보고서 정보
주관연구기관 |
전북대학교 Chonbuk National University |
연구책임자 |
채준석
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발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2002-05 |
주관부처 |
보건복지부 |
사업 관리 기관 |
전북대학교 Chonbuk National University |
등록번호 |
TRKO200300001607 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
에르리키아.아나플라스마.리케치아.진드기.실시간 효소중합연쇄반응.Ehrlichia.Anaplasma.rickettsia.tick.real-time PCR.
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초록
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Ehrlichia chaffeensis(human monocytic ehrlichiosis; HME agent)와 Anaplasma phagocytophila(human granulocytic ehrlichiosis; HGE agent)의 한국에서의 감염여부를 조사하기 위해 총 791개의 혈청샘플에서 간접면역혈청법(Immunofluorescent antibody test; IFA), Western immunoblotting과 TaqMan real-time PCR을 실시하였다. 혈청샘플은 2000년부터 2001년까지 전남보건환경연구원
Ehrlichia chaffeensis(human monocytic ehrlichiosis; HME agent)와 Anaplasma phagocytophila(human granulocytic ehrlichiosis; HGE agent)의 한국에서의 감염여부를 조사하기 위해 총 791개의 혈청샘플에서 간접면역혈청법(Immunofluorescent antibody test; IFA), Western immunoblotting과 TaqMan real-time PCR을 실시하였다. 혈청샘플은 2000년부터 2001년까지 전남보건환경연구원, 전북보건환경연구원, 그리고 국립보건원에서 수집했으며 이들은 모두 급성열성질환을 보이는 환자들의 샘플로써 혈청학적 진단에 이용하였다. Eh test 결과, 791개의 혈청 중 35개의 혈청에서 E. chaffeensis(4.4%)와 56개의 혈청에서 A. phagocytophila(7.1%)에 양성반응을 보였다. Eh test에서 양성반응을 보인 샘플에 대해 Western immunoblotting과 TaqMan 실시간 중합효소 연쇄반응(TaqMan real-time PCR)을 실시하였다. Western Immunoblot의 결과,2개의 샘플에서 E. chaffeensis의 28kDa에서 양성반응을 보였으며, 1개의 샘플에서 A. phgocytophila의 44 kDa에서 양성반응을 보였다. 또한 TaqMan real-time PCR의 결과, 하나의 샘플에서 A. phagocytophila의 165 rRNA 유전자 단편이 증폭되었다.국내 9개 도에서 총 4,424마리의 진드기를 방목장 또는 산야와 소, 말, 염소, 개, 고양이, 고슴도치 그리고 야생쥐의 체표에서 채집하였다. 채집된 진드기는 종과 숫컷 성충, 암컷 성충, 약충, 유충으로 구분하였다. 약충은 1-3마리, 유충은 5-10마리, 성충은 한 마리씩 그리고 암컷 성충은 타액선과 장을 분리하여 주형 DNA를 추출하였다. 주형 DNA는 먼저 Ehrlichia와 Anaplasma 종의 존재를 확인하기 위하여 모든 Ehrlichia와 Anaplasma가 결합할 수 있는 primers를 사용한 TaqMan real-time PCR을 실시하였다. Ehrlichia와 Anaplasma 종의 165 rRnh 유전자 단편의 증폭은 총 803개의 DNA 샘플 중 364개에서 양성반응을 나타내었다(45.3%). TaqMan real time PCR에서 양성 반응을 보인 364개 샘플의 DNA는 E. chaffeenis의 검출을 위하여 nadA 유전자 단편을 PCR 방법을 통해 증폭을 시도한 결과, 1마리의 Ixodes persulcatus에서만 양성 반응을 보였다. 또한 A. phagocytophila의 165 rRNA 유전자 단편의 증폭을 위하여 nested PCR을 시도하였다. 양성 반응을 보인 38개의 시료 중 1마리만이 I. persulcatus였고 나머지는 모두 Haemaphysalis longicornis 였다. 증폭된 DNA는 염기 서열을 통하여 그 특이성을 확인하여 본 결과, 염기 서열 분석에 사용한 4개의 샘플 중 3개는 Ehrlichia sp. LGE isolate (AF241532)와 각각 99.8%, 98.9%, 100%의 동일성을 확인할 수 있었으며, 한 개의 샘플(AB-KBHL, GenBank ACCESSION NUMBER (GAN) AF470698)은 E. bovis (U03775)와 98.8%로 가장 유사한 동일성을 나타내었다. 또한 이들 진드기 803개의 진드기 DNA로부터 E. canis, E. ewingii 그리고 E. platys를 각각 nested PCR로 검사한 결과 각각 1.9%,1.2% 그리고 18.6%로 검출되었다.
