초록 ▼

⊙ 최근 우리나라에서는 식품의약품안전청 고시 제2003-27호 「식품등의표시기준중개정」을 발표하여 식품 원재료중 알레르기 유발물질 11종의 표시를 의무화하였으나, 알레르기 유발물질의 함유여부를 과학적이고 합법적으로 입증할 수 있는 검사법이 아직 확립되어 있지 않고 있다. 따라서 알레르기 유발물질 표시기준을 합법적으로 관리, 감독할 수 있는 표준화된 검출법을 확립하기 위해 알레르기를 일으키는 원인식품으로서 가장 높은 빈도를 나타내고 있는 난류의 주요 알레르기 유발 물질로 알려진 8종 표준물질 (난전분, 난백, 난황, ovomucoid

⊙ 최근 우리나라에서는 식품의약품안전청 고시 제2003-27호 「식품등의표시기준중개정」을 발표하여 식품 원재료중 알레르기 유발물질 11종의 표시를 의무화하였으나, 알레르기 유발물질의 함유여부를 과학적이고 합법적으로 입증할 수 있는 검사법이 아직 확립되어 있지 않고 있다. 따라서 알레르기 유발물질 표시기준을 합법적으로 관리, 감독할 수 있는 표준화된 검출법을 확립하기 위해 알레르기를 일으키는 원인식품으로서 가장 높은 빈도를 나타내고 있는 난류의 주요 알레르기 유발 물질로 알려진 8종 표준물질 (난전분, 난백, 난황, ovomucoid, ovalbumin, ovotransferrin, lysozyme, ${\alpha}$-livetin 등) 및 난류함유 표시제품과 미표시제품중 11종을 우선적으로 대상식품으로 선정하여, 현재 일반적으로 이용되고 있는 알레르기 유발물질 검출방법인 정량법 (ELISA; enzyme-linked Immunosorbent assay), 정성법 (PCR; polymerase chain reaction) 및 기기분석법 (LC-ESI-MS [liquid chromatography-clectrospray ionization-mass spectrometry] 및 MALDI-TOF-MS [matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry])으로 실험하여 비교분석하여 표준화된 검출시험법을 개발하고자 한다.
⊙ 실험결과, ELISA법은 신속하고 간편하였으며, 난류 표준물질 및 난류함유 표시제품에서 모두 양성반응이 나타났으나, 난류함유 미표시제품에서 위양성반응을 나타내는 단점이 있었다. PCR법은 가열 및 가공공정을 거친 식품이나 소량의 시료에서도 적용할 수 있는 장점이 있었지만 난단백과 닭고기의 DNA가 동일하여 이들을 감별할 수 없었으며, 기기분석법인 MALDI-TOF-MS와 LC-ESI-MS법은 정성법으로 가능하나 난단백 특이성이 없어 난류 알러젠만을 선택적으로 검출하기 어려웠을 뿐만 아니라 고가의 특수장비를 이용하는 시험법으로서 국가공인 식품분석법으로 채택하기에는 문제가 있다고 사료된다. 따라서 닭고기와 동일유전자를 가진 난류 가공식품에 적합한 immunoblot법을 추가시험하여 확인할 수 있었다. 그러므로 가공식품중 난류의 알레르기유발물질검출법으로서 1차적으로 ELISA법을 시행하고, 난류함유 미표시제품에서 위양성을 보인 시료에서 2차적으로 immunoblot법을 시행하는 알레르기 유발물질 검출시험법을 확립하였다.
⊙ 본 연구결과로 확립한 검출법을 이용하여 시판중인 가공식품중 난류함유 표시제품과 미표시제품을 각각 50종을 선정하여 난류에 대한 알레르기 유발물질 함유 실태를 조사한 결과, ELISA법에 서 난류함유 표시제품은 모두 양성반응을 보였으나, 난류함유 미표시제품 50종중 4종(8%)에서 양성 반응을 보여 immunoblot법으로 2차 시험한 결과에서는 모두 음성반응을 보였다.
⊙ 위와 같이 본 연구결과로 확립된 난류의 알레르기유발물질 검출법 (1차 ELISA법, 2차 immunoblot법)은 시판 가공식품중 난류함유 표시제품과 미표시제품에 적용하여 실태조사를 시행한 결과에서 타당한 검출법임이 실험적으로 확인되었다.

