초록 ▼

HPV 감염을 통한 자궁암 발생 과정을 통해 유형별로 서로 다른 세포주들간에 또한 단독 감염 혹은 중복 감염의 차이에 따른 형태 변화를2차원뿐 아니라 3차원적으로 계측하고 실시간영상으로 세포의 이동을 관찰하여 정량적 세포모델을 구축하는 한편, 세포주기 관련 인자들을 동시에 면역 형광검색을 통해 공초점 현미경으로 관찰하여 상호 유기적 관계와 세포네 위치를 정확히 판별하여 세포주기 측면의 세포모델을 정립하고, 혈관내피세로를 HPV 감염 세포와 동시배양하여, 향후 진단기준을 마련하고 세포주기와 신혈관 생성 모델을 이용하여 항암제 등의 치

HPV 감염을 통한 자궁암 발생 과정을 통해 유형별로 서로 다른 세포주들간에 또한 단독 감염 혹은 중복 감염의 차이에 따른 형태 변화를2차원뿐 아니라 3차원적으로 계측하고 실시간영상으로 세포의 이동을 관찰하여 정량적 세포모델을 구축하는 한편, 세포주기 관련 인자들을 동시에 면역 형광검색을 통해 공초점 현미경으로 관찰하여 상호 유기적 관계와 세포네 위치를 정확히 판별하여 세포주기 측면의 세포모델을 정립하고, 혈관내피세로를 HPV 감염 세포와 동시배양하여, 향후 진단기준을 마련하고 세포주기와 신혈관 생성 모델을 이용하여 항암제 등의 치료 적용 및 효과 판정에 유용한 세포모델을 구축하는데 본 연구의 최종목표가 있음.
자궁암의 진단에 객관적인 형태계측학적 기준이 마련되어 있지 않아 10-50%의 놓은 진단의 불일치를 보이며 human papillomavirus (HPV) 감염에 따른 G2관련 인자들의 관계는 아직 밝혀진 바 없음.
신혈관생성과 자궁암의 관계는 임상적으로 예측되어, 그 연구에 관한 실험적 모델이 필요함.치료의 효과판정을 위해 정량적 계측뿐 아니라 세포수기와 신혈관생성의 측면에서 분자병리학적으로 검정된 새로운 세포모델이 필요함.
각기 다른 유형의 HPV를 감염시킨 세포주들을 대상으로 정량적인 형태계측을 3차원적 영상분석과 confocal 현미경으로 판정함 자궁암 세포의 발암단계별 특성 값에 대한 표준화 데이터 구축. G1과 C2 세포주기 관련 인자들의 상호 연관성을 다발색 면역형광염색을 통해 confocal 현미경으로 확인함, G2 관련 인자들의 활성화와 세포내 위치를 발암 단계별과 HPV유형별로 각기 조사함.
자궁암 세포수와 혈관내피세포를 동시에 배양하여 얻은 세포주를 대상으로 실시간 영상으로 신혈관 형성을 확인하고, 신혈관형성 세포모델을 구축하여 신혈관형성 억제기전을 가지고 있는 thrombospondin-1을 이용한 실험을 시행함.
Cyrclin B1과 기능적으로 활성화 형태의 cdc2인 phospllorylated form of T161과 상관관계를 보였으나 전체 cdc2와는 상관관계가 나타나지 않았음. 이들 발현은 특히 P53 기능이 저하된 HPV 감염세포주에서 현저히 나타났음. Cyclin B1 단백 발현은 특히 HPV 18형이 감면된 검채물에서 가장 현저히 높은 발현을 보였으며, 동일한 전사체 발현을 분석한 결과 HPV유형간에 차이를 보이지 않아 post-transcriptional overexpression으로 생각되었음. Cdc2 and cyclin B1는 nuclear fractional assay에서 세포질보다 핵내에서 더 많은 발현을 보였음.

Abstract ▼

Cytopathologic changes according to the different cell lines with different HPV subtype infection and comparison between single and multiple infection would be measured by 2-D and 3-D analysis, which in tum build cell model of cervical cancer during multistep carcinogenesis caused by HPV infection.<

Cytopathologic changes according to the different cell lines with different HPV subtype infection and comparison between single and multiple infection would be measured by 2-D and 3-D analysis, which in tum build cell model of cervical cancer during multistep carcinogenesis caused by HPV infection.
Immunofluorescent investigation of cell cycle-related gene molecules for clarification of cellular localization and intercellular relations can build cell model with specific regard to the cell cycle. G2 checkpoint molecules has been few studied with regard to HPV infection. Angiogenetic model will be built by co-culture of endothelial cells and epithelial cells with HPV transfection.
We aim at building cervical cancer cell models to be useful for the determination of application boundary and the evaluation of chemotherapeutic agents. The confocal-based three-dimensional reconstruction of image analysis was utilized in different cell Jines and tissue samples with different HPV infection.
HPV18 E6 decreases the fidelity of mitotic checkpoints and increases cdc2-associated histone H1 kinase activity. The G2 checkpoint is aberrant by virtue of the stabilization of eyelin B1 mRNA not only through theupregulation of cdc2 functional active form but also through the upregulation of HuR protein, especially in cervical lesions with HPV 18 infection.
Angiogenesis screening system was constructed m the endothelial cell by thrombospondin-1. In vitro angiogenesis system was constructed from CAM(chorio- allantoic membrane) assay in vivo and by injection of newly designed peptide from the type I repeat of thrombospondin-1 and retinoic acid as a positive control in vitro matrigel.
On a 3D reconstruction of the complete cytomorphology of cytopathic changes as a consequence of HPV infection, we found that multinucleation specific to koilocytes is actually non-dividing form of multilobated single nucleus. We suspect that multinucleation is caused by the limit of 2D plane view that is observed by conventional microscopy. In conclusion, the multinucleation of koilocyte was proven to actually be a single, multilobated nucleus by use of 3D confocal reconstruction analysis.
We developed algorithm of segregation and significance abour specific value to be extracted, and utilized surface and volume rendering by means of three-dimensional visualization.
In the near future, this algorithm could be developed to the automatic screening program based on 3-D image reconstruction overpassing the limitation of 2-D by the conventional microscopy in the field of cytotpathology.

목차 Contents

• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...8
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...8
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...13
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...15
• 4. 사업화 목표 달성도 및 계획(개발과제만 해당)...17
• 5. 총괄연구개발과제의 연구성과...19
• 6. 연구개발결과의 파급효과...38
• 7. 첨부서류...38
• Ⅲ. 제 1 세부연구개발과제 연구결과...39
• 1. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...40
• 2. 제 1 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...41
• 3. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...42
• 4. 제 1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...46
• 5. 제 1 세부연구개발과제의 연구성과...47
• 6. 참고문헌...53
• Ⅳ. 제 2 세부연구개발과제 연구결과...55
• 1. 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...56
• 2. 제 2 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...58
• 3. 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...59
• 4. 제 2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...63
• 5. 제 2 세부연구개발과제의 연구성과...65
• Ⅴ. 제 3 세부연구개발과제 연구결과...68
• 1. 제 3 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...69
• 2. 제 3 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...74
• 3. 제 3 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...80
• 4. 제 3 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...87
• 5. 제 3 세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...88
• 6. 제 3 세부연구개발과제의 활용계획...91
• 7. 참고문헌...91