초록 ▼

한약재의 판별은 지금까지 주로 외부 형태와 이화학적인 분석에 의존하여 왔으나, 한약재는 그 특성상 일부 특정 부위만 이용되고 약재의 유효성분인 2차 대사사눌도 생육환경에 민감하기 때문에 외부형태나 이화학적 분석만으로는 약재 판별에 부족한 점이 많다. 따라서 모든 부위에 있어서 동일하고 생육환경에 영향을 받지 않는 유전물질인 제놈 DNA를 RAPD, RFLP 및 Amp-FLP법 등의 유전적 분석 방법을 응용하여 한약재의 판별을 객관화하고자 하였다. 이를 위한 연구로서, 임상에서 상용되는 한약재중에서 분류가 명확치 않거나 혼용될 수 있

한약재의 판별은 지금까지 주로 외부 형태와 이화학적인 분석에 의존하여 왔으나, 한약재는 그 특성상 일부 특정 부위만 이용되고 약재의 유효성분인 2차 대사사눌도 생육환경에 민감하기 때문에 외부형태나 이화학적 분석만으로는 약재 판별에 부족한 점이 많다. 따라서 모든 부위에 있어서 동일하고 생육환경에 영향을 받지 않는 유전물질인 제놈 DNA를 RAPD, RFLP 및 Amp-FLP법 등의 유전적 분석 방법을 응용하여 한약재의 판별을 객관화하고자 하였다. 이를 위한 연구로서, 임상에서 상용되는 한약재중에서 분류가 명확치 않거나 혼용될 수 있는 약재 및 고가의 약재인 인삼과 산삼, 출, 웅담등의 약재를 선별하여, 판별하기 위한 유전자 분석법을 개발하였다. RAPD법에 의한 인삼류의 약재판별연구에서는, 고려인삼과 북미삼 및 외국삼(죽절삼, 삼칠삼), 그리고 국산 고려인삼과 중국산 및 일본산 고려인삼간의 분별이 가능한 random primer를 선별할 수 있었다. 따라서 근래에 수입되어 유통되고 있는 중국산 고려인삼과 국산 고려인삼간의 판별에 RAPD법을 이용할 수 있을 것으로 사료되며, 또한 이 방법을 이용하여 국산 장뇌나 산삼과 형태학적으로 유사한 북미산 야생삼과 고려인삼과의 판별이 가능하였다. 한편 ribosomal DNA의 ITS 부위에 대한 RFLP 분석에서는, 제한요소 Hinf I으로 처리하였을 때 고려인삼과 외국삼(북미삼, 중국삼, 일본삼)에서 절편 다형성이 검출되어, 향후 RFLP와 ITS 부위의 염기서열 결정실험을 병행하면 인삼류 및 식물성 약재의 보다 정확한 유전적 판별이 가능할 것으로 사료되었다. RAPD법을 이용한 용역결과에서는, 국내산 고려인삼간에는 차이를 찾아낼 수 없었으나, 고려인삼과 북미삼간에는 유전적인 판별이 가능한 random primer를 선별할 수 있었다. 동명이물의 시료로 선택한 한국산 백출과 중국산 백출은 RAPD법에 의해 간단하게 유전적인 판별을 할 수 있었다. 반달곰, 흑곰, 불곰의 혈액 DNA를 표준 시료로 이용한 웅담의 진위 판별실험에서는 P8 primer을 이용한 RAPD 결과에서 세가지 시료간의 DNA 다형성에 뚜렷한 차이가 나타났다. 또한 비교 시료인 웅담시료에서도 반달곰의 혈액 DNA의 RAPD 유형과 동일한 DNA pattern을 나타내는 시료가 발견되어 이를 이용하여 반달곰의 웅담을 판별할 수 있을 것으로 시료되었다. 이상과 같이 본 연구에서는 유전자 분석법을 이용한 한약재의 판별연구를 위해 선택한 인삼류, 출 및 웅담등의 한약재에서 RAPD, ITS 부위의 RFLP 법등을 이용하여 약재의 분류 및 이종(異種) 시료와의 판별이 가능함을 확인할 수 있었다. 따라서 본 실험에서 선택한 시료이외의 형태와 이화학적인 검사만으로는 판별이 어려운 한약재에도 이러한 유전적 분석방법을 적용하여 분류 및 판별이 가증할 것으로 사료되었다.

목차 Contents

• 1. 서론...7
• 1) 연구의 목적 및 배경...7
• 2) 유전자 분석법에 의한 약재의 감별...9
• 2. 재료 및 방법...12
• 1) 한약재료의 선정...12
• 2) 한약재 에서 제놈 DNA 분리, 추출...16
• (1) 인삼 및 출로부터 DNA의 분리...16
• (2) 웅담 및 곰 혈액으로부터 DNA의 분리...17
• 3) 전기영동...18
• 4) RAPD 분석을 위한 PCR 조건...18
• 5) PCR법 으로 ITS 부위의 증폭...20
• 6) ITS 부위의 RFLP...21
• 3. 결과 및 고찰...23
• 1) 인삼류 약재로부터 DNA의 분리 및 추출...23
• 2) 인삼류 약재 의 RAPD...26
• 3) 인삼류 약재의 ITS 증폭 및 ITS 부위의 RFLP...31
• 4) 백출의 RAPD 및 ITS 부위의 RFLP...36
• 5) 웅담(곰 혈 액)의 RAPD...40
• 6) 웅담(곰혈액)의 Amp-FLP...41
• 참고 문헌...45
• 용역과제 보고서...47
• 1. 연구목적...48
• 2. 연구배경...48
• 1) 인삼 개설...48
• 2) 한의학에서 인삼의 응용 역사...50
• 3) 인삼류 한약재의 유통 문제점과 감별법 확립의 필요성...53
• 4) 기존 한약재 감별법의 문제점...55
• 5) 인삼류 한약재 감별에 관한 기존 논문...58
• 6) 인삼재 한약재에 대한 RAPD분석법의 응용 및 타당성 검토...59
• 3. 서론...63
• 4. 재료 및 방법...65
• 1) 재 료...65
• 2) 유전자 분석...65
• (1) DNA의 추출 및 정제...65
• (2) RAPD 방법...67
• (3) 유사도 지수의 계산과 유집분석...70
• 5. 결과 및 고찰...71
• 참 고 문 헌...86
• <부록 1>실험재료의 사진...89