초록 ▼

현 알부민 열안정성 시험법으로서 국내와 일본에서만 적용되고 있는 Light scattering 방법의 문제점 및 교체 곤란한 노후된 기기를 사용함에 있어 개선의 필요성이 있는바, 국제기준과의 조화를 꾀할 수 있는 대체시험법 연구를 목표로 하여 다음과 같이 연구하고자 하였다. 첫째, light scattering 측정시험과 그 원리가 유사한 turbidity 측정시험을 비교하고 둘째, 유럽기준에서 polymer 측정시험에 적용하고 있는 chromatography 법을 실시하여 셋째, polymer 또는 aggregate를 정확하고 편

현 알부민 열안정성 시험법으로서 국내와 일본에서만 적용되고 있는 Light scattering 방법의 문제점 및 교체 곤란한 노후된 기기를 사용함에 있어 개선의 필요성이 있는바, 국제기준과의 조화를 꾀할 수 있는 대체시험법 연구를 목표로 하여 다음과 같이 연구하고자 하였다. 첫째, light scattering 측정시험과 그 원리가 유사한 turbidity 측정시험을 비교하고 둘째, 유럽기준에서 polymer 측정시험에 적용하고 있는 chromatography 법을 실시하여 셋째, polymer 또는 aggregate를 정확하고 편리하게 측정할수 있는 타당한 시험법을 제시하고자 하였다. 알부민 제품을 57℃에서 50시간 열처리하여 시험물질로 측정하는 시험법과 달리 68℃에서 시간별, 단백농도별 조건에 대해 열변성 표준검체를 제조한 후, 다음과 같이 적용성이 우수한 3가지의 시험법으로 분석하여 적절한 대체시험법의 근거를 마련하고자 하였다. 첫째, 대조군으로서 기존에 사용중인 light scattering 기기에 의한 측정과 함께 측정방법이 유사한 laser light scattering 기기를 이용하여 중합체 및 입자를 분석하였다. 아울러 입자크기를 분석할 수 있는 입도분석기로도 분석하였다. 그 결과 기존의 기기와 laser light scattering 기기의 측정결과는 거의 동일하게 확인되었다. 둘째, 열변성 시간에 따른 알부민 검체의 탁도(Turbidity)측정결과, linearity를 확인하였으며 light scattering의 결과와도 상관성도 확인하였다. 세째, 열변성 알부민 검체의 chromatography(HPLC) 측정시험결과, 시간에 따른 polymer의 증가가 유의적으로 관찰되었으나 육안 및 light scattering 결과와는 부분적으로만 일치하였다. 이는 insoluble particle이 HPLC에서는 확인될 수 없기 때문이다. 넷째, 열변성 알부민의 단백 검체의 2차구조 측정을 통해 polymer의 증가와의 연관성을 분석하고자 circular dichroism (CD) 측정시험을 실시하였으나 유의적인 결과를 얻지 못하였다. 이러한 실험결과를 토대로 하여 기존의 light scattering method를 대체할 수 있으며 국제기준과 조화되는 시험법은 아래와 같이 고려할 수 있다. 1) EP기준인 HPLC법에 혼탁도 시험을 추가하여 열변성에 의한 중합체 및 불용성 입자를 측정하는 것이 적절하다. HPLC 자체는 육안관찰로 확인되는 불용성물질을 분석할 수 없기 때문이다. 2) USP 기준인 육안관찰에 혼탁도 시험을 추가하여 열변성에 의한 불용성 입자를 측정
하는 것이 적절하다. 육안관찰만으로는 정량적 시험이 불가하기 때문이다. 본 연구결과를 통해 국제기준과의 조화로 품질관리의 국제표준화 함으로써 생물학적 제제기준의 고시개정 근거를 마련할 수 있을 것으로 기대된다.

