 제 1 장 서 론...81
• 제 2 장 실 험...86
• 제 1 절 시약 및 재료...86
• 제 2 절 마이크로솜의 준비...86
• 제 3 절 마이크로소말 배양...88
• 제 4 절 메토프롤롤의 대사체 분석...89
• 제 3 장 결과 및 고찰...92
• 제 1 절 메토프롤롤의 합성 및 분석법...92
• 제 2 절 메토프롤롤 대사...99
• 제 4 장 결 론...102
• 참 고 문 헌...103