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노화현상에 대한 연구는 그 관심사만큼이나 많은 연구가 진행되어 왔으나 아직은 대부분의 경우 노화의 현상학적 분석에 그치고 있으며, 보다 진전된 연구결과도 대부분 세포 수준에서 연구가 되어, 특히 고등생물의 개체 수준에서 노화 및 수명을 통제하는 생리적, 유전적 기작에 대한 연구 결과는 극히 제한되어 있는 실정이다. 그러나 많은 생명현상과 마찬가지로 노화과정도 그 현상을 조절하는 여러 작용기작의 이해가 더해감에 따라 한의학적 기본지식에서 근원적인 답을 얻을 수 있으리라 기대된다. 본 연구에서는 보기(補氣), 보혈(補血), 보양(補陽)

노화현상에 대한 연구는 그 관심사만큼이나 많은 연구가 진행되어 왔으나 아직은 대부분의 경우 노화의 현상학적 분석에 그치고 있으며, 보다 진전된 연구결과도 대부분 세포 수준에서 연구가 되어, 특히 고등생물의 개체 수준에서 노화 및 수명을 통제하는 생리적, 유전적 기작에 대한 연구 결과는 극히 제한되어 있는 실정이다. 그러나 많은 생명현상과 마찬가지로 노화과정도 그 현상을 조절하는 여러 작용기작의 이해가 더해감에 따라 한의학적 기본지식에서 근원적인 답을 얻을 수 있으리라 기대된다. 본 연구에서는 보기(補氣), 보혈(補血), 보양(補陽) 및 보음(補陰)의 7가지 한약탕제 처방인 四君子湯, 四物湯, 十全大補湯, 六味地黃元, 延齡固本丹, ,八味丸, ,八物湯을 이용하여 노화의 주요원인중 하나인 활성 산소에 대한 항산화효과를 연구하였고, 노인성 퇴행질환중 뇌질환에 관한 연구를 위하여 H2O2와 glutamate에 의한 신경세포의 퇴행억제 효과를 실험하였고, 마지막으로 노인성 신경퇴행질환중 하나인 파킨슨병에 대한 한약탕제의 효과에 대한 연구를 수행하였다. 1. 한약탕제 투여에 의한 생체내 항산화 보호능 증가효과 연구 육미지황원, 팔미환, 연령고본단이 in vitro, in vivo 실험에서 모두 비교적 높은 항산화 능력을 보여주었고 특히 육미지황원이 뇌조직에서 높은 항산화 방어능력을 가진 것으로 관찰되었다. 2. 활성산소에 의한 신경세포 apoptosis에 있어서 한약재의 보호 효과 연구 H2O2에 대한 육미지황원, 팔미환, 연령고본단 등의 탕제와 단미제인 와송의 신경세포 보호효과가 관찰되었고, 탕제들의 신경세포 보호효과는 hydroxy radical에 대한 소거능이라 사료되었다. 3. 퇴행성신경질환 모델을 이용한 한약탕제 효능연구 Glutamate 독성에 대한 한약탕제의 신경세포 보호효과를 실험한 결과 연령고본단,육미지황원,십전대보탕이 유의한 효과를 나타내어 이들 한약탕제가 뇌신경세포의 손상에 대한 보호효과가 있을 것이라 사료되었다. 4. 파킨슨병에 대한 한약탕제의 보호효과 연구 연령고본단이 MPP+에 대한 세포독성의 보호효과 ATP농도감소 억제효과, neurite에 대한 영향, 형태학적 관찰에서 모두 유효한 효과가 나타나서 실험에 사용한 7가지 한약탕제중에서는 연령고본단이 파킨슨병에 대한 예방효과가 있을 것이라 사료되었다. 본 연구에서 사용된 7가지 한약탕제에 대한 항산화효과와 신경세포에 대한 보호효과등을 검증한 결과에서는 상호간에 매우 유의한 일치성을 보였다. 이는 한약이 항산화효과를 가지고 있으며 아울러 신경계 세포에 대한 여러 가지 독성물질에 대한 보호효과를 가진 것으로 사료된다. 이 연구결과에서는 7가지 한약탕제들 중에서 연령고본단과 육미지황원이 가장 뛰어난 효과를 보여주었고, 이들 처방이 궁극적으로 노화의 지연 및 노화에 의한 노인성 신경계 퇴행성 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있을 것으로 기대된다. Abbreviation PL : Palmultang 八物湯 PM : Palmihwan 八味丸 SD : Shipchondaebotang 十全大補湯 SG : Sagunjatang 四君子湯 SM : Sam ultang 四物湯 YG : Yollyounggobondan 延齡固本丹 YJ : Yungmijihwangwon 六味地黃元

