초록 ▼

옻나무 칠액의 HPLC 분석 결과 원주산 漆液은 $C_{18}$$0.2{\mu}m$ syringe filter로 filtering한 다음 HPLC분석용 칼럼으로 분석한 결과 50분 후에 용출되어 나오는 성분이 많았으나 silica gel adsorption column chromatography에서 hexane :acetone(90:10) 용매계로 용출시킨 50분 이후의 peak들이 사라졌다.
HPLC에 의한 옻나무 조추출물을 분석한 결과 5가지으 peak들이

옻나무 칠액의 HPLC 분석 결과 원주산 漆液은 $C_{18}$$0.2{\mu}m$ syringe filter로 filtering한 다음 HPLC분석용 칼럼으로 분석한 결과 50분 후에 용출되어 나오는 성분이 많았으나 silica gel adsorption column chromatography에서 hexane :acetone(90:10) 용매계로 용출시킨 50분 이후의 peak들이 사라졌다.
HPLC에 의한 옻나무 조추출물을 분석한 결과 5가지으 peak들이 나타났다. 이는 다른 천연물들의 성분들에 비해 매우 단순한 형태였다.
수피의 2차 대사산물 양상은 urushiol과 flavonoids, gummy material이 함께 분포하고 있었으며 생수피가 건조수피에 비하여 urushiol과 flavonoids 함량이 높게 추출되었더.
옻나무 목부 acetone 추출물을 추출한 결과 F1, F2, F3로 분획되었으며 F3을 다시 2.5cmx30cm컬럼으로 전환하여 분리하였을 때 다시 3개로 분리되어 F1, F2, F3, F4, F5로 분취할 수 있었다.
RAE 53.5g과 RBE 23g을 MeOH에 녹인 후 methylenechloride, ethylacetate, water를 사용하여 순차연속추출하였을 때 RAE 분획의 용매분획물은 methylene-chloride 가용부(RAE 1)23g, ethylacetate 가용부(RAE 2) 29g 및 water 가용부(RAE 3) 1.5g을 얻었으며 RBE 분획의 용매분획물은 methylenechoride 가용부 7g(RBE 1), ethylacetate 가용부(RBE 2) 15g 및 water 가용부(RBE 3) 0.6g을 얻었다.
옻나무 추출액을 대상으로 항암활성을 검색한 결과 urushiol의 경우 탁월한 유암 및 위암세포 성장 억제 및 apoptosis 유도 효과를 보였다. 특히 apoptosis 유도 효과, DNA fragmentation 유도 효과, apoptosis 관련 단백질의 발현을 조절하는 작용 기전이 확인되었다. 따라서 옻나무에는 단일 혹은 수종 이상의 항암 활성, 특히 유암 및 위암에 대한 세포성장 억제효과 물질이 있음을 알 수 있다.
그리고 옻나무 추출물 중 urushiol의 위암, 유암에 대한 항암 활성 기전 연구가 필요하다고 사료된다. 그리고 apoptosis 유도와 관련하여 apoptosis 발생과정에 수종의 세포질내 혹은 핵내 단백질들이 분해된다. 따라서 이들 단백질의 발현 유무를 확인할 경우 옻나무 추출물들에 의한 apotosis 유도 여부를 더욱더 명확히 검색할 수 있다. 그리고 urushiol의 경우 p53이 발현 증가, p53 의존성 p21이 발현 증가로 세포주기를 G1 phase에 arrest시키고, 이후 암세포의 apoptosis 유도, Bcl-2의 발현 감소, Bax의 발현 증가 등으로 미루어 볼 때 전형적인 형태의 암세포 apoptosis 유도물질로 사료된다. 특히 wild type p53를 가지는 인체 위암에 선택적인 apoptosis 유도 작용이 있음을 보아 이에 대한 지속적인 연구를 통해 새로운 항암제로의 lead compound 개발이 필요하다. 그리고 항혈관신생억제 효과를 가지는 것으로 보아 이에 대한 체계적인 연구도 더 필요하다고 사료된다.
옻나무 추출물을 투여할 경우 간의 alcohol dehydrogenase 효소왈성이 증가하며, 혈중알콜농도가 0.162%에서 0 .014%로 떨어져 약 1/10 가량으로 혈중알콜농도를 떨어뜨리는 것으로 확인되었다. 그리고 과산화지질을 유도하여 지방간을 유도하는 간독성물질인 사염화탄소 ($CCl_4$)를 처리한 랫드에 옻나무 추출물을 처리하였을 때 ALT와 AST 모두 대조군의 수준으로 떨어뜨려 옻나무 추출물이 간보호작용을 하는 것으 로 나타났다.
옻나무의 추출물에 대하여 마우스 비장세포를 이용하여 mitogen assay를 수행하였다. 옻나무 추출물만을 사용한 경우 cell viability의 변화 없이 $2.5{\mu}g/m{\el}$로 처리한 경우부터 proliferation activity가 떨어지는 결과를 보였다.
그러나 옻나무와 함께 concanavalin A(ConA, $5{\mu}g/m{\el}$)를 처리한 경우에는 $25{\mu}g/m{\el}$에서 viability의 큰 변화 없이 DPM이 약 70% 정도 감소하여 T lymphocyte proliferation activity에 영향을 주었다. Lipopolysaccharide(LPS, $10{\mu}g/m{\el}$)를 이용한 B lymphocyte proliferation assay에서도 cell viability의 변화 없이 옻나무의 농도 $25{\mu}g/m{\el}$에서 DPM이 감소하였다.

