초록 ▼

○ 체세포 복제기술을 형질전화 동물의 생산과정에 활용하여 TPO를 대량생산하는 형질전환 젖소를 개발하고자 본 연구를 실시함.
○ TPO 유전자가 도입된 체세포를 이용하여 핵치환을 실시한 후 생산된 각 단계의 복제수정란을 PCR 기법을 이용하여 TPO 유전자 도입 여부를 분석한 결과, 전제적으로는 57.8％의 도입율을 보였고, 특히 이식 단계인 배반포에 있어서는 100％의 도입을 보였음
○ 체세포 핵치환 후 활성화 조건에 따른 복제수정란의 체외발다을 조사한 결과, 각 처리구에 따른 차이첨은 나타나지 않았으나, 체외배양 체계

○ 체세포 복제기술을 형질전화 동물의 생산과정에 활용하여 TPO를 대량생산하는 형질전환 젖소를 개발하고자 본 연구를 실시함.
○ TPO 유전자가 도입된 체세포를 이용하여 핵치환을 실시한 후 생산된 각 단계의 복제수정란을 PCR 기법을 이용하여 TPO 유전자 도입 여부를 분석한 결과, 전제적으로는 57.8％의 도입율을 보였고, 특히 이식 단계인 배반포에 있어서는 100％의 도입을 보였음
○ 체세포 핵치환 후 활성화 조건에 따른 복제수정란의 체외발다을 조사한 결과, 각 처리구에 따른 차이첨은 나타나지 않았으나, 체외배양 체계에 있어서는 배양액 내 항산화제의 첨가나 공배양을 실시함으로써 보다 효과적인 배발생을 유기할 수 있었음.
○ 핵치환에 의해 생산된 소 배반포에서 ICM, TE 및 전체세포수를 조사한 결과, TE세포수가 체내나 체외수정에 의해 생산된 배반포에 비해 현저히 낮게 나타났음. 따라서 핵치환 배반포의 경우 ICM의 비율이 비정상적으로 높게 나타난다는 것을 알 수 있었음.
○ 총 생산된 123개의 복제 배반포를 67두의 대리모에 이식을 실시한 다음 임신여부를 이식 후 약 40일경에 직장검사법 및 초음파 검사를 통해 확인한 결과, 58두는 재발정이 확인되어 임신이 이루어지지 않았으며, 5두가 임신 90일경, 60일경 또는 40일경에 유산되었으며, 나머지 4두는 현재까지 미확인 상태임.
○ 형질전환 생쥐의 계대번식을 통해 9대에서 14대까지 TPO 유전자의 전이 양상을 조사하였으며, 각각의 형질전화 생쥐 계통으로부터 유즙을 채취하여 ELISA 측정 방법을 통해 TPO 단백질 함량이 1g/l 이상으로 존재함을 확인하였음. 따라서 유용유전자가 형질전환 동물의 후대에서도 지속적으로 발현됨을 알 수 있었으며, 목표로하는 가축을 이용한 동물생체반응기가 개발되면 상당한 대량의 단백질을 분리 정제하여 공급할 수 있을 것으로 판단됨.

Abstract ▼

1. Establishment of in vitro culture techniques of somatic cells and reconstruction of TPO expression vector
- Obtainment of tile bovine fibroblast cell derived from super milkcow
- Production of hTPO expression vetor to transfection
2. Transfection of hTPO in established bovine fibroblast

1. Establishment of in vitro culture techniques of somatic cells and reconstruction of TPO expression vector
- Obtainment of tile bovine fibroblast cell derived from super milkcow
- Production of hTPO expression vetor to transfection
2. Transfection of hTPO in established bovine fibroblast cells
- Transfection End Seleftion of hTPO in established bovine fibroblast cells
- Obtainment of transgenic somatic cells and clones
3. In vitro development of cloned embryos
- Produrtion of cloned embryos carrying hTPO
- Analysis of hTPO gene integration in cloned embryos
- Establishment of efficient Production in cloned embryos
- Study on methylation pattern in aged donor cells
- Study on relationship with IChM/TE ratio in NT blastocysts
4. Artificial insemination for production of the cloned embryos
- Transfer of bovine cloned embryos to recipients
- Diagnosis of pregnancy to recipients
5. Posterity verification of transgenic mice producing hTPO
- Confimation of transmission rate in transgenic mice producing hTPO
- Study on amount of hTPO protein in transgenic mice productin hTPO

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 보고서 초록...4
• 요약문...5
• SUMMARY...8
• CONTENTS...11
• 목차...12
• 제 1 장 연구개발과제의 개요...13
• 제 1 절 연구개발의 목적...13
• 제 2 절 연구개발의 범위 및 필요성...13
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...15
• 제 1 절 국내의 기술개발 현황...15
• 제 2 절 국외의 기술개발 현황...15
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...18
• 제 1 절 이론적, 실험적 접근방법...18
• 제 2 절 연구내용 및 결과...19
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...33
• 제 1 절 체세포 내 유용유전자의 효율적인 도입 및 선별...33
• 제 2 절 체세포 복제수정란의 체외 생산 시스템 구축...33
• 제 3 절 형질전환 생쥐의 계대번식 및 유즙에서 유용 단백질의 생산...33
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...34
• 제 1 절 기술적 효과...34
• 제 2 절 경제적 효과...34
• 제 6 장 참고문헌...35
• 위탁과제 I...48