Abstract ▼

Detection of allergens in food is the increasing issue for food labeling purposes, Chicken egg is a common cause of allergic reactions to food in both adults and children, and a food item to be declared on food labeling under the Korean Food Allergen Labeling Regulation, In this study, a comparative

Detection of allergens in food is the increasing issue for food labeling purposes, Chicken egg is a common cause of allergic reactions to food in both adults and children, and a food item to be declared on food labeling under the Korean Food Allergen Labeling Regulation, In this study, a comparative study with a sandwich-type ELISA using 3 commercial kits, DNA-based PCR using 19 oligonucleotides of egg specific DNA fragment, immunoblot using egg protein polyclonal antibodies and instrumental analysis such as LC-ESI-MS and MALDI-TOF-MS was performed to development of sensitive and specific method for detecting allergenic egg proteins with 8 standard materials, and 11 food samples.
In consequence, the egg allergenic protein-based ELISA was the most commonly method and highly specific for standard egg allergenic proteins (egg whole protein, egg white protein, egg yolk protein, ovomucoid, ovalbumin, ovotransferrin. lysozyme, and ${\alpha}$-livetin) and 6 egg ingredient-labeling foods (raw hen`s egg, hard boiled quail`s egg in soysauce, egg biscuit, mayonnaise, dried pollack soup, and ice cream), however, biscuit, chicken meat, and duck roast except milk and orange juice in egg ingredient-nonlabeling foods, may have shown the false-positive results on two kits. The immunoblot was a sensitive method for egg-based ingredients because of their very good protein-binding properties, but the specialized equipment, special handling and trained staff for broad application have to prepare. The egg specific DNA-based PCR was the high specific and the stable method and able to detect very low amounts of egg allergen in all standard materials and the egg ingredient-labeling foods, but it have not adapted for detecting egg allergens because of the presence of same DNA fragment in chicken meat. LC-ESI-MS and MALDI-TOF-MS were non-specific for detection of egg allergens, and it need expensive instruments and specialized techniques.
These results suggested that the protein-based ELISA for primary quantitative screening method and immunoblot for secondary qualitative validating method are suitable for detection of potentially allergenic egg residues in processed foods at the trace level. The research on the actual condition of egg allergen in 50 egg ingredient-labelled and 50 nonlabelled processed foods were primarily performed by the ELISA, and the 4 positive samples in egg ingredient-nonlabelled food on ELISA showed negative in the immunoblot.
The standardized method for in this study presented the primarily ELISA, and the positive sample in egg ingredient-nonlabelled food on ELISA have to determined by immunoblot.

목차 Contents

• 용역연구사업 연구결과보고서 ...1
• 제출문 ...2
• 목차 ...3
• I. 연구개발결과 요약문 ...5
• 연구결과보고서요약문 ...5
• Summary ...7
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...9
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...9
• 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...9
• 1.1.1 연구배경 ...9
• 1.1.2 연구목적 ...10
• 1.1.3 연구범위 ...12
• 1.2 총잘연구개발과제의 목표달성도 ...13
• 1.2.1 연구목표의 달성도 ...13
• 1.2.2 관련 분야 연구에의 기여도 ...14
• 1.3 국내.외 기술개발 현황 ...14
• 1.3.1 관련분야에 대한 기술개발 현황 ...14
• 1.3.2 연구결과가 국내.외 기술개발 현황에서 차지하는 위치 ...15
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...16
• 2.1 이론적 배경 ...16
• 2.1.1 면역반응을 이용하는 방법 ...16
• 2.1.2 유전자를 이용한 정성법 ...16
• 2.1.3 기기분석법 ...16
• 2.2 연구 방법 및 내용 ...17
• 2.2.1 난류 알레르기 단백질의 분석 ...17
• 2.2.2 검사대상 가공식품의 선정 ...18
• 2.2.3 시료채취 및 시료조제법 ...19
• 2.2.4 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)법 ...19
• 2.2.5 Immunoblot (Western Blotting) 법 ...23
• 2.2.6 PCR (polymerase chain reaction) 법 ...24
• 2.2.7 LC-ESI-MS (liquid chromatography elec trospray ionization mass spectrometry) 법 ...30
• 2.2.8 MALDI-TOF-MS (matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry) 법 ...31
• 2.2.9 가공식품중 난류의 알레르기 유발물질 함유 실태조사 ...33
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...36
• 3.1 정량분석 (ELISA법) ...36
• 3.1.1 표준단백질의 정량분석 ...36
• 3.1.2 가공식품중 알레르기유발 단백질의 정량분석 ...38
• 3.2 정성분석 (PCR법) ...41
• 3.2.1 PCR Kit에 의한 정성분석 ...41
• 3.2.2 통상적 PCR법에 의한 정성분석 ...41
• 3.3 Immunoblot (western blot)법 ...47
• 3.3.1 SDS-PAGE에서 난류의 알레르기 유발 표준물질의 확인 ...47
• 3.2.2 가공식품중 난류의 알레르기 유발물질의 확인 ...48
• 3.4 기기분석 ...53
• 3.4.1 LC-ESI-MS ...53
• 3.4.2 MALDI-TOF-MS ...67
• 3.5 가공식품중 난류의 알레르기 유발물질 함유여부 실태조사 ...90
• 3.5.1 1차 정량법 (ELISA) ...90
• 3.5.2 2차 정성법 (Immunoblot: western blotting) ...93
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...94
• 4.1 연구결과 해석 ...94
• 4.2 다른 결과와의 비교분석 ...95
• 4.3 결론 ...96
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...97
• 제6장 참고문헌 ...99
• 제7장 첨부서류 ...102