초록 ▼

단백질 변형 (Post-translational modifications, PTM)은 단백질의 작용 및 활성화에 주로 관계하며, 세포의 다양한 기능, 즉 세포의 분화(differentiation), 사멸(apoptosis) 및 변형(transformation)등을 조절하는 매우 중요한 결정 인자이다. 정확한 단백질의 PTM을 proteomic 분석을 통하여 정확하게 분석하면 신호반응경로 및 단백질의 기능 조절에 중요한 정보를 제공하게 된다. 따라서 단백질 PTM의 종합적인 분석이 필수적으로 선행되어야 한다.
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단백질 변형 (Post-translational modifications, PTM)은 단백질의 작용 및 활성화에 주로 관계하며, 세포의 다양한 기능, 즉 세포의 분화(differentiation), 사멸(apoptosis) 및 변형(transformation)등을 조절하는 매우 중요한 결정 인자이다. 정확한 단백질의 PTM을 proteomic 분석을 통하여 정확하게 분석하면 신호반응경로 및 단백질의 기능 조절에 중요한 정보를 제공하게 된다. 따라서 단백질 PTM의 종합적인 분석이 필수적으로 선행되어야 한다.
$\bigcirc$ Separation 기술: 신호에 의한 단백질 변형분석을 위한 분리기술 개발
- 단백질 변형을 2D gel, western analysis를 통한 정량분석 (high throughput analysis를 통하여 70여개 이상 변형 단백질 확인)
- LC를 이용한 단백질 분획화 (fractionation) 기술
- 변형단백질 농축방법: Ab, domain affinity dolumn chromatography, 면역 침강법, IMAC
$\bigcirc$ MS를 이용한 단백질 변형 분석기술 개발: comprehensive 변형 분석 및 peptide mass coverage 75% 이상
- Top down 방식을 이용한 단백질 변형 분석 : Intact proteins의 ESI-q-TOF MS 분석
- 미량 변형단백질 분석을 위한 SEMSA (Selectively excluded MS analysis) 방법 개발
$\bigcirc$ 정량분석기술 개발: 2D-DIGE system을 이용한 단백질 발현 및 변형 정량분석기술
- 단백질 변형 site 분석을 위한 분석기술 개발
- 2D-DIGE를 이용한 단백질의 차별 발현 분석기술 확보
- 동위원소 label을 통한 단백질변형 정량분석 개발

Abstract ▼

1. Separation technologies for protein modifications: Enrichment of modified proteins (phosphorylation, acetylation, oxidation, ubiquitination etc) in various signaling pathways using various separation technologies
2. Mass spectrometric analysis for protein modifications: Combining the top-down

1. Separation technologies for protein modifications: Enrichment of modified proteins (phosphorylation, acetylation, oxidation, ubiquitination etc) in various signaling pathways using various separation technologies
2. Mass spectrometric analysis for protein modifications: Combining the top-down and bottom up analysis, the comprehensive protein modifications were examined and accurate modification sites were determined using developed methodology
3. Quantitative analysis of protein expression and protein modifications: Quantitative identifications of differentially expressed proteins in thermotolerant and stressed cells using 2D-DIGE, and of tyrosine phosphorylated proteins in angiopoietin-1 induced angiogenesis using western, 2D-gel and mass spectrometry
4. Methodology development for comprehensive identifications of protein modification: SEMSA (selectively excluded mass spectrometric analysis) was designed for the detection of minor mass peaks containing the modifications and was confirmed as a validated methodology.

목차 Contents

• 제출문 ...1
• 초록 ...2
• 요약문 ...3
• SUMMARY ...6
• CONTENTS ...7
• 목차 ...8
• 제1장 연구개발과제의 개요 ...9
• 제1절 연구 개발의 필요성 및 목표 ...9
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ...11
• 제1절 국내외 기술개발 현황 및 연구개발 결과가 차지하는 위치 ...11
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...13
• 제1절 연구 개발수행을 위한 이론적, 실험적 접근방법 ...13
• 제2절 연구 결과 ...15
• 1. Proteomics를 이용한 단백질의 변형 분석...15
• 2. 단백질 발현의 정량 분석...28
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...34
• 제1절 연차별 연구목표 내용, 결과 및 달성도 ...34
• 제2절 연구목표 달성에 필요한 핵심기술 확보에 따른 관련분야의 기술 발전에의 기여도 ...35
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ...36
• 제1절 향후 실용화 및 활용계획 ...36
• 제2절 연구개발을 통해 파생된 성과 ...36
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ...37
• 제7장 참고문헌 ...37
• [첨부1]...41
• [첨부2]...56