초록 ▼

1. 인간 뇌세포 단백질체의 bacteriophage T7 capsid protein과의 fusion library 구축 및 발현
2. Annealing time 조절을 통한 brain cDNA의 normalization 및 단백질체 발현 시스템 구축
3. Fusion tag을 이용한 정제 방법의 체계화
4. 신약개발의 중요한 대상이될 CNS에 관련된 RGS로 RGS2, RGS4, RGS5, RGS7, RGS9-1 RGS9-2, RGS10, 및 Gα-subunit으로 Gαq, Gαi1을 다양한 표지를 붙여 클로닝<

1. 인간 뇌세포 단백질체의 bacteriophage T7 capsid protein과의 fusion library 구축 및 발현
2. Annealing time 조절을 통한 brain cDNA의 normalization 및 단백질체 발현 시스템 구축
3. Fusion tag을 이용한 정제 방법의 체계화
4. 신약개발의 중요한 대상이될 CNS에 관련된 RGS로 RGS2, RGS4, RGS5, RGS7, RGS9-1 RGS9-2, RGS10, 및 Gα-subunit으로 Gαq, Gαi1을 다양한 표지를 붙여 클로닝
5. 단백질 대량생산기술 자동화에 대한 흐름도를 완성
6. 자동세포배양기 및 자동 세포분쇄기 제작
7. 주관연구기관이 선정한 관심단백질의 대량 발현 및 기능연구를 위한 유전자의 확보 및 parallel clonin

Abstract ▼

I present the followings as the results achieved during conduct of the research project "Development of high-throughput protein production technology."
1. Normalized cDNA library - constructed by controlling hybridization time for the annealing of denatured ssDNA
2. Proteome phage-display - no

I present the followings as the results achieved during conduct of the research project "Development of high-throughput protein production technology."
1. Normalized cDNA library - constructed by controlling hybridization time for the annealing of denatured ssDNA
2. Proteome phage-display - normalized brain cDNA was fused to bacteriophage T7 capsid protein, the fused construct was in vitro phage-packaged, and used for transfection of host (E. coli BLT5615) to display human brain proteome.
3. Full-length cDNA and parallel cloning - according to the request by Functional Proteomics Center, full-length cDNA for the followings were cloned; 1) human RGS family, 2) yeast proteins up- or down-regulated during the accumulation of misfolded protein in ER and whose function is unknown yet, 3) mouse proteins up- or down-regulated in response to absence seizure or in T-type calcium channel 1G KO mouse and showing >1.3-fold difference analyzed by DIGE (H0: no change by treatment, t-test P<0.05)
4. Development of technology for high-throughput protein production - parallel processing was adopted during cloning, cell culture, and cell harvest and disruption. Automated instruments for parallel cell culture and parallel cell disruption were manufactured and installed as core facilities in Functional Proteomics Center.
- Automatic cell culture system
Designed for growing 24 cultures simultaneously (4 x 6)
Air-blow aeration & agitation / no shaking
- Automatic cell harvest and disruption system
Designed for harvesting cells grown by automatic cell culture system. Position-controllable centrifuge & sonicator

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...3
• 보고서 초록 ...4
• 요약문 ...5
• SUMMARY...8
• 목차 ...9
• 제1장 연구개발과제의 개요 ...10
• 제1절 연구개발의 필요성 ...10
• 제2절 연구개발의 목표 ...12
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ...14
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...15
• 제1절 전체 proteome을 대표하기 위한 cDNA의 normalization1 ...15
• 제2절 후보 단백질의 전체길이 유전자의 확보 및 parallel cloning ...16
• 제3절 세포 자동 배양장치 개발 ...16
• 제4절 자동 세포 분쇄장치의 개발 ...19
• 제5절 유용단백질 생산 ...21
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...23
• 제1절 종합 목표 및 달성도 ...23
• 제2절 1년차 목표 및 연구결과 ...23
• 제3절 최종년차 목표 및 연구결과 ...24
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ...26
• 제1절 연구개발성과의 실용화 ...26
• 제2절 연구개발을 통해 파생된 성과 ...26
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ...28
• 제7장 참고문헌 ...29