초록 ▼

본 연구에서는 축 수산식품 중에 잔류하는 동물용의약품 시험법의 신뢰성, 정밀성 및 효율성을 증대시키기 위해, 동물용의약품으로 사용되는 올레안도마이신, 노보비오신 및 디미나진에 대한 잔류물질 분석법 개발을 수행하였다. 국내 식품공전에 잔류검사를 위한 정밀기기분석법이 제시되어 있지 않은 올레안도마이신과 노보비오신에 대하여 HPLC 또는 LC-MS/MS 분석법 개발을 수행하였고, 디미나진에 대해서는 식품공전 일반시험법 중 식품 중 잔류물질시험법에 제시되어 있는 HPLC 분석법을 개선하였다. 비용 및 적용의 편의성을 고려하여 우선적으로 H

본 연구에서는 축 수산식품 중에 잔류하는 동물용의약품 시험법의 신뢰성, 정밀성 및 효율성을 증대시키기 위해, 동물용의약품으로 사용되는 올레안도마이신, 노보비오신 및 디미나진에 대한 잔류물질 분석법 개발을 수행하였다. 국내 식품공전에 잔류검사를 위한 정밀기기분석법이 제시되어 있지 않은 올레안도마이신과 노보비오신에 대하여 HPLC 또는 LC-MS/MS 분석법 개발을 수행하였고, 디미나진에 대해서는 식품공전 일반시험법 중 식품 중 잔류물질시험법에 제시되어 있는 HPLC 분석법을 개선하였다. 비용 및 적용의 편의성을 고려하여 우선적으로 HPLC를 이용한 대상약물의 분석법 개발을 시도하였고, 검출 감도 및 시료 전처리 법에 문제가 있는 경우 LC-MS/MS 분석법의 개발을 추진하였다.
UV 흡광 감도가 낮은 화학구조를 가진 올레안도마이신을 대상으로 LC-MS/MS를 이용한 고감도 분석법을 개발하였다. LC-MS/MS 분석법의 특성상 주입된 시료의 이온화되는 편차 발생에 따른 정확성 문제를 해결하기 위하여 내부표준물질을 사용하였으며, 내부표준물질로는 마크로라이드계 항생물질 중 화학구조와 분자량이 유사한 록시스로마이신을 사용하였다. 올레안도마이신의 잔류 대상 식품으로 선정된 돼지, 소, 닭, 광어 및 뱀장어의 조직으로부터 잔류하는 올레안도마이신을 분석하기 위하여, 각각의 대상 조직 시료를 아세토니트릴/메탄올 (95/5, v/v)로 제단백한 후 농축 및 재분산을 거쳐, 헥산으로 지용성 불순물을 제거하고, 디클로로메탄으로 재추출하여 증발건고 후 30% 아세토니트릴로 재분산한 용액을 LC-MS/MS에 주입하여 LC-MS/MS 크로마토그램을 얻고, 내부표준물질과의 피크면적비를 이용하여 정량하였다.
노보비오신의 HPLC 분석법을 개발하기 위하여 미국 농무부 산하 식품안전검사국에서 제시하는 노보비오신의 동물 조직 중 HPLC를 이용한 시험법을 참조하였고, 전처리 방법 및 감도를 일부 개선하였다. 본 연구에서 돼지, 소, 닭, 광어 및 뱀장어의 조직으로부터 노보비오신을 분석하기 위하여, 각각의 대상 조직 시료를 메탄올로 제단백한 후 헥산으로 지용성 불순물을 제거하고 HPLC/UV로 정량분석 하였다.
식품공전의 일반시험법 중 식품중의 잔류물질시험법에는 합성항균제 디미나진 시험법 및 유 중 잔류하는 디미나진의 시험법이 기재되어 있으며, 국립수의과학검역원 잔류물질 검사반 교재에는 혈청 중 디미나진의 시험법이 기재되어 있다. 이 시험법들을 참조하여 돼지, 소, 닭, 광어, 장어 및 우유를 대상으로한 디미나진의 잔류 분석법을 개선하였다 식품공전의 식품 중 잔류하는 디미나진의 시험법에서 제시하는 a-나프틸에틸 렌디아민으로 발색시켜 분광계로 측정하는 방법은 감도 및 정밀성과 정확성이 정밀정량시험법으로써 충분하지 않다. 따라서 본 연구에서는 동물 조직 시료를 메탄올로 제단백한 후 헥산으로 지용성 분순물을 제거하고, HPLC에 주입하여 분석하는 비교적 간단하고 정밀 정확한 분석법을 개발하였다. 또한 SPE법을 사용한 유 중 잔류하는 디미나진의 시험법을 개선하기 위하여 용리액을 농축하여 HPLC/UV로 분석한 결과, 분석법의 검출 감도를 높일 수 있었다.
이상의 확립된 분석법들을 CODEX guideline을 참조하여 분석법 검증을 실시한 결과 양호한 직선성, 정밀성, 정확성 및 회수율을 얻었다. 또한 각각의 대상 시료에 대하여 최대잔류허용한계 보다 날은 농도에서 정량한계를 설정하였으며, 검증된 각각의 분석법에 대하여 시험법 전반에 대한 표준작업지침서 (SOP)를 작성하였다.

