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Single Chain Variable Fragment(scFv) 항체유전자 이식을 통한 Cucumber Mosaic cucumber mosaic Cucumovirus(CMV) 내성형질전환 식물체의 제작 및 특성 분석
Production and special property analysis of CMV resistant transgenic plants by means of scFv antibody gene transplantation 원문보기

초록 ▼

1. 제1세부과제 : CMV 특이적 scFv 항체 유전자의 획득 및 형질전환 식물체 내 발현 조사
(1) 항체 제작
① Mouse Immunization
② Spleen으로부터 항체 유전자 증폭
③ scFv 항체 유전자 phage display library 제작
(2) 항바이러스 scFv 항체 분리 및 생산
(3) 선발된 CMV-Mf scFv 항체의 중화능력 검정
(4) scFv의 친화성 검정
(5) 항바이러스 scFv 항체 유전자 조작
(6) 형질전환 식물체의 항체 발현 양

Abstract ▼

1. The $1^{st}$ Project Obtaining CMV specific scFv antibody gene and expression investigation in transgenic plants
(1) Antibody Production
① Mouse Immunization
② Antibody gene amplification from spleen
③ Producing phage display library of scFv antibody gene
(2) Isolatio

목차 Contents

  • 제1장 연구개발과재의 개요...29
  • 제1절 연구개발의 배경 및 목적...29
  • 1. 연구개발의 배경...29
  • 2. 연구개발의 목적...31
  • 제2절 연구개발의 필요성 및 범위...32
  • 1. 연구개발의 필요성...32
  • 가. 기술적 측면...32
  • 나. 경제·산업적 측면...34
  • 다. 사회·문화적 측면...36
  • 2. 연구개발의 내용 및 범위...38
  • 제2장 국내 외 기술개발 현황...39
  • 제3장 연구개발 수행 내용 및 결과...41
  • 제1절 연차별 연구내용...41
  • 1. 1년차 : CMV-Mf의 생물학적 특성 및 CP gene의 분석, 항체 제작 및 형질 전환체계 확립...41
  • 2. 2년차 : CMV-Mf 특이적 항체의 생산 및 바이러스 중화능력 검정 및 형질 전환 식물체 생산...42
  • 3. 3년차 : 형질전환식물의 항체 발현, 바이러스 저항성 검정...43
  • 제2절 연구결과 및 분석...45
  • 1. 제1 세부과제 CMV 특이적 scFv 항체 유전자의 획득 및 형질전환 식물체 내 발현조사...45
  • 가. 항-CMV 항체 제작 과정...45
  • 나. scFv 항체 유전자 phage display library 제작...47
  • 다. 항바이러스 scFv 항체 분리 및 생산...49
  • 라. CMV-Mf 특이적 scFv 항체의 염기서열 분석...51
  • 마. scFv의 친화성 검 정...53
  • 바. 항바이러스 scFv 항체 유전자 조작...55
  • 사. 단일세포성 항체의 positive clone의 검색...57
  • 아. CMVSCFV-AP가 conjugation된 Pho A color system의 개발...58
  • 자. 항바이러스 scFv 항체 특이적 polyclonal 항체 제작...59
  • 2. 제2 세부과제 CMV의 병원성유전자 분석 및 scFv항체발현 식물에서의 반응기작...60
  • 가. 연구의 배경...60
  • 나. CMV-Mf계통의 생물학적 성질 및 항체제작을 위한 바이러스의 정제...62
  • 1) 공시 바이러스의 증식...62
  • 2) CMV-Mf의 기주반응...63
  • 3) CMV-Mf CP gene의 분석...65
  • 4) CMV-Mf의 항체제작을 위한 바이러스의 순화...71
  • 다. CMV-Mf의 병원성 관련 유전자의 분석...72
  • 라. CMV-Mf의 혈청학적 특성 및 scFv항체와의 in uitro반응...76
  • 1) 공시 바이러스의 증식...76
  • 2) 항CMV-Mf혈청의 제작 및 역가 검정...76
  • 3) CMV-Mf scFv항체의 중화능력 검정...77
  • 마. CMV-Mf CP단백질의 scFv항체발현 형질전환체에서의 CMV-Mf의 반응...81
  • 1) 형질전환식물의 protoplast를 이용한 CMV의 감염성조사...81
  • 2) scFv항체를 발현하는 형질전환식물체의 CMV의 감염에 대한 반응...82
  • 3) CMV RNA 3의 변이바이러스에 대한 형질전환체의 반응 조사...82
  • 4) 다른 계통의 CMV 또는 다른 종의 바이러스에 대한 저항성 검정...83
  • 3. 제3 세부과제 scFv 항체 발현 CMV 저항성 식물체 개발...87
  • 가. 담배...87
  • 1) 담배의 재분화 시스템 개발...87
  • 가) 담배의 재분화 조건 설정을 위한 호르몬 조합 실험...87
  • 나) 담배의 재분화를 위한 호르몬 조건 규명 실험의 분석...88
  • 2) 담배(Nicotiana tabaccum. cv. Xanti nc)의 형질전환 체계 확립 및 결과...89
  • 가) 실험방법 및 조건...89
  • 나) 형질전환 결과...90
  • 나. 토마토(대과종과 소과종)...94
  • 1) 토마토의 재분화 및 형질전환 체계 확립을 위한 실마토 형질전환 체계 확립 실험결과...94
  • 3) CMV scFv 유전자를 이용한 토마토(대과종)의 형질전환 결과...97
  • 다. 박과 작물(오이, 수박)...101
  • 1) 박과 작물의 재분화 및 형질전환 조건 확립을 위한 실험 조건...101
  • 2) 박과 작물의 재분화 및 형질전환 실험방법...101
  • 3) 박과 작물의 형질전환 실험 결과...104
  • 라. 각 작물의 원형질체 분리 조건 확립...108
  • 1) 실험재료...108
  • 2) 원형질체 분리 과정...109
  • 3) 원형질체 분리 조건 확립...110
  • 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...111
  • 제1절 목표달성도...111
  • 제2절 관련분야 기술발전에의 기여도...112
  • 1. 기술적 측면...112
  • 2. 경제 산업적 측면...113
  • 제5장 연구개발결과의 활용계획...114
  • 1. 추가연구의 필요성...114
  • 2. 타연구에의 응용...114
  • 3. 기업화 추진방안...115
  • 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...116
  • 제7장 참고문헌...118

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참고문헌 (25)

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