Abstract
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Seven hundred and ninety one human sera from Korean patients were submitted for the detection of infection by Ehrlichia chaffeensis (human monocytic ehrlichiosis; HME agent) and Anaplasma phagocytophila (human granulocytic ehrlichiosis; HGE agent) by indirect immunofluoresent antibody test (Eh), Wes
Seven hundred and ninety one human sera from Korean patients were submitted for the detection of infection by Ehrlichia chaffeensis (human monocytic ehrlichiosis; HME agent) and Anaplasma phagocytophila (human granulocytic ehrlichiosis; HGE agent) by indirect immunofluoresent antibody test (Eh), Western immunoblotting, and TaqMan real-time PCR. These sera were submitted for serological diagnosis of acute febrile diseases to the Jeonbuk and Jeonnam Public Health and Environmental Research Institute and the National Institute of Health, Korea over a two year period from 2000 through 2001. Eleven of these 791 sera were 35 positive for E. chaffeensis (4.4%) and 56 Positive for A. phagocytophila (7.1%) antibodies in IFA tests. There were no gender differences in the number of positives. Western immunoblotting and TaqMan real-time PCR were performed with the sera that showed a positive reaction in Eh. In the immunoblotting assay, two sera reacted with the 28 kDa E. chaffeensis antigenic protein, and one of the nine reacted with the 44 kDa A. phagocytophila antigenic protein. Also, in the TaqMan real-time PCR, the 165 rRNA gene of A. phagocytophila was amplified in one serum.A total of 4,424 ticks (4,420 of Haemaphysalis longicornis, 3 of Ixodes persulntus and one of I. turdus) collected from 9 provinces in Korea were examined by TaqMan real-time PCR for the presence of Ehrlichia and Anapiasma species. One set of primers and a probe were designed for detection of all of the Ehrlichia and Anaplasma species. Template DNA used was either from pools of larvae, nymphs, adult males and females, or from the salivary gland and midgut of adult ticks. Amplification of the 165 rRNA gene fragment of Ehrlichia and Anaplasma species was observed in 364 ticks (45.3% of the total) from 803 randomly selected tick DNAs. Only positive DNAs in TaqMan PCR were examined for A. phgocytophila with nested PCR and E. cueenis with PCR. 37 H. longicornis and one I. persulcatus were positive in A. phagocytophiia One I. persulcatu was positive in A. chaffeensis PCR. Four A. phgocytophila 165 rRNA gene PCR products were sequenced for comparison with sequences previously reported. Except for one (AB-KGHL, GenBank accession number (GAN) AF470698), three of the four 165 rRNA gene fragment sequences of the A. phgocytophila-positive samples were similar or identical to the sequences of variants of A. phgocytophila deposited in GenBank. The 165 rRNA gene fragment sequence of AB-KGHL was similar to that of Anaplasma (Ehrlichia) bovis 165 rRNA (GAN U03775).
목차 Contents
- I. 연구개발결과 요약문...4
- (한글)...4
- (영문)...6
- II. 총괄연구개발과제 연구결과...8
- 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...8
- 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...11
- 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...18
- 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...40
- 5. 총괄연구개발과제의 활용계획...43
- 6. 참고문헌...44
- 7. 첨부서류...50
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