Abstract

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목차 Contents

• 총 론...11
• 한약탕제 투여에 의한 생체내 항산화 보호능 증가효과 연구...18
• Ⅰ. 서론...19
• Ⅱ. 재료 및 방법...22
• 1. 탕제 추출물의 준비...22
• 2. 항산화 활성의 측정...22
• 3. 동물 세포 배양에서 탕제의 항산화 효과...24
• 4. 탕제 투여된 동물 조직에서의 항산화 활성 증강 효과...26
• 5. AAPH로 산화적 손상을 유발한 흰 쥐에서 탕제의 보호 효과...28
• 6. IL-1 B 와 IL-2 측정...30
• 7. 통계 처리...31
• Ⅲ. 결과 및 고찰...32
• 1. 탕제의 항산화 활성 측정...32
• 2. AAPH 독성에 대한 탕제의 보호 효과...33
• 2.1 Red blood cell에서의 보호 효과...33
• 2.2 배양 간 세포열에 대한 탕제의 보호효과...36
• 3. 탕제를 투여한 조직의 항산화 활성 증강 효과...40
• 3.1 간 조직에서 항산화 활성 증강의 효과...41
• 3.2 뇌 조직에서 항산화 활성 증강의 효과...43
• 4. AAPH로 유발된 산화적 손상에 대한 항산화 보호 효과...45
• 4.1 체중 및 혈장 분석...45
• 4.2 탕제 투여에 의한 산화적 손상 억제 효과...47
• 4.3 탕제 투여에 의한 체내 항산화계의 변화...48
• 5. 탕제 투여에 의한 면역 증강 효과...50
• Ⅳ. 고 찰...51
• Ⅴ. 결과 요약...77
• Ⅵ. 참고 문헌...79
• 활성산소에 의한 신경세포 apoptosis에 있어서 한약재의 보호효과 연구...83
• Ⅰ. 서 론...84
• Ⅱ. 연구방법...87
• 1. 세포 배양...87
• 2. Internucleosomal DNA fragmentation...87
• 3. Flow cytometer 분석...88
• 4. Free radical 소거능 측정 실험...88
• 5. Western blotting 실험...88
• 6. 와송(瓦松, Orostachys japonicus)의 분획 실험...89
• Ⅲ. 연구결과...90
• 1. H2O2에 의한 B103 신경세포의 apoptosis 유도...90
• 2. H2O2에 의한 GT1-1 신경세포의 apoptosis 유도...90
• 3. 여러 한약 단미제 및 탕제의 H2O2-induced apoptosis에 대한 보호 효과...91
• 4. Free radical 소거능의 측정...92
• 5. 와송 추출물의 각 분획 별 신경세포 보호능 측정...93
• 6. H2O2에 의한 신경세포의 apoptosis에서 p53 tumor suppressor protein 발현 실험...94
• Ⅳ. 고 찰...113
• Ⅴ. 참고 문헌...115
• 퇴행성신경질환 모델을 이용한 한약탕제 효능연구...117
• Ⅰ. 서 론...118
• Ⅱ. 연구방법...121
• 1. 신경세포배양...121
• 2. Immunostaining...121
• 3. Glutamate neurotoxicity...122
• 4. Lactate Dehydrogenase(LDH) 측정...123
• Ⅲ. 연구결과...124
• 1. 신경세포 형태변화...124
• 1.1 신경세포 분화과정 관찰...124
• 1.2 혈청제거로 인한 세포손상 변화...124
• 2. Glutamate에 의한 신경세포의 시간, 농도의존적 효과...125
• 3. 신경세포손상에 대한 한약재 효과...125
• Ⅳ. 고 찰...134
• V. 결 론...138
• Ⅵ. 참고 문헌...139
• 파킨슨병에 대한 한약탕제의 보호효과 연구...146
• Ⅰ. 서 론...147
• Ⅱ. 실험방법 및 재료...151
• 1. 실험재료...151
• 2. 실험방법...152
• 2.1 세포배양...152
• 2.2 PC12 세포에 대한 시료의 세포독성 결정...152
• 2.3 SRB 검색범 (Sulforhodamine B assay)...152
• 2.4 ATP 측정...154
• 2.5 Neurite 변화관찰...155
• 2.6 형광현미경 사진...156
• 2.7 DNA fragmentation 확인 실험...156
• Ⅲ. 결 과...157
• 1. PC12 세포의 적정접종세포수 결정...157
• 2. MPP+에 대한 세포독성 실험...157
• 3. 6-OHDA에 대한 세포독성 실험...158
• 4. PCl2 세포에서 MPP+와 6-OHDA에 의한 세포 독성에 있어서 한약 탕제의 보호 효과...158
• 5. ATP 측정...159
• 6. Neurite에 대한 효과...160
• 7. 이중염색법을 이용한 형태학적 관찰...160
• 8. DNA fragmentation 확인...161
• Ⅳ. 고 찰...172
• V. 결 론...175
• Ⅵ. 참고 문헌...176
• 결 론...180
• 연구결과의 주요학술회의 발표...10
• 1. Protective effects of traditional oriental drugs against H2O2...182
• 2. Protective effects of Water-soluble Extracts of Traditional Herbal Formula...183