Abstract ▼

A simple, sensitive, reliable, and rapid analytical methods for determination of residual oleandomycin, novobiocin, and diminazene in livestock products and fisheries products have been developed and validated. LC-MS/MS and HPLC method were developed for analysis of residual oleandomycin and novobio

A simple, sensitive, reliable, and rapid analytical methods for determination of residual oleandomycin, novobiocin, and diminazene in livestock products and fisheries products have been developed and validated. LC-MS/MS and HPLC method were developed for analysis of residual oleandomycin and novobiocin which instrumental analytical methods for determination of residual levels were not demonstrated in the Korean Food Code. And the HPLC method which described in the Korean Food Code for analysis of residual diminazene was modified to improve the method. The study was focused analytical tools on HPLC methods preferably which have cost-benefit and wide usage. To ensure detection sensitivity, residual analysis of oleandomycin which has lack of UV absorbance have been developed by LC-MS/MS.
Oleandomycin was extracted from bovine, porcine, chicken, flatfish and japanese eel muscles with acetonitrile-methanol (95:5, v/v) and the extract were delipidated with n-hexane saturated with acetonitrile. Then, the lower layer was re-extracted with dichlorormethane. The dichloromethane extract was evaporated, dissolved with 30% acetonitrile, analysed by liquid chromatography on a ODS column, and determined by electrospray ionization tandem mass spectrometry. The internal standard, roxithromycin was used.
Residues of novobiocin and diminazene were extracted from bovine, porcine, chicken, flatfish and japanese eel muscles by blending with methanol. The homogenates were centrifuged to remove solid material and aliquot of the organic extracts were removed and delipidated with n-hexane. Then, the extracts were filtered and injected into HPLC/UV. Novobiocin and diminazene were determined in a isocratic elution HPLC analysis oil an reverse phase LC column.
A simple HPLC method was developed for the determination of diminazene in bovine milk. Diminazene was extracted from milk components on a solid phase extraction column (SPE). The SPE tubes were conditioned with 3 mL of methanol, followed by 3 mL of water. Milk were passed through the SPE tubes and then 3 mL of methanol was passed through the tubes as a clean-up step, the effluent discarded. Analytes were eluted with 2 mL of acetonitrile/0.025 M sodium 1-octane-sulfonate containing 2% acetic acid (75/25, v/v). The eluent was evaporated after which the residue was redissolved by mobile phase and analysed by HPLC/UV on a ODS column.
Limits of quantification show that the methods developed can be used to detect the veterinary drugs in concentrations below the maximum residue levels (MRL) established by the Codex Alimentarius. The procedures were validated according to the CODEX guideline determining specificity, linearity, accuracy, precision, quantitation limit and recovery. The results of validation process demonstrate that the methods are suitable for application in standard method of the Korean Food Code.

목차 Contents

• 표지...1
• 용역연구사업 연구결과보고서...2
• 제출문...3
• 목차...4
• I. 연구결과보고서 요약문...5
• 국문요약문...5
• 영문요약문...6
• II. 총괄연구개발과제 연구결과...7
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...7
• 1.1 총괄연구개발과제의 목표...7
• 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도...11
• 1.3 국내.외 기술개발 현황...11
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...15
• 2.1 LC-MS/MS법을 이용한 올레안도마이신의 잔류분석법 개발...15
• 2.2 HPLC/UV법을 이용한 디미나진의 잔류분석법 개발...19
• 2.3 HPLC/UV법을 이용한 노보비오신의 잔류분석법 개발...26
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과...29
• 3.1 LC-MS/MS법을 이용한 올레안도마이신의 잔류분석법 개발...29
• 3.2 HPLC/UV법을 이용한 디미나진의 잔류분석법 개발...36
• 3.3 HPLC법을 이용한 노보비오신의 잔류분석법 개발...44
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...50
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과...52
• 5.1 활용성과...52
• 5.2 활용계획...53
• 제6장 기타 중요변경사항...54
• 제7장 참고문헌...55
• 제8장 첨부서류...57
• LC-MS/MS법을 이용한 동물 고기 조직 중 Oleandomycin의 잔류분석법...58
• HPLC법을 이용한 동물 고기 조직 중 Diminazene의 잔류분석법...67
• HPLC법을 이용한 유 중 Diminazene의 잔류분석법...74
• HPLC법을 이용한 동물 고기 조직 중 Novobiocin의 잔류분석법...82
• 총괄 연구과제 요약...89