초록 ▼

본 연구의 목적은 한약재의 동속식물 및 혼용품 등의 20점 이상을 확보하여 분석의 객관성을 확립하고, 대상약재의 DNA분석에 의한 한약재 기원확인과 DNA fingerprinting 및 염기서열분석으로 생리활성 및 분리분석에 사용되는 후보약재의 동정 (identification)을 실시하였고, DNA 감별법을 제시하고자 하였다.
인동은 인동덩굴 (Lonicera japonica)의 잎 및 덩굴성 줄기로서 금은화와 약용부위만 다르게 사용하고 기원은 동일하다. 기원식물 및 동정시료 33개를 ITS, trnL-F intergenic

본 연구의 목적은 한약재의 동속식물 및 혼용품 등의 20점 이상을 확보하여 분석의 객관성을 확립하고, 대상약재의 DNA분석에 의한 한약재 기원확인과 DNA fingerprinting 및 염기서열분석으로 생리활성 및 분리분석에 사용되는 후보약재의 동정 (identification)을 실시하였고, DNA 감별법을 제시하고자 하였다.
인동은 인동덩굴 (Lonicera japonica)의 잎 및 덩굴성 줄기로서 금은화와 약용부위만 다르게 사용하고 기원은 동일하다. 기원식물 및 동정시료 33개를 ITS, trnL-F intergenic spacer 염기서열로 분석한 결과 모두 인동임을 확인하였고, 결정된 염기서열을 근거로 인동을 산은화로부터 효율적으로 감별할 수 있음을 확인하였다.
황백은 황벽나무 Phellodendron amurense Ruprecht 또는 황피수 Phellodendron chinense Schneider (운향과 Rutaceae)의 줄기 껍질로서 주피를 기원으로 한다. 기원식물 및 동정시료 39개를 rbcL intergenic spacer 염기서열로 분석한 결과, 관황백과 천황백의 염기서열이 모두 99% 일치하였고 관황백과 천황백의 감별은 어려웠다. 또한 다른 특정한 부위 ITS와 trnL-F intergenic spacer 에서도 같은 결과를 나타냈다. 그러나 Random한 46개의 프라이머를 이용한 다형성 분석 RAPD 방법을 이용한 결과 12개 프라이머에서 관황백과 천황백의 다형성을 확인할 수 있었다.
금은화는 인동덩굴 Lonicera japonica Thunberg (인동과 Caprifoliaceae)의 꽃봉오리 또는 막 피기 시작한 꽃을 기원으로 한다. 기원식물 및 동정시료 32개를 ITS, trnL-F intergenic spacer 염기서열로 분석한 결과 모두 금은화임을 확인하였고, 결정된 염기서열로 근거로 금은화를 산은화로부터 효율적으로 감별할 수 있음을 확인하였다.
연교는 의성개나리 Forsythia viridissima Lindley 또는 연교 (連翹) Forsythia suspensa Vahl (물푸레나무과 Oleaceae)의 열매를 기원으로 한다. 확보된 기원식물 및 동정시료 47개 시료를 ITS intergenic spacer 염기서열로 분석한 결과 한국연교 (F. viridissima)와 중국연교 (F. suspensa) 가 효율적으로 구분됨을 확인하였다. 결정된 염기서열을 근거로 연교를 효율적으로 감별할 수 있음을 확인하였다.
황련은 Coptis japonica Makino 또는, 기타 동속식물의 뿌리를 기원 약재로 하는데, 확보된 51개시료를 rbcL과 trn L-F intergenic spacer 염기서열로 분석한 결과 총 시료 중 39개의 시료가 천황련 (C. chinensis)이며 단 하나의 시료만이 C. japonica임을 확인하였고 현재 유통되는 황련의 대부분이 천황련 임을 확인하였다. 결정된 염기서열로 근거로 JA F1/ JA R4 primer 쌍을 사용하여 C. japonica를 Chi F2/ Chi R2 primer 쌍을 사용하여, C. chinensis를 J. dubia와 P. kurroa로 부터 감별 할 수 있음을 확인하였다.
독활은 Aralia continentalis Kitagawa (두릅나무과 Araliaceae)의 뿌리를 기원으로 한다. 약재는 Aralia continentalis와 A cordata는 서로 구분 없이 동일 약재로 사용되고 있다. 수집된 시료를 ITS 염기서열을 이용하여 종 감별을 수행한 결과 ITS 염기서열로 A. continentalis와 A cordata를 효율적으로 구분할 수 있음을 확인하였다. 또한 개발된 Cont F/ Cont R primer 쌍을 이용하여, A. continentalis를 다른 시료로부터 감별 할 수 있음을, Aralia F/ Aralia R primer 쌍을 이용하여 A. continentalis와 A cordata를 다른 시료로부터 효율적으로 감별 할 수 있음을 확인하였다.

