초록 ▼

독감 백신 개발을 위한 실험을 위해 신규 면역 보조제를 당사에서 이미 확립한 생산 공정에 따라 대량 생산하였음. DNA 생산 균주인 EG0022로부터 신규 면역보조제 성분 중 하나인 적정 크기로 절단한 Bacterial DNA fragment를 총 60.6 mg을 생산 완료하였으며 다른 성분인 비독성 LPS 생산을 위해 LPS 생산 균주인 EG0021의 300L scale 대량 배양을 통해 1.2 kg 균체를 확보하여 그 중 400 g을 취하여 비독성 LPS 60 mg을 생산 완료하였음. 생산한 두 가지 신규 면역보조제 성분은 혼합

독감 백신 개발을 위한 실험을 위해 신규 면역 보조제를 당사에서 이미 확립한 생산 공정에 따라 대량 생산하였음. DNA 생산 균주인 EG0022로부터 신규 면역보조제 성분 중 하나인 적정 크기로 절단한 Bacterial DNA fragment를 총 60.6 mg을 생산 완료하였으며 다른 성분인 비독성 LPS 생산을 위해 LPS 생산 균주인 EG0021의 300L scale 대량 배양을 통해 1.2 kg 균체를 확보하여 그 중 400 g을 취하여 비독성 LPS 60 mg을 생산 완료하였음. 생산한 두 가지 신규 면역보조제 성분은 혼합 후 품질 관리 시험을 거쳐 마우스 기준 10,000 dose를 생산 완료하였음. 신규면역보조제 CIA07은 HA를 백신항원으로 사용한 경우 1회 접종하고 4주 후 혈청 총 IgG 항체역가는 항원단독 접종 군이나 alum 투여 군에 비하여 유의성있게 높았으며 현재 많은 상용화 백신의 면역보조제로 개발되고 있는 CpG 1826 (S) 보다도 높은 것으로 나타났음. 또한 독감백신으로 2회 접종하고 4주 후에는 CIA07 에 의한 항체역가 상승이 1회 때 보다 더 높은 것으로 나타나 CIA07은 단백질 백신 항원의 체액성 면역활성 증진 기능이 매우 높은 것으로 사료됨. 한편 혈중 총 IgG 항체역가 뿐만 아니라 IgG2a 항체역가가 항원 단독투여 군이나 alum 보다 월등히 높게 나타나 CpG 1826 과 비견 할 만 하며 MHC pentamer-Ag complex+ CD8+ 세포 활성 측정시험에서도 CIA07은 항원 단독투여 군이나 alum 투여 군에 비하여 높은 활성을 보여 항원 특이적인 세포성 면역반응 활성화시키는 것으로 나타났으며 in vitro실험에서도 CIA07은 대식세포의 cytokine 분비를 촉진하는 것이 확인되었음. 이와 같은 연구결과를 종합해 볼 때 CIA07은 독감백신 항원의 체액성 면역뿐만 아니라 세포성 면역을 활성화 시키며 따라서 독감백신의 효능을 증대시키기 위하여 사용가능할 것으로 사료됨.

Abstract ▼

The final goal of the research project is to develop an influenza vaccine with high immunogenicity and low side effects using a new adjuvant. To investigate the possibility of using CIA07 as an adjuvant for influenza vaccine, we manufactured 1000 doses of CIA07 from 60.6 mg of bacterial DNA fragment

The final goal of the research project is to develop an influenza vaccine with high immunogenicity and low side effects using a new adjuvant. To investigate the possibility of using CIA07 as an adjuvant for influenza vaccine, we manufactured 1000 doses of CIA07 from 60.6 mg of bacterial DNA fragments and 60 mg of non-toxic LPS. The general safety test was performed and the results showed that CIA07 had no detectable adverse effects, Next, we determined the immunogenicity of the influenza vaccine antigen given with CIA07 as an adjuvant. Balb/c mice were given 1.5 g of a trivalent influenza subunit vaccine with CIA07 as a vaccine adjuvant. Four or eight weeks post-immunization, mice were sacrificed and serum antibody titer and haemagglutination-inhibition titer were determined. Four weeks after a single immunization, vaccine antigen-specific serum IgG antibody titer was 5-times higher in the mice immunized with CIA07 as compared with those given Ag only or alum as a adjuvant, whereas serum IgG2a antibody titer was 11 times higher in the mice immunized with CIA07 than Ag only group. Eight-weeks post-immunization, serum IgG and IgG2a antibody titers further increased in the both groups but the difference between the groups was reduced to 2.5 and 5.5-fold, respectively. CIA07-treated group also exhibited significantly higher HI titers against three vaccine strains than the group given antigen only. The CTL activity was determiend by measuring MHC pentamer-Ag complex CD8+ cells and the results reveaed a higher number of Ag-specific CTL cells in the blood of mice given CIA07 as compared with mice given Ag only or alum as an adjuvant, These data demonstrate that CIA07 enhances humoral and cellular immune responses, suggesting the potential of CIA07 as an adjuvant for influenza vaccine.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 편집목차 ...2
• 제출문 ...3
• 보고서 요약서 ...4
• 요약문 ...5
• SUMMARY ...7
• 1. 총괄연구개발과제의 연구성과 ...8
• 2. 총괄연구결과 세부내용 ...9
• 3. 향후 성과 추진 계획 ...19
• 4. 참여연구원 편성표(총괄) ...21
• 목차 ...22
• 제 1 장 연구개발과제의 개요...23
• 1. 연구배경 및 연구의 필요성 ...23
• 2. 개발목표 및 범위 ...25
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...27
• 1. 국내.외 관련분야에 대한 기술개발현황 ...27
• 2. 연구결과가 국내.외 기술개발현황에서 차지하는 위치 ...28
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...30
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ...30
• 2. 총괄연구개라과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...33
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...33
• 1. 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...33
• 2. 연구개발결과의 파급효과 ...34
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...34
• 1. 연구개발결과의 활용계획 및 추가연구의 필요성 ...34
• 2. 사업화(기업화) 목표 달성도 및 계획 ...35
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...36
• 제 7 장 참고문헌...39
• 제 8 장 첨부서류...39
• 제 1 세부연구개발과제 연구결과:신규 면역보조제의 대량생산 및 백신조합조건 연구...57
• 제 2 세부연구개발과제 연구결과:신규 면역보조제의 이용한 독감백신의 효능평가 및 세포면역기전 연구...66