초록 ▼

사람 암종 질환을 연구하기 위한 실험동물 모델을 확립하기 위한 첫 번째 동물 모델로 사람 유방암 동물 모델을 확립하고자 하였다. TRC 연구계획 시행을 위한 RFP를 제한된 시간 내에 충족시키면서, 암종 발생을 모니터링 하기 위하여 동물을 죽이지 않고 암의 발생 및 크기를 측정할 수 있는 장점이 있다. 또한 최근 우리나라 여성 암 질환 중에 유방암의 발생 빈도가 최고 인 것으로 보고되어 국가적인 필요성 또한 크다고 사료되어 유방암 모델을 우선 확립하고자 하였다. 7주령 MMTV/c-Neu transgenic mouse에 화학물질 투

사람 암종 질환을 연구하기 위한 실험동물 모델을 확립하기 위한 첫 번째 동물 모델로 사람 유방암 동물 모델을 확립하고자 하였다. TRC 연구계획 시행을 위한 RFP를 제한된 시간 내에 충족시키면서, 암종 발생을 모니터링 하기 위하여 동물을 죽이지 않고 암의 발생 및 크기를 측정할 수 있는 장점이 있다. 또한 최근 우리나라 여성 암 질환 중에 유방암의 발생 빈도가 최고 인 것으로 보고되어 국가적인 필요성 또한 크다고 사료되어 유방암 모델을 우선 확립하고자 하였다. 7주령 MMTV/c-Neu transgenic mouse에 화학물질 투여에 의한 유방암 발생을 검색하였다. MMTV/c-Neu transgenic mouse의 꼬리세포로부터 분리한 DNA를 PCR방법으로 genotyping하여 확인한 결과 모든 실험 대상 mouse에서 MMTV/c-Neu 유전자를 확인하였다. 이들 동물을 (1) 대조군 (2) 12 mg/kg Ethynylestradiol 격일 투여군 (3) 80 ${\mu}g$/kg DMBA 격일 2주간 투여군 (4) 800 ${\mu}g$/kg DMBA 격일 2주 투여군으로 구별하여 각각의 화학물질을 처치한 후 촉지를 통해 관찰하였다. 관찰 결과 신생종은 24 주령의 ethynylestradiol 투여군에서 제일 먼저 관찰되었다. 시간이 지남에 따라 80 ${\mu}g$/kg DMBA 격일 2주간 투여군과 800 ${\mu}g$/kg DMBA 격일 2주 투여군에서도 신생종이 관찰 되었다. MMTV/c-Neu transgenic mouse에서 화학물질 투여에 의한 유방암 발생 정도를 30주령에서 조사한 결과 12 mg/kg Ethynylestradiol 투여군은 70％, 80 ug/kg DMBA 투여군은 20％, 800 ug/kg DMBA 투여 군은 30％로 나타났다. 그리고 30주령 무처치군에서 나타난 암종 자연 발생율은 30％로 나타났다. 시간이 지남에 따라 암종이 발생된 한 마리 생쥐에서 3개-5개의 암종을 관찰하였다. 병리조직 검사결과 ethynylestradiol 투여군은 대조군에 비하여 조직괴사 정도가 많이 관찰되었고, 림프로의 전이도 ethynylestradiol 투여군에서만 관찰되었으며, 세포증식 지표도 대조군에 비하여 높게 나타났다. 화학물질에 대한 발암 민감도를 측정할 수 있는 실험 동물 모델을 확립하기 위하여 MMTV/c-Neu 유전자와 human CYP1B1 유전자를 지니면서 tetracycline에 의해 CYP1B1 유전 발현을 조절할 수 있는 형질전환 생쥐를 개발하고자 하였다. PCR 방법으로 확인한 결과 MMTV/c-Neu 유전자 보유 생쥐 76마리 중에서 사람 CYP1B1 유전자를 지닌 생쥐는 28 마리였다.MMTV/c-Neu 유전자와 사람 CYP1B1 유전자와 TAK 유전자 모두를 가지고 있는 형질전화 생쥐 4 마리를 생산하여 계대 중에 있다. 결론적으로 ethynylestradiol 투여군은 대조군에 비하여 암종 발생 빈도가 월등히 높고 암 발생 시간도 빠르며, 조직괴사와 세포분열 지표도 높게 나타났다. DMDBA 처치에 의한 결과는 계속 관찰하고 있는 중이다.

