초록 ▼

cisplatin 내성 관련 유전자 확보를 위해 방광암세포주인 T24와 내성변이주인 T24R2를 이용하여 DD RT-PCR을 수행하였다. 다양한 후보 유전자 중 7종의 ORF를 클로닝하고 10개 이상의 cell surface marker에 대한 발현 양상의 비교와 함께 cisplatin 감수성과 bfl-1, integrin a6 발현 양상의 관련성을 규명하였다. bfl-1, integrin a6 발현 조절인자 특성을 연구하기 위하여 bfl-1의 발현 조절에 관여하는 요인을 알아보는 실험을 수행하였으며 cisplatin에 의한 세포

cisplatin 내성 관련 유전자 확보를 위해 방광암세포주인 T24와 내성변이주인 T24R2를 이용하여 DD RT-PCR을 수행하였다. 다양한 후보 유전자 중 7종의 ORF를 클로닝하고 10개 이상의 cell surface marker에 대한 발현 양상의 비교와 함께 cisplatin 감수성과 bfl-1, integrin a6 발현 양상의 관련성을 규명하였다. bfl-1, integrin a6 발현 조절인자 특성을 연구하기 위하여 bfl-1의 발현 조절에 관여하는 요인을 알아보는 실험을 수행하였으며 cisplatin에 의한 세포 사멸과 mitochondrial potential 조사 결과 내성 세포주에서 사멸 감소 및 potential이 모세포주에 비해 유지가 되고 있음을 확인하게 되었다. bfl-1 stable transfectant cell 및 bfl-1 antisense oligonucleotide를 제조하여 확보하였고 integrin a6A, a6B의 발현 변화에 따른 cisplatin 감수성과의 관련성을 규명하기 위하여 bfl-1을 bate로 yeast two-hybrid 수행 결과 102종의 유전자 절편을 확보하였다. CDDP 내성에 관련된 세포사멸 조절인자와 결합하는 2종 이상의 단백질 특성을 규명하기 위한 연구로 bfl-1 결합단백질을 확인하고 선정하였으며 재조합 단백질을 이용한 GST pull-down assay로 in vitro에서 단백질 결합을 확인하였고 bfl-1 및 반응 단백질 각각에 대한 deletion mutant를 제조하고 제조된 deletion mutant 및 아미노산 치환을 통한 주요 결함부위를 확인하였다. deletion mutant와의 결함에 따른 enzyme activity에 변화가 발생됨을 관찰하였고 bfl-1에 대한 항체를 제조하여 보유하고 있다.

Abstract ▼

The potent anticancet agent cisplatin is used for treating a bladder cancer. However, clinical use of this drug for long periods is often limited because of the appearance of cisplatin-resistant bladder tumor cells. We employed the method of differential displaty reverse transcriptase polymerase cha

The potent anticancet agent cisplatin is used for treating a bladder cancer. However, clinical use of this drug for long periods is often limited because of the appearance of cisplatin-resistant bladder tumor cells. We employed the method of differential displaty reverse transcriptase polymerase chain reaction(DD RT-PCR) to identify the differentially expressed genes in a parental human bladder cancer cell line T24 and three cisplatin-resistant cell lines, T24R5, T24R1, and T24R2. Twenty-three clones were confirmed by reverse northern analysis to be expressed differentially between resistant and corresponding sensitive cells. Cisplatin-resistant cell lines overexpressed Bcl-2 family protein Bfl-1/A1 as compared with their parental cells. Cisplatin and \gamma$-irradiation induced expression of Bfl-1/A1 in T24R2 cells but not in T24 cells. The most significant alteration of Bcl-2 family molecules in the resistant cells was the overexpression of Bfl-1/A1. On the other hand, the nuclear translocation of NF-$\kappaB$ by cisplatin and \gamma$-irradiation selectively occurred in T24R2 cells. Mitocondrial depolarization and cell death by cisplatin were also prevented in T24R2 cells. Moreover, Bfl-1/A1 inhibited cisplatin- and TNF-$\alpha$-induced apoptosis in BOSC23 cells. These results suggest that the induction of Bfl-1/A1 by NF-$\kappaB$ may be important in controlling resistance to cisplatin responses in bladder tumor cells.

목차 Contents

• 제 1 장 연구개발과제의 개요...11
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...13
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...14
• 제 1 절 실험재료 및 방법...14
• 1. bfl-1, integrin $\alpha6$ 발현현상과 cisplatin 감수성과의 상호관계 규명...14
• 2. Yeast two-hybrid를 통해 bfl-1과 반응하는 단백질의 유전자 탐색...18
• 3. bfl-1에 대한 항체 제조...23
• 제 2 절 실험결과 및 고찰...24
• 1. bfl-1, integrin $\alpha6$ 발현현상과 cisplatin 감수성과의 상호관계 규명...24
• 2. Yeast two-hybrid를 통해 bfl-1과 반응하는 단백질의 유전자 탐색...45
• 3. bfl-1에 대한 항체 제조...54
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...57
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...58
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...60
• 제 7 장 참고문헌...64