초록 ▼

$\circledcire$ 연구개발사업의 목적
1) 약침액의 우수성 및 전달경로를 연구하기 위해 면역증강효과를 중심으로 그 실체를 파악.
2) 약침액의 선택 : (1) 혈자리-신체의 면역조절과 관련된 중완혈 및 비수혈 (2) 비혈자리-대조혈
3) 약침액의 작용경로 연구:
(1) 산알을 통한 경로 : 산알 실체규명에 의한 면역관련 조직에의 영향 탐구
(2) 경맥관을 통한 경로 : 경맥관의 실체규명 및 이에 의한 면역세포에의 영향
4) 자가면역질환치료를 위한 세포성(Th,Tc,Is,m

$\circledcire$ 연구개발사업의 목적
1) 약침액의 우수성 및 전달경로를 연구하기 위해 면역증강효과를 중심으로 그 실체를 파악.
2) 약침액의 선택 : (1) 혈자리-신체의 면역조절과 관련된 중완혈 및 비수혈 (2) 비혈자리-대조혈
3) 약침액의 작용경로 연구:
(1) 산알을 통한 경로 : 산알 실체규명에 의한 면역관련 조직에의 영향 탐구
(2) 경맥관을 통한 경로 : 경맥관의 실체규명 및 이에 의한 면역세포에의 영향
4) 자가면역질환치료를 위한 세포성(Th,Tc,Is,macrophage)과 체액성면역(B세포, autoantibody)조절효과
(1) 세포의 중심 : 세포활성, cytokine분비, MHC expression등을 중심으로 집중적으로 관찰
(2) 세포유전자 중심 : 관련세포 및 물질의 mRNA 및 유전자 레벨에서의 변화를 중심으로
5) 감궁탕약침액에 의한 갑상선세포에서의 신호전달기전연구에 의한 치료제 개발에의 응용
6) 안전성 연구 : (1) 약침투여시 각 organ에 미치는 영향 (2) 독성시험 (3)DNA 및 유전자정보에 미치는 영향
7) 세부과제별 결과를 종합, 비교분석 $\rightarrow$ 감궁탕약침액의 효능을 약재별, 성분별에 의한 과학적이고 체계적인 입증 $\rightarrow$ 데이터베이스화 $\rightarrow$ 자가면역성 갑상선질병 치료를 위한 새로운 약침액을 위한 복합처방전을 개발
$\circledcire$ 연구방법
1) 산알의 분리, 특성연구 : 산알의 형태, 생화학적 연구(핵산, 단백질), 산알-세포환, 산알순환
2) 약침액에 의한 면역조절기전 탐색 및 자가면역질환 치료에의 응용
(1) FACScan에 의한 $Th_{1}$ 및 $Th_{2}$ 세포의 분리 및 약침액의 영향 조사
(2) Helper T세포의 IL-2 의 분비능,Ts의 활성, HLA-DR 표현, CD25, IL-2 beta receptor 표현 측정
(3) Macrophage의 IL-10, IL-12 생성능, CD8 and CD23 분비 측정
3) 갑상선기능성저하증을 포함한 자가면역 질환의 조기진단체제 확립
: 자기항체 및 anti-idiotypic antibody의 제작 및 이를 이용한 새로운 진단법 확립-EnzymelmmunoAaasy
4) 자가면역성 동물 model을 이용한 치료효과 측정-otperimental autoimmune thyroiditis (EAT)
: porcine thyroglobulin(pTg)을 i)deglycosylated porcine Tg(dgpTg) by N-glycanase F treatment 및 ii)native pTg를 범주로 하여 이들을 당쇄제거 Tg의 경우는 adjuvants없이 i.v. CBA/J mice에 주입
5) 약침액 시침에 의한 자가면역성질환 관련 면역세포와 사이토카인의 유전자발현 측정
(1) 면역조절물질 유전자발현 primer 디자인$\rightarrow$면역세포(마크로파지, T, B세포)의 RNA 분리$\rightarrow$ RT-PCR
(2) Thyroxine(T4) 및 Tniodothyronine(T3)의 생성조절물질의 발현 측정
6) 감궁탕 치료기전의 면역학적 규명 (IL-$1\beta$, IL-6, IL-2 receptor, B cell)
7) 감궁탕약침액에 의한 갑상선세포의 신호전달기전을 조사
(1) Fas/Fas ligand system을 통한 apoptosis 신호기전을 규명
(2) Western blot analysis에 의한 세포사멸 억제 유전자 발현 측정
(3) Northern blot analysis에 의한 갑상선세포 분열 조절유전자들의 변화 측정
8) 임상응용전 안정성 규명
(1) 유전자에 미치는 영향 : Ames test, Rec assay 및 Umu test, Host-mediated assay
(2) 효소학적 검사 : GOT, GPT, alkaline phosphatase 및 lactic acid dehydrogenase activity측정
(3) 독성측정 : 급성 독성, 아급성 독성 및 만성독성 측정
9) 임상응용 및 약침제제개발

