지방조직 처리과정에 따른 collagenase 및 줄기세포의 안전성에 관한 연구 A Study of the safety about the adipose derived stem cell and the collagenase in fat tissue preparation 원문보기
<1세부> 성형을 위한 지방조직 처리 방법의 현황조사 1. 지방유래 줄기세포를 이용하는 시술을 시행하는 병원 및 시행영역, 시행방법의 조사 - 임의로 선택한 서울 강남구의 성형외과의 16%와 피부과 6%에서 지방줄기세포 시술하고 있음 - 줄기세포 분리방법은 0.1% collagenase를 사용하는 경우가 가장 많음 2. 우리나라 대학의 연구소 및 바이오 업체의 줄기세포 분리 방법 및 수율과 유통과정에 대한 조사 - 국내 대학병원 및 종합병원 성형외과 14.7%에서 지방유래줄기세포 관련
<1세부> 성형을 위한 지방조직 처리 방법의 현황조사 1. 지방유래 줄기세포를 이용하는 시술을 시행하는 병원 및 시행영역, 시행방법의 조사 - 임의로 선택한 서울 강남구의 성형외과의 16%와 피부과 6%에서 지방줄기세포 시술하고 있음 - 줄기세포 분리방법은 0.1% collagenase를 사용하는 경우가 가장 많음 2. 우리나라 대학의 연구소 및 바이오 업체의 줄기세포 분리 방법 및 수율과 유통과정에 대한 조사 - 국내 대학병원 및 종합병원 성형외과 14.7%에서 지방유래줄기세포 관련 연구를 진행하고 있음 - 현재 연구 이외 실제 임상에서 지방줄기세포를 사용하는 곳이 14곳 중 8곳 (57%)로 확인됨 <2세부> 지방조직 collagenase 처리 후 세척단계별 효소 잔류량 및 수획세포층의 구성성분과 수율 조사 1. Collagenase의 종류, 효소불활성제 종류, 세척액, 세척횟수에 따른 collagenase의 잔류량 측정 - Collagenase 활성도 측정법인 FALGPA assay 및 Ninhydrin assay를 이용하여 세척 단계별 활성 도를 측정한 결과 모든 결과에서 2회 이상 세척한 상등액에서 효소의 활성도가 측정되지 않음 - 성형외과에서 주로 사용되는 농도로 파악된 0.1% collagenase의 경우도 세척 2단계에서부터 활성이 관찰되지않았음 2. Collagenase 처리 후 세포 수획층의 구성성분 및 수율 조사 - Collagenase type I 처리 후 5회 세척 결과 얻은 수획층내 유핵세포수는 약 30% 로 확인 되었으며, 간엽줄기세포 표지자인 CD90, CD34로 표지된 세포가 각각 약 48%, 45%, 혈관내피세포 표지자인 CD31, CD146로 표지된 세포가 각각 약 13%, 2%, 백혈구 표지자인 CD14로 표지된 세포가 약 4%로 확인됨. <3세부> 지방조직 처리과정에 따른 collagenase의 in vivo 독성 및 성형에 사용되는 줄기세포층의 종양원성 연구 1. collagenase 처리, 세척 후 잔류한 collagenase에 의한 in vivo 독성 조사 - 분리된 지방유래세포의 NOD/SCID mouse에서 피하 4주 독성시험을 실시한 결과 collagenase의 잔류 및 세척횟수에 따른 특이적인 독성변화는 관찰되지 않았음. 2. 일부 성형과정중에 사용되는분리된줄기세포층의발암성(종양원성) 조사 - 분리된 지방유래세포의 BALB/c-nu mouse에서 발암성시험 결과, collagenase의 잔류 및 세척횟수에 상관없이 hATMSC은 종양을 유발하지 않는 것으로 사료됨.
Abstract▼
〈Part 1〉 An examination of current methods in fat tissue preparation for use in plastic surgery 1. An examination of hospitals performing procedures using adipose derived stem cells, including the field of application and procedural methods. - 16% of plastic surgical clinics and 6% of dermatol
〈Part 1〉 An examination of current methods in fat tissue preparation for use in plastic surgery 1. An examination of hospitals performing procedures using adipose derived stem cells, including the field of application and procedural methods. - 16% of plastic surgical clinics and 6% of dermatology clinics, selected randomly, in Kangnam-gu, Seoul, are performing procedures using adipose stem cells. - 0.1% collagenase is most widely used in stem cell differentiation. 2. An examination of methods used for stem cell differentiation, production, and distribution in university laboratories and biotechnology institutions in Korea. - 14.7% of university hospitals and general hospitals in Korea are currently involved in adipose-derived stem cell research. - 8 out of 14 (57%) institutions are using adipose derived stem cells in actual clinical cases. 〈Part 2〉An examination of the residual amount of enzyme, the cellular components, and yield of the derived stem cells according to the phase of lavage after treament of the adipose tissue with collagenase. 1. The residual amount of collagenase according to type of collagenase, type of collagenase inhibitor, lavage solution, and the frequency of lavage. - Results measuring the amount of enzyme activity at differing levels of lavage using FALGPA assay and Ninhydrin assay, methods to assess the activity of collagenase, show that there is no enzyme activity after more than 2 washings. - Moreover, there is no enzyme activity after more than 2 washings in 0.1% collagenase processing which is most widely used in plastic surgery. 2. An examination of the cellular components and the yield of the derived stem cells after treatment with collagenase. - After treatment with collagenase type I, the percentage of nucleated cells was 30%; CD90 and CD34, which are mesenchymal stem cell markers, were 48% and 45%, respectively; CD31 and CD146, which are endothelial progenitor cell markers were 13% and 2%, respectively; and CD14, a monocyte marker, was 4%. 〈Part 3〉 A study on the in vivo toxicity of collagenase and the carcinogenic properties of the stem cell derivative in fat tissue preparation. 1. An examination of the 4-week toxicity study of differentiated stem cell derivatives used in some reconstructive processes. - A 4 week subcutaneous toxicity test in a NOD/SCID mouse with differentiated adipose derived cells revealed no specific observable toxicity as a result of residual collagenase or as an effect of the frequency of washing. 2. An examination of the carcinogenicity of differentiated stem cell derivatives used in some reconstructive processes. - A toxicity test in a BALB/c-nu mouse with differentiated adipose derived cells revealed that hATMSC is not carcinogenic, regardless of the frequency of washing.
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