Abstract ▼

We have tried to establish the animal model system to study human cancer disease. As a first human cancer animal model system, we have chosen human breast cancer model because it seemed to comply RFP and to monitor the tumor size without killing animals. Thus, we have established MMTV/c-Neu transgen

We have tried to establish the animal model system to study human cancer disease. As a first human cancer animal model system, we have chosen human breast cancer model because it seemed to comply RFP and to monitor the tumor size without killing animals. Thus, we have established MMTV/c-Neu transgenic mouse as a animal model to study the human breast cancer. 7 weeks old MMTV/c-Neu transgenic mice were treated with either vehicle or 800 ug/kg dimethylbezanthracene (DMBA), or 80 ug/kg dimethylbezanthracene, or 12 mg/kg ethynylestradiol. 800 ug/㎏ of 80 mg/kg DMBA was administered to MMTV/c-Neu transgenic mice every other day for 2 weeks and 12 mg/kg ethynylestradiol was given to MMTV/c-Neu transgenic mice every other day throughout the study period. We have carried out physical examinations and monitored the food consumption and body weight changes. The first tumor was observed from the ethynylestradiol treated MMTV/c-Neu transgenic mice at the age of 24 week and mere tumors were observed in the 800 ug/kg DMBA, or 80 ug/kg DMBA treated MMTV/c-Neu transgenic mice. At the age of 30 week, the tumor incident was calculated to be 70% for the 12 mg/kg ethynylestiadiol treated nice, 30% for the 800 ug/kg DMBA treated mice, and 20% for the 80 ug/kg DMBA treated mice. And the spontaneous tumor development incidence in MMTV/d-Neu transgenic mice was 30% at 30 weeks old. Histopathological examination showed that ethynylestradiol treated MMT/d-Neu transgenic mice manifested higher mitotic and necrotic signs than control mice. In order to test the chemical sensitivity of polyaromtic hydrocarbon compounds in terms of developing breast cancer, we have tried to develop another transgenic mice model that carries MMTV/c-Heu gene as well as human CYP1B1 gene which is under the control of tetracycline. We have confirm the existence of MMTV/c-Neu gene, TAK gene and human CYP1B1 gene via PCR. Among the 76 transgenic mice containing the MMTV-Neu gene, 28 mice were positive for human CYP1B1 gene, 9 mice were positive for the TAK gene, and 4 mice were positive for MMTV/c-Neu gene, Therefore, we had 4 new transgenic mice containing all of the MMTV/c-Neu gene, CYP1B1 gene, and TAK gene. We are in the middle of developing the animal line and testing them for the screening of the chemical carcinogens and anticancer drugs, such as IN2001. In conclusion, ethynylestradiol treated MMTV/c-Neu transgenic nice showed higher incidence as well as larger volume of tumor developments, and also, earlier development of tumor and higher mitotic and necrotic signs than control mice. DMBA study on MMTV/c-Neu mice is on going.

목차 Contents

• Ⅰ. 서론...8
• 1. 연구목적 및 필요성...8
• 가. 화학물질의 급증 추세와 발암 위해성의 증가...8
• 나. 암 물질 확인을 위한 설치류 Bioassay기법의 한계점...8
• 다. 유전자 형질전환 생쥐를 이용한 발암물질 평가 기법의 장점...8
• 라. 유전자 형질전환 설치류 모델 개발의 한계점...8
• 마. 유방암 원인 물질 및 치료제 검색을 위한 형질전환 생쥐 모델 개발 필요성...9
• 바. MMTV/c-Neu를 이용한 형질전환 생쥐 모델 개발 목적...9
• Ⅱ. 국내외 기술 개발 현황...10
• Ⅲ. 연구개발수행 내용 및 결과...12
• 1. 연구내용...12
• 가. 1차년도...12
• 나. 2차년도...12
• 다. 3차년도...12
• 2. 연구방법...14
• 가. 실험동물...14
• 나. 사육환경...14
• 다. 시험군의 구성 및 투여량...14
• 라. 관찰 및 검사 항목...14
• 마. MMTV/c-Neu/CYP1B1 triple transgenic mouse 생산...15
• 3. 연구결과...17
• 가. MMTV/c-Neu transgenic mouse에서 화학물질 투여에 의한 유방암 발생 검색...17
• 나. 발암물질 처치 후 유방암 유효성 검증을 위한 병리검사...17
• 다. MMTV/c-Neu/human CYP1B1/TAK triple transgenic mouse 제작...17
• Ⅳ.연구개발목표 달성도 및 대외 기여도...32
• Ⅴ. 연구개발결과의 활용성과 및 계획...33
• Ⅵ. 기타 중요변경사항...33
• Ⅶ. 참고문헌...33
• 총괄 연구과제 요약...35