Abstract ▼

Presently, light scattering method use to assay the heat stability of albumin on domestic area and Japan. But using this method many problems presents such that the equipment of analysis is old and inaccurate to measure, and also expensive to purchase. In other case, this method is not compliance wi

Presently, light scattering method use to assay the heat stability of albumin on domestic area and Japan. But using this method many problems presents such that the equipment of analysis is old and inaccurate to measure, and also expensive to purchase. In other case, this method is not compliance with the international regulation. In order to solve problems above, we will perform studys below. Firstly compare the light scattering method to the turbidity method, secondly perform the chromatography method adopted in Europe (EP), thirdly we will sugest a rationale method able to mesure a polymer or aggregate correctly and easely. The test samples of albumin heated were prepared by new method that it treated at 68℃ under condition each time and protein concentration (The present method is that it did at 57℃ for 50 hours). And then, in order to develope a substitute method for heat stability of albumin, following researches were conducted.. 1) As control experiment, in order to measure a polymer or particle, a light scattering equipment, nephelometer compare to a laser light scattering equipment that similar to that. The data from nephelometer similar to that from laser light scattering. 2) According to the result of turbidity of albumin heated vary to time, it has linearity and correlation to the data of light scattering. 3) In case of chromatography(HPLC) against albumin heated, it revealed to elevate polymers according to heating time, but is not compliance to naked eye test and light scattering data. Its assume that insoluble particle can't be detected on HPLC experiment

목차 Contents

• 표지...1
• 용역연구사업 연구결과보고서...2
• 제출문...3
• 목차...4
• I. 연구결과보고서 요약문...5
• 1. 국문요약문...5
• 2. SUMMARY...6
• II. 총괄연구개발과제 연구결과...7
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...7
• 1.1. 총괄연구개발과제의 목표...7
• 1.2. 연구의 필요성...7
• 1.3. 총괄연구개발과제의 목표달성도...8
• 1.4. 국내?외 기술개발 현황...9
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...12
• 2.1. 연구내용...12
• 2.1.1. 열안정성 시험의 의의...12
• 2.1.2. 열안정성 측정법 원리...14
• 2.1.3 실험과정상의 난제 및 해결방안...16
• 2.2. 연구방법...17
• 2.2.1. 자료수집 및 검토...17
• 2.2.2. 검체의 준비: 열 변성 알부민 검체의 제조...17
• 2.2.3. 열변성 알부민의 (절대)탁도 및 Particle 분석...18
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과...21
• 3.1. 국제기준의 열안정성 시험법중 검토 결과...21
• 3.2 . 열변성 표준검체 제조방법 확립...21
• 3.2.1. 조제검체의 시험법 적용 타당성 조사...21
• 3.2.2 보관조건에 따른 검체 안정성 조사결과...23
• 1) 냉장보관후 절대탁도에 미치는 영향...23
• 2) 상온보관 후 절대탁도에 미치는 영향...23
• 3.3. 대체가능한 열안정성 측정시험방법들에 대한 분석 결과...28
• 3.3.1. 생물학적제제 기준방법...28
• 1) Monophotometer를 이용한 절대탁도값에 대한 육안관찰의 비교결과...28
• 2) Laser light scatter를 이용한 절대탁도와 Monophotometer 측정값과의 비교...31
• 3.3.2. 대체가능시험법 1: 탁도와 절대탁도 측정값의 비교...34
• 1) 열변성 알부민을 표준품으로 하여 탁도와 절대탁도의 비교...34
• 2) 탁도 표준품, Formarzin을 표준품으로 하여 탁도와 절대탁도의 비교 I...37
• 3) 탁도 표준품, Formarzin을 표준품으로 하여 탁도와 절대탁도의 비교 II...39
• 3.3.3. 대체가능시험법 2: EP 방법(HPLC)과 유사방법에 따른 분석결과...40
• 1) 열변성 알부민 검체의 chromatography(HPLC) 측정시험 및 분석...40
• 2) 열변성 알부민 검체의 Low pressure gel permeation chromatography (LPGPC) 분석...42
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...44
• 4.1. 연구결과의 고찰...44
• 4.2 연구결과의 결 론...49
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과...50
• 5.1 활용성과...50
• 5.2 활용계획...51
• 제6장 기타 중요변경사항...52
• 제7장 참고문헌...53
• 제8장 첨부서류...55
• 총괄 연구과제 요약...56