초록 ▼

본 연구의 목표는 크게 세 가지로 나눌 수 있다. 첫째, 발생공학적 기법, 즉 체외수정 또는 핵이식 방법을 이용하여 배아줄기세포 분리에 필요한 양질의 배반포를 생산하고자 한다. 둘째로는, 체외 생산된 수정란을 이용하여 내부세포괴를 분리하고 이를 적절한 환경에서 배양 하여 배아줄기세포주를 확보하고자 한다. 이를 위하여 적절한 지지세포의 선정과 여러 성장인자의 효과를 확인해 보고자 한다. 마지막으로, 앞서 수립된 방법을 통하여 돼지 배아줄기세포의 효과적이고 지속적인 생산을 시도하고자 하였다.
1차년도 연구를 통하여 돼지 체외 수정

본 연구의 목표는 크게 세 가지로 나눌 수 있다. 첫째, 발생공학적 기법, 즉 체외수정 또는 핵이식 방법을 이용하여 배아줄기세포 분리에 필요한 양질의 배반포를 생산하고자 한다. 둘째로는, 체외 생산된 수정란을 이용하여 내부세포괴를 분리하고 이를 적절한 환경에서 배양 하여 배아줄기세포주를 확보하고자 한다. 이를 위하여 적절한 지지세포의 선정과 여러 성장인자의 효과를 확인해 보고자 한다. 마지막으로, 앞서 수립된 방법을 통하여 돼지 배아줄기세포의 효과적이고 지속적인 생산을 시도하고자 하였다.
1차년도 연구를 통하여 돼지 체외 수정란 생산에 대한 기반을 확립하였고 내부세포괴의 분리를 위한 항형철을 생산하였다. 1차년도에서 실시한 내부세포괴의 초기배양을 기반으로 2차년도에서는 우선 지속적으로 체외수정란을 생산하여 분리된 내부세포괴의 최적배양 조건을 위하여 성장인자와 지지세포드에 대한 최적화를 실시하였다. 이와 동시에 태아 윈시생식세포유래 줄기세포주를 확립하여 관련 연구팀에 분양하는 등 활발한 생산을 실시하였다. 3차년도에서는 돼지 체외수정란의 지속적 생산과 배아줄기세포주의 확립을 위한 최적 배양조건을 확립을 통하여 세포주 확립을 시도하였으나 성공하지 못하였고 이를 대체하여 태아 생식선 유래 배아줄기세포주를 대량으로 확보하였고 나아가서 태아 중신에서 유사 배아줄기세포주를 분리 확립하는 결과를 얻었다.
본 연구의 연구결과는 체외수정란 유래 배아줄기세포주 분리 및 확립에 대한 기초자료로 이용될 수 있을 것이고 태아 유래 배아줄기세포 및 태아 중신 유래 유사 배아줄기세포주를 이용한 분화유도, 기능성 검증, 유전체 분석, 및 복제돼지 생산등과 같은 추가 연구 및 공동연구의 가능성을 열었다고 할 수 있다.

Abstract ▼

Goals: This study is i) to produce porcine blastocysts with good quality by reproductive technologies. such as in vitro fertilization and/or nuclear transplantation, ii) to investigate the effective isolation, characterization and initial culture of porcine embryonic stem cells using in vitro produc

Goals: This study is i) to produce porcine blastocysts with good quality by reproductive technologies. such as in vitro fertilization and/or nuclear transplantation, ii) to investigate the effective isolation, characterization and initial culture of porcine embryonic stem cells using in vitro produced porcine blastocysts, iii) to produce a number of porcine embryonic stem cells using optimized protocols including in vitro production of porcine embryos and establishment of porcine embryonic stem cells.
Contents : In the first year, we will i) establish the protocols for the in vitro production of porcine blastocysts by in vitro fertilization and nuclear transplantation, and ii) investigate effective methods for the isolation of inner cell mass from porcine blastocysts using immunosurgery or other methods. In the second year, we will i) optimize the protocols for the in vitro production of porcine blastocysts, and ii) examine the effects of feeder layer, growth factors and passage methods on the effective isolation and initial establishment of porcine embryonic stem cells, iii) produce embyonic stem cells derived from in vivo fertilized embryos and/or primordial germ cells. In the third year, we will i) produce continuously the porcine blastocysts, and ii) using optimized protocols, produce a number of porcine embryonic stem cells and maintain them.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...2
• 보고서 초록 ...3
• 요약문 ...4
• SUMMARY ...9
• CONTENTS ...11
• 목차 ...13
• 제1장 연구개발과제의 개요 ...15
• 1. 연구의 목적 ...15
• 2. 연구의 필요성 ...15
• 제2장 국내외 기술 개발 현황 ...17
• 1. 지금까지의 연구 개발 동향 및 실적 ...17
• 2. 현 기술상태의 취약성 ...19
• 제3장 연구개발수팽 내용 및 결과 ...20
• A. 1차년도 연구내용 및 결과 ...20
• 1) 돼지 수정란 생산을 위한 체외수정 및 체세포 핵이식 기법기반 확립 ...20
• 2) 면역 절제술을 위한 항돼지 혈청의 제조 ...23
• 3) 체내 수정된 수정란을 이용한 돼지 내부세포괴의 분리방법 개발 ...25
• 4) 체외 생산된 수정란을 이용한 돼지 내부세포괴의 분리방법 개발 ...27
• B. 2차년도 연구내용 및 결과 ...30
• 1) 수정란 체외 생산과정의 최적화를 통한 체외 생존성 및 발생능력의 향상 ...31
• 2) 분리된 내부세포괴를 이용한 배아줄기세포주 확립을 위해 초기배양에 관여하는 조건 (지지세포, 성장인자, 계대배양 등)의 최적화 ...36
• 3) 지속적 돼지 배아줄기세포주의 공급을 이용한 체내 수정란 및 태아 유래 배아줄기세포의 생산 ...37
• 4) 타 협동과제와의 통합에 의한 돼지 배아줄기세포주 생산 증대 ...41
• C. 3차년도 연구내용 및 결과 ...41
• 1) 돼지 수정란의 지속적인 체외 생산 ...41
• 2) 돼지 배아줄기세포주의 확립을 위한 배양 조건의 최적화 ...43
• 3) 돼지 배아줄기세포의 효과적인 동결보존 방법의 개발 ...44
• 4) 다수의 돼지 배아줄기세포주 확보 및 보유 ...44
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...46
• 제5장 연구개발결과의 활용 계획 ...49
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외 과학 기술 정보 ...50
• 제7장 참고문헌 ...53