Abstract ▼

The sap of lacquer tree(Rhus vernicifera Stokes), planted in Wonju city Kangwon province, have much compounds eluted after 50 minutes. But The peaks after 50 minutes disappeared on eluent solvent system same as Hexane:Acetone (90:10) by silica gel adsorption column chromatography.
The analysis re

The sap of lacquer tree(Rhus vernicifera Stokes), planted in Wonju city Kangwon province, have much compounds eluted after 50 minutes. But The peaks after 50 minutes disappeared on eluent solvent system same as Hexane:Acetone (90:10) by silica gel adsorption column chromatography.
The analysis results of lacquer tree crude extract by HPLC appeared five main peaks simply as be compared to other extracts. Secondary metabolites of lacquer tree bark were urushiol, flavonoids and gummy material. The contents of urushiol and flavonoids were extracted higher at the dried bark than green bark. By preparative HPLC lacquer tree crude extract was isolated to F1, F2, F3, F4 and F5 fractions.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...2
• 요약문 ...3
• SUMMARY ...10
• CONTENTS ...13
• 목차 ...14
• 제1장 서론...20
• 제2장 옻나무 유용물질 분리 및 정제...26
• 제1절 서설 ...28
• 1. 옻나무 유용물질 ...28
• 2. Urushiol의 화학적 구조 ...29
• 3. Urushiol의 피부염증 유발 및 면역학적 연구 ...31
• 4. Flavonoids의 생리활성...31
• 제2절 재료 및 방법 ...37
• 1. 공시재료 ...37
• 가. 공시 임목과 시료조제 ...37
• 나. 공시 옻칠액 ...37
• 2. 실험방법 ...37
• 가. Urushiol의 분리정제 ...37
• 1) Silica gel adsorption column chromatography ...38
• 2) 분리정제 ...38
• 나. Flavonoids의 분리정제와 분석 ...41
• 1) Flavonoids의 분리정제 ...41
• 가) 조추출물 제조 ...41
• 나) 실리카겔 흡착 크로마토그라피 ...42
• 다) Solid Phase Extractor(SPE) ...44
• 다. Flavonoids의 분리 ...44
• 1) HPLC ...44
• 라. Prep-HPLC에 의한 분리정제 ...46
• 마. 옻나무 수피로부터 urushiol과 flavonoids의 분리 ...47
• 바. 용매분획 ...47
• 1) RAE분획과 RBE분획의 용매분획 ...47
• 2) 각 분획물질 확인 ...47
• 제3절 결과 및 고찰 ...48
• 1. Urushiol과 flavonoids의 분리정제 ...48
• 가. Urushiol의 분리와 정제 ...48
• 나. Flavonoids의 분리정제 ...49
• 1) 옻나무 목재로부터 flavonoids의 제조 ...49
• 2) HPLC에 의한 분리정제 ...50
• 3) SPE(Solid Phase Extractor)에 의한 분리정제 ...51
• 2. 옻나무 수피로 부터 urushiol과 flavonoids의 분리 ...53
• 3. Prep-HPLC에 의한 분리정제 ...53
• 4. Flavonoids의 용매분획 ...55
• 가. RAE 분획의 용매분획 ...55
• 나. RAE 분획별 물질에 대한 Rf치 ...55