Abstract ▼

It was proposed that the substance of Kyungrak is a new anatomic-histological system in the living body and entirely different either from the nervous system or blood and lymphatic vessels. This system is covering the whole body, regulating and coordinating the biological processes that lie at the b

It was proposed that the substance of Kyungrak is a new anatomic-histological system in the living body and entirely different either from the nervous system or blood and lymphatic vessels. This system is covering the whole body, regulating and coordinating the biological processes that lie at the bottom of the vital activity. One of the substance of Kyungrak is acublast. The aim of this study was to isolate and culture the acublast from human placenta or blood of umbilical cord. It was found that particular cell organism isolated from placenta and cultured with RPMI 1640 containing $10\%$ FBS and hormones was grown for four weeks. Although this organism was different from blood cells morphologically, biochemical study of the organism is required to identify as the acublast. The effects of Gamgung-tang (GGT, Glycyrrhizae Radix, black beans, Angelicae Radix, and Cnidii Rhizoma) on cytokine-induced cytotoxicity and thyroid major histocompatibility complex (MHC) class II antigen expression in FRTL rat thyrocytes were investigated. No effect on cell growth was found with interferon (IFN)-v. However, tumor ne)crosis factor (TNF)-$\alpha$ was cytotoxic, and this was increased by preincubation with IFN-$\gamma$. Ethanol extract of GGT (0.315 mg/ml) in both regimens significantly inhi bited IFN-$\gamma$ and TNF-${\alpha}$-mediated cytotoxicity of rat thyroid cells (p < 0.05 and p < 0.01) In addition, IFN-$\gamma$ (1100 U/ml) treatment induced class II antigen expression in up to $60\%$ of FRTL cells, as detected by a murine monoclonal antibody to rat MHC class II antigen (FITC-OX6). Aberrant thyroid cell MHC class II antigen expression induced by IFN-$\gamma$ is suppressed by the extract of GGT. Apoptosis plays an important role in autoimmune chronic (Hashimoto''s) thyroiditis, a disorder that often results in hypothyroidism. It was investigated a potential role of GGT in the thyroid follicular cells (FRTL). The apoptosis was evaluated by cellular viability, DNA fragmentation, and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxy-UTP nick end labeling (TUNEL) assay. Extract of GGT ($0.3\∼9.0mg/m{\ell}$) was shown to maintain the viability of cells treated with IFN-$\gamma$ ($100\;U/m{\ell}$) and TNF-$\alpha$ (0.5 $ng/m{\ell}$). FRTL cells were found to undergo DNA fragmentation with the inflammatory cytokines. The extract of GGT inhibited DNA fragmentation in dose-dependent manner. The cells with TUNEL-positive nuclei were detected with IFN-$\gamma$ and TNF-$\alpha$ treatment. The number of TUNEL -positive cells decreased with the treatment of extract of GGT. Inflammatory cytokine, abundantly produced in Hashimoto''s thyroiditis, induced Fas expression in normal thyrocytes. We determined that susceptibility to Fas-activated apoptosis could be influenced by inflammatory cytokine and investigated a potential role of GGTin the thyroid follicular cells. $IL-1\beta$ was able to induce Fas expression in normal thyrocytes. GGT inhibited $IL-1\beta$-induced Fas expression. Human thyroid follicular cells were found to undergo DNA fragmentation with the inflammatory cytokines. GGT inhibited DNA fragmentation in a dose-dependent manner. Abnormal thyroid cell proliferation has a very important role in hypothyroidism. Thyroid stimulating hormone (TSH) stimulates proliferation and maintains differentiated function in thyroid follicular cells. A functioning rat thyroid cell line (FRTL) was used to study the effect of GGT on proliferation and cAMP accumulation of thyrocytes. Proliferation of cell was assessed by DNA synthesis and incorporation of [$^{3}H$]thymidine into DNA.

목차 Contents

• II. 총괄연구개발과제 연구결과...9
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...9
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...13
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...25
• 4. 사업화 목표 달성도 및 계획(개발과제만 해당)...32
• 5. 총괄연구개발과제의 연구성과...33
• 6. 연구개발결과의 파급효과...77
• 7. 참여 연구원 편성표(총괄)...77
• 8. 첨부서류...77
• III. 제 1 세부연구개발과제 연구결과...217
• 1. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...218
• 2. 제 1 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...219
• 3. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...219
• 4. 제 1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...228
• 5. 참고문헌...229
• IV. 제 2 세부연구개발과제 연구결과...231
• 1. 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...232
• 2. 제 2 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...234
• 3. 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...238
• 4. 제 2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...246
• 5. 참고문헌...248
• V. 제 3 세부연구개발과제 연구결과...250
• 1. 제 3 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...251
• 2. 제 3 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...253
• 3. 제 3 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...256
• 4. 제 3 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...266
• 5. 참고문헌...267
• VI. 제 4 세부연구개발과제 연구결과...269
• 1. 제 4 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...270
• 2. 제 4 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...272
• 3. 제 4 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...273
• 4. 제 4 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...283
• 5. 참고문헌...284