초록 ▼

연구목적
미생물 균종 간의 계통학적 관계를 잘 나타내는 chronometer molecule인 hsp65 유전자의 염기서열을 이용하여 결핵균 및 비결핵항산성균의 진단을 가능하게 하는 새로운 분자생물학적인 진단방법 개발
연구방법 및 결과
본 연구에서는 인간에게 치명적인 병을 유발하는 결핵균 및 나병균 이외에 기회 감염균으로 존재하는 다양한 비정형 미코 박테리아를 포함하는 미코박테리움 속 균종 등정에 이용될 수 있는 Heat shock protein (hsp65)의 644-bp 분절의 염기서열을 이용하는 새로운 동정방법

연구목적
미생물 균종 간의 계통학적 관계를 잘 나타내는 chronometer molecule인 hsp65 유전자의 염기서열을 이용하여 결핵균 및 비결핵항산성균의 진단을 가능하게 하는 새로운 분자생물학적인 진단방법 개발
연구방법 및 결과
본 연구에서는 인간에게 치명적인 병을 유발하는 결핵균 및 나병균 이외에 기회 감염균으로 존재하는 다양한 비정형 미코 박테리아를 포함하는 미코박테리움 속 균종 등정에 이용될 수 있는 Heat shock protein (hsp65)의 644-bp 분절의 염기서열을 이용하는 새로운 동정방법을 개발하였다. 모든 미코박테리움 속 균종을 증폭시킬 수 있는 프라이머를 제조하였고 이를 이용하며 표준균종 50 주의 644-bp hsp65 유전자의 염기서열을 분석한 후 다정렬 (miltialignment) 하여 데이터베이스화 하였다. 이렇게 구축된 데이터베이스를 이용하여 임상분리 균주 50 주를 대상으로 비교염기서열 방법으로 균 동정을 실시한 후 그 결과를 기존의 생화학적 결과와 비교해본 결과 서로 일치하는 결과를 보였다. 또한 기존의 생화학적 방법으로 균 동정이 어려운 18 주의 임상 분리주를 대항으로 비교염기서열 분석방법을 수행한 결과 모두 종 수준의로의 감별이 가능하였다. 또한 이러한 염기서열을 기초로 probe-hybridization method, 종 특이적인 PCR 방법 개발 법 및 결핵균과 비 결핵 항산성균의 감별을 가능하게 하는 duplex PCR 방법을 개발하였다. 이러한 미코 박테리움 속균종 hsp65 유전자의 데이터베이스를 이용한 미코박테리움 속 균종 동정 방법은 기존의 분사생물학적 분류방법에 비해 여러 장점이 있는 바, 향후 방선균 동정에 널리 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

Abstract ▼

Objectives
The development of molecular biolological diagnosis method for identification of M. tuberculosis and nontuberculosis mycobacteria strains using hsp65 gene which is a chronometer molecule showing appropriate phylogenetic relationship among strains within the genus Mycobacterium.
Meth

Objectives
The development of molecular biolological diagnosis method for identification of M. tuberculosis and nontuberculosis mycobacteria strains using hsp65 gene which is a chronometer molecule showing appropriate phylogenetic relationship among strains within the genus Mycobacterium.
Methods and Results
The novel diagnosis methods for identification of strains within the genus Mycobacterium using 644-bp sequences of hsp65 gene were developed in this study. The hsp65 primer set specific to the genus Mycobacterium was developed and using this, 644-bp hsp65 sequences of 50 mycobacteria reference strains were analyzed and aligned, and finally hsp65 sequence database were constructed for identification of the genus Mycobacterium. Comparative sequence analysis using this database were applied to the 50 clinical isolate for the differentiation to the species level. When the results obtained by hsp65 gene analysis were compares to those obtained by conventional biochemical test, 100 % agreements were observed between two results. Additionally, when this method was applied to the 18 clinical isolates which could not be identified by the conventional biochemical method, all the isolates could be identified into their species level. Several methods such as probe-hybridization method, species specific PCR method, and duplex PCR method which enables differential identification between M. tuberculosis members and nontuberculous mycobacteria strains, could be also developed in this study. In conclusion, it is though that the hsp65 sequence based methods developed in this study may be useful method for the identification of M. tuberculosis and nontuberculous mycobacteria

목차 Contents

• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...6
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...6
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...11
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...28
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...29
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획...32
• 6. 첨부서류...32