• 다. RBE 분획의 용매분획 ...55
• 라. RBE 분획별 물질에 대한 Rf치 ...56
• 5. GPDC의 합성 ...56
• 6. 옻나무의 경제성분석 ...57
• 가. 조림면적 및 생산실태 ...57
• 나. 옻칠의 유통경로 ...61
• 다. 옻나무 재배의 투자효과 ...62
• 1) 경제성 계산 기준 ...63
• 2) 옻나무 경제성 분석 ...64
• 제4절 결론 ...66
• 제3장 암세포 증식 및 혈관신생 억제 작용 ...68
• 제1절 서설 ...70
• 제2절 재료 및 방법 ...77
• 1. 재료 및 시약 ...77
• 가. 암세포 ...77
• 나. CAM assay용 계배 ...77
• 다. 시약 ...77
• 2. 실험방법 ...78
• 가. 암세포 증식 억제 연구 ...78
• 1) 세포배양 ...78
• 2) MTT assay 에 의한 세포 독성 조사 ...78
• 3) Agarose gel analysis of DNA fragmentation ...79
• 4) PI staining과 핵 구조 관찰 ...80
• 5) Western immunoblot analysis ...80
• 6) 전자현미경에 의한 관찰 ...80
• 나. Urushiol의 생체 내 항암활성 연구 ...81
• 다. 혈관신생억제 연구: CAM assay ...81
• 제3절 결과 및 고찰 ...83
• 1. Urushiol에 의한 암세포 증식 억제 연구 ...83
• 가. 유암세포의 증식 억제 ...83
• 나. Urushiol에 의한 위암세포 증식 억제 연구 ...89
• 다. Urushiol의 생체 내 항암활성 연구 ...101
• 2. 옻나무 수피 추출물들에 대한 세포독성 효과 검색 ...102
• 3. KW, Hwa-Chil I, Hwa-Chil S의 항암활성 검색 ...105
• 4. 수종의 옻나무 추출액에 대한 항암활성 검색(I) ...107
• 5. 수종의 옻나무 추출액에 대한 항암활성 검색(II) ...109
• 6. 항혈관생성 억제 실험 결과 ...114
• 제4절 결론 ...120
• 제4장 간독성, 면역증진 및 안전성 평가 ...122
• 제1절 서설 ...124
• 제2절 재료 및 방법 ...127
• 1. 실험동물 ...127
• 2. 숙취해소 및 예방에 대한 효과 ...127
• 가. 혈중 alcohol 농도의 측정 ...127
• 나. Alcohol dehydrogenase 활성도 측정 ...127
• 3. 간독성 치료 및 예방에 대한 연구 ...128
• 가. In vitro 간독성 실험모델 정립 ...128
• 나. 간독성 시험방법 ...128
• 4. 면역기능 증강효과 시험 ...129
• 가. Polyclonal 항체반응 ...129
• 나. T-dependent 항체반응 ...129
• 다. B-cell proliferation assay ...130
• 라. T-cell proliferation assay ...130
• 5. 단회 경구투여독성 시험에 의한 안전성 평가 ...130
• 제3절 결과 및 고찰 ...131
• 1. 혈중알콜농도 저하효과 ...131
• 2. Alcohol dehydrogenase 활성도 측정 ...133
• 3. 간독성 해소효과 ...134
• 4. 면역증진효과 ...136
• 가. Mitogen Assay ...136
• 5. 단회 경구투여독성 시험에 의한 안전성 평가 ...142
• 제4절 결론 ...143
• 제5장 옻나무 유용물질의 구조분석 ...144
• 제1절 서설 ...146
• 제2절 재료 및 방법 ...147
• 1. 분자량 측정 및 조성식 분석 ...147
• 가. 질량분석 ...147
• 나. 분자구조 분석(NMR) ...147
• 1) 조성식 확인 ...147
• 2) 공명선 귀속 ...147
• 3) 분자구조분석 ...148
• 제3절 결과 및 고찰 ...149
• 1. 분자량 측정 및 조성식 분석 ...149
• 가. 옻나무 목부 Ra분획의 분석 ...149
• 나. UV Spectrum 분석 ...149
• 다. 옻나무 Ra분획의 FTIR에 의한 화학 작용기 분석 ...150
• 2. Urushiol의 분자구조 ...150
• 가. 분자량 ...150
• 나. NMR 분석 ...151
• 3. Flavonoids의 분자구조 ...153
• 가. 분자량 ...153
• 나. NMR 분석 ...153
• 제4절 결론 ...167
• 참고문헌 ...168