보고서 정보
주관연구기관 |
서울대학교 Seoul National University |
연구책임자 |
김영중
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2006-11 |
과제시작연도 |
2006 |
주관부처 |
식품의약품안전청 |
사업 관리 기관 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
등록번호 |
TRKO200700007648 |
과제고유번호 |
1470001424 |
사업명 |
독성연구개발 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
산수유.생리활성성분.동시분석.생체지표유전자.Angelica gigas.Cornus officinalis.active compound.stimultaneous analysis.biomarker.
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초록
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본 연구과제는 여러 가지 한방 처방에 자주 사용되고 있는 한약재인 당귀와 산수유를 대상으로 하여 이들의 유효성분 후보물질을 분리하고 동정하여 새로운 지표성분으로 개발하고자 수행하였다. 또한, 이들 한약재의 새로운 지표성분들에 대해 재현성과 편리성이 향상된 새로운 분석법을 개발하여 품질 및 규격 관리의 효율성을 높이고자 하였으며, 한약재의 약리기전 연구에 유전자 칩 기술을 도입하여 한약재의 효능을 객관적으로 증명하고자 하였다. 참당귀 및 산수유로부터 유효성분분리를 시도하여 당귀로부터 총 13종의 화합물, decursin (1), de
본 연구과제는 여러 가지 한방 처방에 자주 사용되고 있는 한약재인 당귀와 산수유를 대상으로 하여 이들의 유효성분 후보물질을 분리하고 동정하여 새로운 지표성분으로 개발하고자 수행하였다. 또한, 이들 한약재의 새로운 지표성분들에 대해 재현성과 편리성이 향상된 새로운 분석법을 개발하여 품질 및 규격 관리의 효율성을 높이고자 하였으며, 한약재의 약리기전 연구에 유전자 칩 기술을 도입하여 한약재의 효능을 객관적으로 증명하고자 하였다. 참당귀 및 산수유로부터 유효성분분리를 시도하여 당귀로부터 총 13종의 화합물, decursin (1), decursinol (2), decursinol angelate (3), demethylsuberosine (4), isolmperatorin (5), umbelliferone (6), 7-hydroxy-6-(2-(R)-hydroxy-3-methylbut-3-enyl) coumarin (7), peucedanone (8), marmesin (9), marmesinin (10), nodakenin (11), xanthoarnol (12), (+)-9(Z),17-octadecadiene-12,14-diyne-1,11-16-triol (13)를 분리하였고, 산수유로부터 총 11종의 화합물, loganin (1), morroniside (2), gallic acid (2), (7S)-O-methylmorroniside (4), (7R)-O-methylmorroniside (5), cornuside (6), betulinic acid (7), ursoilc acid (8), methyl gallate (9), mallic acid (10), 1-methyl mallate (11)를 분리하였다. 또한 당귀 및 산수유의 효율적인 분석법을 확립하고자 LC-DAD-MS/MS를 이용하여 당귀로부터 분리한 6종의 coumarin계열 성분과 산수유로부터 분리한 2종의 iridoid계열 성분과 1종의 tannin 성분에 대한 동시 정량법을 개발하고, 이 분석법에 대한 유의성 검증 및 시중 유통 생약에 대한 지표성분의 함량 평가를 시행하였다. 또한 약효검색 조건을 확립하고 당귀 추출물 및 그 성분인 decursin, decursinol, nodakenin의 활성을 검색한 결과 $MPP^{+}$로 독성을 유발시킨 신경세포주에서는 apoptotic 저해 활성을 나타내었으며, 암세포주에서는 cytotoxicity를 나타냄을 확인하였다. 그리고 산수유 추출물 및 그 성분인 loganin, betulinic acid, ursoilc acid, gallic acid를 전립선암세포주에 대하여 독성을 측정하였다. 유전자 칩 분석을 위하여 당귀 추출물 및 그 성분들은 신경세포주인 SH-SY5Y를 이용하였고, 산수유 추출물 및 그 성분들은 전립선암세포주인 DU145를 이용하여 유전자 발현 패턴을 분석하였다. 유전자 칩 분석결과를 토대로 하여 각 약물에 의하여 발현이 변화되는 유전자를 선별하여 당귀 및 산수유의 약리활성지표로 사용할 수 있는 지표유전자를 발굴하였다.
