초록 ▼

화학 요법제를 이용한 항암 치료의 가장 큰 문제점인 치료의 비특이성을 극복하고, 보다 효과적인 항암 치료법을 개발하고자하는 노력은 암 세포에 특이 적으로 반응하는 전신성 면역능을 유도하는데 필수 요소인 수지상세포 (Dendritic cells/DC)를 이용한 새로운 면역 세포 치료법 개발을 시도하게 하였다. 즉, 강력한 항원 소개능을 가진 수지상세포를 체외 배양한 후 종양 특이 표식 인자(tumor antigen)로 교육 시킨 후 재 주입하여 종양 특이 전신성 면역능 (예:CTL activity)을 유발/증진시켜, 원발성 및 전이암

화학 요법제를 이용한 항암 치료의 가장 큰 문제점인 치료의 비특이성을 극복하고, 보다 효과적인 항암 치료법을 개발하고자하는 노력은 암 세포에 특이 적으로 반응하는 전신성 면역능을 유도하는데 필수 요소인 수지상세포 (Dendritic cells/DC)를 이용한 새로운 면역 세포 치료법 개발을 시도하게 하였다. 즉, 강력한 항원 소개능을 가진 수지상세포를 체외 배양한 후 종양 특이 표식 인자(tumor antigen)로 교육 시킨 후 재 주입하여 종양 특이 전신성 면역능 (예:CTL activity)을 유발/증진시켜, 원발성 및 전이암 치료의 가능성을 점검하려는 것이다. 그러나 우리나라를 비롯한 전 세계에서 기초 연구와 함께 수 백개의 임상 연구가 진행 되고 있는 현재도 (치료용) 수지상 세포 연구의 많은 부분이 계속되는 연구를 필요로 하는 것이 사실이다. 사용되는 수지상 세포의 종류(CD34+-derived DC, blood-DC, Flt3-Induced DC, whole blood-induced DC) 및 DC education methods (tumor lysates, whole tumor, peptide, RNA etc.), injection schedule, route등의 표준화가 이루어지지 않고있다. 즉 수지상 세포의 배양법, 종양 항원의 source및 수지상세포로의 주입 방법, 치료를 위한 schedule 및 route등의 최적 조건의 형성이 안 되어있다. 따라서 세포 면역 치료법을 환자에 사용하기 위한 품질의 평가 기준도 확립되기 어려운 상황이다. 실제로 세포 치료법이 임상에 응용되기 위해서는 만들어지는 세포 치료제가 안전하고, 안정되게 동일한 품질을 가지고 의약품으로서 역가를 나타 낼 수있는지 등을 평가 할 수 있는 시험법을 확립 되어야하고 이를 위한 기초자료를 제공 할 수 있는 연구가 반드시 선행 되어야 할 것으로 사료된다.
본 연구의 2차년도인 올해 실험 결과들은 배양 DC의 효능 효과 검증을 위한 parameter제공을 위해 고무적인 가능성을 시사한다. 배양된 DC가 분비하는 IL-10/IL-12양의 비율이 in vitro 및 in vivo의 DC 항암 면역 기능유도와 상관관계가 있는 것으로 관찰되었다. IL-12 분비 세포의 in vivo 항암 효과가 IL-10분비 세포에 비해 우수한 것이 확인되었고, in vivo 면역 기능 예측 인자로 IFN-r를 측정한 것과 상관관계를 나타내었다. 3차년도에 계획된 대로 IL-10 또는 IL-12를 특이적으로 분비하는 DC의 항암 및 면역 유도 효과를 동물 모델 검증한 후, IL-10/IL-12 분비 비율 측정법을 배양 DC의 유효성을 예측하는 기준으로 사용 할 수 있으리라 사료된다. 또한 배양 DC의 기능 확인 및 in vivo 항암 면역 기능 유도 검색에 사용되던 3H-Thymidine을 이용한 lymphocyte proliferation assay를 동위원소가 아닌 CFSE의 flow cytometry측정법으로 개선하였다. 연구 결과는 CFSE법의 장점, 정확도 및 유용성을 증명하고 있다. 본 연구의 결과들은 제시된 목표를 달성하여, 세포 치료제 품질 평가 기준 마련을 위한 기초 자료로 활용 될 수 있으리라 확신한다.
본 연구의 2차년도인 올해 실험 결과들은 배양 DC의 효능 효과 검증을 위한 parameter제공을 위해 고무적인 가능성을 시사한다. 배양된 DC가 분비하는 IL-10/IL-12양의 비율이 in vitro 및 in vivo의 DC 항암 면역 기능유도와 상관관계가 있는 것으로 관찰되었다. IL-12 분비 세포의 in vivo 항암 효과가 IL-10분비 세포에 비해 우수한 것이 확인되었고, in vivo 면역 기능 예측 인자로 IFN-r를 측정한 것과 상관관계를 나타내었다. 3차년도에 계획된 대로 IL-10 또는 IL-12를 특이적으로 분비하는 DC의 항암 및 면역 유도 효과를 동물 모델 검증한 후, IL-10/IL-12 분비 비율 측정법을 배양 DC의 유효성을 예측하는 기준으로 사용 할 수 있으리라 사료?? lymphocyte proliferation assay를 동위원소가 아닌 CFSE의 flow cytometry측정법으로 개선하였다. 연구 결과는 CFSE법의 장점, 정확도 및 유용성을 증명하고 있다. 본 연구의 결과들은 제시된 목표를 달성하여, 세포 치료제 품질 평가 기준 마련을 위한 기초 자료로 활용 될 수 있으리라 확신한다.

