초록 ▼

1. 한국산 겨우살이 lectin (VCA）의 유전자의 cloning 및 유전자 서열 확인: 겨우살이의 genomic DNA의 분리하여 1866 bp의 DNA 단편을 획득하고，VCA 유전자를 클로닝하여 1873bp의 유전자 미노산 서열을 확인하였으며, 유럽산과 83％ 의 상동성이 있음을 확인하였다．
2. 각 물질의 항암활성의 확인 및 apoptosis 유도여부 검색（in vitro) : MTT assay에 의하여 암세포에 대 한 VCA의 항암활성을 확인한 결과，모두 매우 강력한 항암물질임을 확인하였다．또한，암세포에 대한 VC

1. 한국산 겨우살이 lectin (VCA）의 유전자의 cloning 및 유전자 서열 확인: 겨우살이의 genomic DNA의 분리하여 1866 bp의 DNA 단편을 획득하고，VCA 유전자를 클로닝하여 1873bp의 유전자 미노산 서열을 확인하였으며, 유럽산과 83％ 의 상동성이 있음을 확인하였다．
2. 각 물질의 항암활성의 확인 및 apoptosis 유도여부 검색（in vitro) : MTT assay에 의하여 암세포에 대 한 VCA의 항암활성을 확인한 결과，모두 매우 강력한 항암물질임을 확인하였다．또한，암세포에 대한 VCA의 apoptosis 유도여부를 현미경 관찰， FACS, DNA 분절을 확인하였다．
3. Apoptosis 유도기전 규명 (in vitro) : 암세포에 대한 VCA의 apoptosis 관련 단백질을 검색한 결과 caspase-3, PARP, Bax의 발현은 증가하고， Bcl- 2, p53, p21의 발현은 감소하였다．
4. 전사조절인자의 활성변화를 통한 항암 효과： VCA는 NF-KB와 연관된 signal pathway에 작용함으로쩌 암세포에 apoptosis를 일으켜서 항암효과를 나타냈다．
5. 면역학적 항암작용기전（in vitro) : RT- PCR, ELISA을 수행하여 IL-12, IFN-Y 발현정도를 확인한 결과，증가함을 확인하였다．
6. Telomerase 억제효과： 텔로메라게 억제효과에 의한 항암효과의 가능성을 확인하기 위하여 TRAPEzE telomerase detection kit를 사용하여 DNA를 검색 하였다．시험한 모든 세포주에서 시료처리시간이 길어질수록 텔로메라게 억제효과가 현저히 나타났다．
7. 항암작용（in vivo) : Tumor volume이 VCA, VCE, VCES 투여시 대조군에 비하여 감소하였으며，VCE의 경우 투여량이 증가할수록 암세포 부피가 감소하였다．
8. Apoptosis 유도기전 규명（in vivo) : 전암지표 （foci, PCNA）의 측정에 의한 VCA의 간암 억제정도를 확인한 결과 뚜렷한 억제효과가 나타났으며，apoptosis 관련 단백질 （Bcl-2, IAPZ, caspase-3, caspase-9, FAS- L）의 발현이 증가하였다．

Abstract ▼

The extract of European mistletoe (Viscum aibum, L.) has been used in adjuvant chemotherapy of cancer and mistietoe lectins are considered to be major active components. The present work was performed to investigate the effects of Korean mistletoe lectin (Viscum aibum L. coloratum agglutinin, VCA) o

The extract of European mistletoe (Viscum aibum, L.) has been used in adjuvant chemotherapy of cancer and mistietoe lectins are considered to be major active components. The present work was performed to investigate the effects of Korean mistletoe lectin (Viscum aibum L. coloratum agglutinin, VCA) on proliferation and apoptosis of cancer cells as well as the underlying mechanisms for these effects. The genes of VCA were cloned by PCR strategy and the nucleotides coding the prepro-protein were sequenced. In cancer cells, addition of VCA resulted growth suppression, morphological changes of apoptotic nuclei, and DNA fragmentation characteristics of apoptosis. To investigate how caspase-3 activation during VCA-induced apoptosis induces cleavages of PARP, the expression of PARP and the pattern of caspase-3 activation were investigated. We also showed that VCA induced apoptosis in both cancer cells through p53- and p21- independent pathways. VCA induced apoptosis by down-regulation of Bcl-2 and by up-regulation of Bax functioning upstrearm of caspase-3 in both cell lines. In addition, we observed down-regulation of telomerase activity in both VCA-treated cells. The results provide direct evidence of the anti-tumor potential of this biological response which comes from inhibition of telomerase and consequent inducing apoptosis. These findings are important for the therapy with preparation of mistletoe because they show that telomerase-dependent mechanism can be targeted by VCA. In vivo was also done to investigate the treatment effect of VCA in cancer cell transplanted mice. The formation of GST-P+ foci was significantly decreased by mistletoe extract or lectin treatment. Although there was no effect on apoptosis and DNA fragmentation in hepatic tissue by VCA treatment, caspase-9 and fas-L were increased. Tumor volume was significantly decreased in all treated groups compare to control group, especially, in VCA-treated groups, tumor volume was significantly decreased according to increase of doses. These results suggest that VCA has a potential to inhibit hepatocarcinogenesis by increasing apoptosis and a cancer treatment effect. Taken together, our results suggest that the VCA, considered as a telomerase-inhibitor, can be envisaged as a Calldidate for enhancing sensitivity of conventional anticancer dmgs.

목차 Contents

• 제1장 연구개발과제의 개요...11
• 제1절 연구배경...11
• 제2절 연구개발의 목적 빛 범위...14
• 제3절 연구의 필요성...15
• 제2장 국내외 기술개발 현황...17
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과...22
• 제1절 Asialofetuin-Sepharose 4B를 이용한 한국산 겨우살이 (Viscum album L.var.coloratum)렉틴(VCA)의 추출 및 정제...22
• 제2절 한국산 겨우살이 물추출물(VCE)및 렉틴으로 강화된 한국산 물추출물(VCES)의 제조...22
• 제3절 한국산 겨우살이 lectin(VCA)의 유전자의 cloning및 유전자 서열확인...23
• 제4절 항암활성의 확인(in vitro)...27
• 제5절 Apoptosis 유도효과 확인 (in vitro)...29
• 제6절 Apoptosis 유도기전 확인 (in vitro)...33
• 제7절 VCA의 암세포에 대한 telomerase 억제효과 확인...35
• 제8절 전사조절인자의 활성변화를 통한 VCA의 항암효과...36
• 제9절 면역학적 항암작용기전(in vitro)...39
• 제10절 항암작용 확인 (in vivo)...41
• 제11절 Apoptosis 유도기전 규명 (in vivo)...45
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...55
• 제5장 연구개발결과의 활용계획...57
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...59
• 제7장 참고문헌...60