초록 ▼

Antinuclear antibody 측정법: 간접 형광면역측정법에 의한 ANA 측정은 Hep-2 cell substrate slide와 fluorescence isothiocyanate(FITC)가 결합된 antihuman IgF, 세척용액이 필요하며, Hep-2 cell substrate slide는 microscope slide를 silk printing하여 slide당 12개의 well을 만들어 검체 12개를 동시에 측정할 수 있도록 하였다. 측정방법은 검체를 Hep-2 cell substrate slide와 반응시켜 ANA

Antinuclear antibody 측정법: 간접 형광면역측정법에 의한 ANA 측정은 Hep-2 cell substrate slide와 fluorescence isothiocyanate(FITC)가 결합된 antihuman IgF, 세척용액이 필요하며, Hep-2 cell substrate slide는 microscope slide를 silk printing하여 slide당 12개의 well을 만들어 검체 12개를 동시에 측정할 수 있도록 하였다. 측정방법은 검체를 Hep-2 cell substrate slide와 반응시켜 ANA가 Hep-2 cell의 핵질에 결합하면 여기에 FITC가 결합된 antihuman IgG를 반응시켜 fluorescence microscope로서 형광 패턴을 조사하여 ANA의 종류를 분별할 수 있다.Rheumatoid factor 측정법 : Latex agglutination에 의한 RF의 측정은 0.4 ㎛정도의 polystyrene latex 입자에 rabbit immunoglobulin을 결합시켜 제조하였으며, 검체 중의 RF와 반응하여 응집반응을 일으키면 양성, 응집반응이 없으면 음성으로 판정할 수 있다.

Abstract ▼

The objective of this project is to develop commercial style kits for the qualitative determination of serum antinuclear antibodies and rheumatoid factors in autoimmune disease patients.For the determination of ANA, the indirect immune-fluorescence method was applied using cultured Hep-2 cells as th

The objective of this project is to develop commercial style kits for the qualitative determination of serum antinuclear antibodies and rheumatoid factors in autoimmune disease patients.For the determination of ANA, the indirect immune-fluorescence method was applied using cultured Hep-2 cells as the substrate on the slides. The silk-printed substrate slide has 12 wells which makes it possible to assay 12 samples simultaneously. A specific immunological binding between the antigenic structure of Hep-2 cell nucleus and ANA samples was visualized by means of FITC-labeled antihuman IgG under a fluorescence microscope. The kit consists of 3 components ; Hep-2 cell substrate slide, FITC-conjugated antihuman IgG, and wash buffer. The kit was eveluated by comparing the values of clinical samples with the commercial kits, Quantafluor (Kallestad, U.S.A.) and Fluoro Hepana Test (MBL Co. Japan).For the determination of RF, the latex agglutination method was applied using rabbit IgG-sensitized latex particles because the RF has the ability to react with antigenic determinants on the Fc portion of a IgG molecule. This kit consists of 3 components, IgG-sensitized latex particles, positive control and negative control. The clinical samples were evaluated to correlate with commercial kits, RA-T (Iatron, Japan) and RA-80 (Eiken, Japan).

목차 Contents

• 제1장 서 론...15
• 제2장 형광면역 검색법에 의한 antinuclear antibody 측정법 개발에 관한 연구...17
• 제1절 실험재료 및 기기...17
• 제2절 실험방법...18
• 제3절 결과 및 고찰...23
• 1. Substrate slide의 제조...23
• 가. Hep-2 세포의 배양...23
• 나. Gelatin coating...24
• 다. Slide glass상에서의 Hep-2 세포 배양...26
• 라. Hep-2 세포의 고정...28
• 2. FITC-antibody conjugate...31
• 3. 실험실 제품과 기존 상품과의 분석감도 비교...33
• 4. 실험실 제품과 기존 상품과의 시료분석...35
• 제4절 결론 및 건의사항...41
• 제3장 Latex 응집법에 의한 류마토이드인자 측정법 개발에 관한 연구...42
• 제1절 실험재료 및 기기...42
• 제2절 실험방법...42
• 제3절 결과 및 고찰...45
• 1. 토끼 면역항체의 분리 정제...45
• 2. Coupling용액 농도에 따른 latex 입자의 응집반응 조사...47
• 3. 반응시간에 따른 coupling정도 및 응집반응조사...48
• 4. False positive 현상 제거를 위한 시료혈청의 처리...51
• 5. 자체응집 제거를 위한 세척용액 조사...53
• 6. Latex입자 크기에 따른 coupling 효과 조사...55
• 7. 원심분리 속도에 따른 응집반응 조사...56
• 8. Ammonium sulfate 침전에 의한 IgG를 사용한 경우 latex 응집반응 조사...56
• 9. 실험실제품과 기존상품과의 시료분석 비교...59
• 10. 실험실제품과 기존상품과의 감도 비교...62
• 제4절 결론 및 건의사항...63
• 참고문헌...64