Abstract ▼

Progressive growth of a single transformed cell, namely cancer, becomes one of the leading cause of death in modern industrialized nations. Destruction and removal of all the malignant cells without harming the host will be the desirable way to cure the cancer. Stimulation of specific cellular immun

Progressive growth of a single transformed cell, namely cancer, becomes one of the leading cause of death in modern industrialized nations. Destruction and removal of all the malignant cells without harming the host will be the desirable way to cure the cancer. Stimulation of specific cellular immunity against tumor may be the most promising therapy, in this concept. Dendritic cells (DCs), professional antigen presenting cells, are unique and potent effectors that induce, sustain, and regulate immune responses against specific antigens(Ags). Throughout the body, DCs are capture the Ags, migrate to draining lymphoid organs and matured to present the processed Ags to naive T cells to generate the effector cytotoxic T cells (CTLs) or helper T cells. Over 300 cases of clinical trials of DC-based immunotherapy for a variety of cancers are being tested in world wide. Several groups of melanoma trials presented 20∼30% of response rates with DC vaccines. However, to use DCs in cancer vaccine therapy several issues remains to be solved, including 1) Quality and quantity of ex vivo cultured and tumor Ag-educated DCs for therapy 2) route and timing of injection 3) amount and frequency of injection. Also, 4) the end-point immunity measurement of the trial confirming the efficacy/effect of the DC therapy should be standardized.
This study performed to provide the basic data to develop the standard fer the quality and quantity control of clinical grade cellular therapy materials. Especially in vitro qualification methods were designed using DC production of IL12 and IL10. Effective anti-tumor immunity by IL-12 producing DCs were observed in in vitro as well as in vivo immune monitoring and anti-tumor response in mouse model. With in vivo confiratory study, scheduled in 3rd year of this project, it may possible to predict the effectiveness of DC as an anti-tumor therapeutics by measuring cultured DC's production of IL10/IL12. As a tool to detect cultured DC function in vitro and in vivo, lymphocyte proliferation assay has been utilized. Classical 3H-Thymidine incorporation method improved by using CFSE labeling fluorescence detected by flow cytometer. This study confirm the advantage, usefulness and accuracy of CFSE method.. Data obtained this 2nd year project will provide the good information for the therapeutic DC standardization.

목차 Contents

• 세포치료제의 동정.함량 및 특성규명 연구 ... 1
• 제출문 ... 2
• 연구사업최종보고서요약문 ... 3
• Project Summary ... 4
• 목차 ... 5
• 제 1 장 서론 ... 6
• 제 2 장 국내ㆍ외 기술개발 현황 ... 8
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 10
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 36
• 제 5 장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ... 39
• 제 6 장 기타 중요변경사항 ... 40
• 제 7 장 참고문헌 ... 41
• 총괄 연구과제 요약 ... 45