Abstract ▼

The study aimed to secure more than 20 plant samples in same genus and mixed products for each herbal medicine to set the objectivity of analysis and to establish the scientific gene screening methods by adopting DNA fingerprinting and base sequence analysis of the subjected oriental herbal medicine

The study aimed to secure more than 20 plant samples in same genus and mixed products for each herbal medicine to set the objectivity of analysis and to establish the scientific gene screening methods by adopting DNA fingerprinting and base sequence analysis of the subjected oriental herbal medicines to confirm their origin by using DNA analysis.
Lonicerae Folium is the leaves and tendril stems of Lonicera japonica. The origin of it is identical to L. japonica, but the medicinally used portion is different. The tmL-F intergenic spacer sequences of 33 original plants and identified samples were analyzed. The result of the analysis enabled us to identify them as L. Folium, and the determined base sequence enabled us to differentiate it from L. confuse efficiently.
Phellodendri Cortex is the bark of the stems of Phellodendron amurense Ruprecht or Phellodendron chinense Schneider (Rutaceae), which is originated from periderm. The rbcL intergenic spacer sequences of 39 originated plants and identified samples were analyzed. The result showed that the 99% of the base sequences of P. amurense were identical to that of P. chinense, but the differentiation of P. amurense and P. chinense was difficult. In addition, the tmL-F intergenic spacer sequences of specific parts produced the same result. However, when the analysis was carried out by using the Random Amplification Polymorphism DNA analysis method of using 46 random primers allowed us to confirm the polymorphism of P. amurense and P. chinense in 12 primers.
Lonicerae Flos is originated from the flower buds or the just bloomed flowers of Lonicera japonica Thunberg (Caprifoliaceae). The tmL-F intergenic spacer sequences of 32 original plants and identified samples were analyzed. The result of the analysis enabled us to identify them as L. Flos, and the determined base sequence allowed us to differentiate it from L. confuse efficiently.
Forsythiae fructus is originated from the fruits of Forsythia viridissima Lindley or Forsythia suspensa Vahl (Oleaceae). The ITS intergenic spacer sequences of 47 original plants and identified samples were analyzed. The analysis result revealed efficient screening of F. viridissima from F. suspense. Based upon the determined base sequences, it confirmed the possibility of efficient screening of Forsythiae fructus.
Coptis Rhizoma is originated from the roots of Coptis japonica Makino or the roots of other plants in same genus. The rbcL and tmL-F intergenic spacer sequences analyses of 51 secured samples were performed. The result confirmed that 39 samples were C. chinensis and only one sample was found to be the C. japonica. The test result revealed that most of currently commercialized Coptis Rhizoma is C. chinensis. Based upon the determined base sequences, the efficient screening of C. japonica, C. chinensis, J. dubia, P. kurroa was possible.
Araliae Continentalis Radix is originated from the roots of Aralia continentalis Kitagawa (Araliaceae). The herbal medicines of Aralia continentalis and A cordata are used as the same medicine without differentiation. The ITS intergenic spacer sequences of collected samples were analyzed and the efficient screening of Aralia continentalis and A. cordata was possible. In addition, the screening of Aralia continentalis was possible by using a developed Cont primer, and the analysis confirmed the efficient screening of Aralia continentalis and A cordata by using the Aralia primer.

목차 Contents

• 최종보고서...1
• 제 출 문...2
• 목 차...3
• Ⅰ. 연구개발결과 요약문...5
• (한글) DNA 분석에 의한 한약재 종 감별 연구 (금은화 ,인동, 황백, 연교, 황련, 독활)...5
• (영문) The study on the discrimination of herbal medicine using DNA analysis...7
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...9
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...9
• 1.1 총괄연구개발과제의 목표...9
• 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도...11
• 1.3 국내.외 기술개발 현황...11
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...13
• 1.1 연구개발 내용...13
• 1.2 연구개발 방법...14
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과...16
• Ⅰ. 인동 (Lonicerae Folium)...16
• Ⅱ. 황백 (Phellodendri cortex)...22
• Ⅲ. 금은화 ( Lonicerae Flos)...29
• Ⅳ. 연교 (Forsythiae Fructus)...35
• Ⅴ. 황련 (Coptidis Rhizoma)...40
• Ⅵ. 독활 (Araliae Continentalis Radix)...50
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...57
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과...96
• 5.1 활용성과...96
• 5.2 활용계획...98
• 제6장 기타 주요변경사항...98
• 제7장 참고문헌...99
• 제8장 첨부서류...99
• Ⅲ. 제1 세부연구개발과제 연구결과...100
• 제1장 제1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...101
• 1.1 세부연구개발과제의 목표...101
• 1.2 세부연구개발과제의 목표달성도...102
• 1.3 국내.외 기술개발 현황...102
• 제2장 제1 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...104
• 1.1 연구개발 내용...104
• 1.2 연구개발 방법...107
• 제3장 제1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...110
• Ⅰ. 인동 ( Lonicerae Folium)...110
• Ⅱ. 황백 (Phellodendri cortex)...118
• Ⅲ. 금은화 ( Lonicerae Flos)...127
• Ⅳ. 연교 (Forsythiae Fructus)...135
• 제4장 제1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...142
• 제5장 제1 세부연구개발과제의 연구성과...146
• 5.1 활용성과...146
• 5.2 활용계획...148
• 제6장 기타 중요변경사항...148
• 제7장 참고문헌...149
• 제8장 첨부서류...149
• Ⅳ. 제2 세부연구개발과제 연구결과...150
• 제1장 제2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...151
• 1.1 세부연구개발과제의 목표...151
• 1.2 세부연구개발과제의 목표달성도...152
• 1.3 국내.외 기술개발 현황...152
• 제2장 제2 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...154
• 1. 시료 확보...154
• 2. Genomic DNA의 분리...157
• 3. 특정 유전자 부위 증폭 및 염기서열 결정...157
• 4. PCR 증폭 산물의 염기서열 결정...158
• 제3장 제2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...159
• 제4장 제2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...176
• 제5장 제2 세부연구개발과제의 연구성과...178
• 5.1 활용성과...178
• 5.2 활용계획...179
• 제6장 기타 주요변경사항...180
• 제7장 참고문헌...181
• 제8장 첨부서류...181