Abstract
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On the basis of the reputation of Angelica gigas and Cornus officinalis as herbal drugs, we initiated studies to investigate the bioactive constituents of each plant. In addition, we attempted to develop an improved method for identification and quantification of bioactive consituents in view of rep
On the basis of the reputation of Angelica gigas and Cornus officinalis as herbal drugs, we initiated studies to investigate the bioactive constituents of each plant. In addition, we attempted to develop an improved method for identification and quantification of bioactive consituents in view of reproducibility and convenience. We also tried to verify an pharmacological activity of herbal medicine scientifically by introducing DNA chip technique to mechanism study of herbal medicine.
Twelve coumarin derivatives and one polyacetylene were obtained from the roots of A. gigas Nakai (Umbelliferae). They were identified as decursin (1), decursinol (2), decursinol angelate (3), demethylsuberosine (4), isolmperatorin (5), umbelliferone (6), 7-hydroxy-6-(2-(R)-hydroxy-3-methylbut-3-enyl) coumarin (7), peucedanone (8), marmesin (9), marmesinin (10), nodakenin (11), xanthoarnol (12), and (+)-9(Z),17-octadecadiene-12,14-diyne-1,11-16-triol (13) respectively, by comparison of physical and spectral data with those reported in the literature. And, eleven compounds were isolated from the fruit of C. officinalis. They were identified as loganin (1), morroniside (2), gallic acid (2), (7S)-O-methylmorroniside (4), (7R)-O-methylmorroniside (5), cornuside (6), betulinic acid (7), ursoilc acid (8), methyl gallate (9), mallic acid (10), 1-methyl mallate (11) respectively. In addition, a HPLC-DAD-MS/MS methods for identification and quantification of six coumarins isolated from A. gigas and two iridoids and one tannin isolated from C. officinalis were developed and validated. The total extract of A. gigas and three coumarins (decursin, decursinol, nodakenin) inhibited $MPP^+$-induced apoptosis in neuroblastoma cell line. In contrast, they showed significant cytotoxic effect in several cell line such as PC3, DU145 and HeLa. In case of C. officinalis, total extract and four compounds (loganin, betulunic aci d, ursolic acid and gallic acid) showed cytotoxic effect in DU145 cell line. In order to investigate the genes involved in bioactivity of A. gigas or C. officinalis, SH-SY5Y or DU145 cell lines were treated by total extract or isolated active compounds, respectively. According to DNA microarray analysis results, we selected genes that changed expression patterns by each compounds and identified them as bioactive gene markers of A. gigas or C. officinalis.
목차 Contents
- 표지...1
- 용역연구사업 연구결과보고서...2
- 연구과제제안서(REP)...3
- 제출문...5
- 목차...6
- 연구결과보고서 요약문...8
- Summary...9
- II. 총괄연구개발과제 연구결과...10
- 제 1 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...10
- 제 2 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...16
- 제 3 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과...26
- 제 4 장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...86
- 제 5 장 총괄연구개발과제의 연구성과...89
- 제 6 장 기타 중요변경사항...91
- 제 7 장 참고문헌...91
- 제 8 장 첨부서류...91
- III. 제 1 세부연구개발과제 연구결과:당귀 및 산수유의 생리활성 성분 분리...92
- 제 1 장 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...93
- 제 2 장 제 1 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...96
- 제 3 장 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...99
- 제 4 장 제 1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...104
- 제 5 장 제 1 세부연구개발과제의 연구성과...117
- 제 6 장 기타 중요변경사항...118
- 제 7 장 참고문헌...119
- 제 8 장 첨부서류...120
- IV. 제 2 세부연구개발과제 연구결과:HPLC/MS(MS)를 이용한 당귀 및 산수유의 생리활성 성분 동시분석...121
- 제 1 장 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...122
- 제 2 장 제 2 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...126
- 제 3 장 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...129
- 제 4 장 제 2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...162
- 제 5 장 제 2 세부연구개발과제의 연구성과...164
- 제 6 장 기타 중요변경사항...165
- 제 7 장 참고문헌...165
- 제 8 장 첨부서류...165
- V. 제 3 세부연구개발과제 연구결과:유전자 칩을 활용한 한약재 생리활성 성분의 효능유전자 검증연구...166
- 제 1 장 제 3 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...167
- 제 2 장 제 3 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...170
- 제 3 장 제 3 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...178
- 제 4 장 제 3 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...215
- 제 5 장 제 3 세부연구개발과제의 연구성과...217
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