초록 ▼

◆ 연구목표
<최종목표>
- 간암의 진행, 전이 및 예후 등에 관계되는 유전자와 세포신호전달체계를 VEGF를 중심으로 발굴
- 발굴된 유전자를 이용한 간세포암종의 새로운 예후 분류 및 치료 반응 예측
- 개선된 간세포암종 분류에 따른 개별화된 치료 및 추적 전략의 기초 확립
<당해년도 목표>
1. 저산소증에서 간세포암종 세포주의 증식 및 VEGF 발현 관련 세포신호전달 체계 탐색
2. 간세포암주에서 VEGFR inhibitor 투여시 반응에 따른 유전자발현 차이 연구
3. 간세포암종 환자에

◆ 연구목표
<최종목표>
- 간암의 진행, 전이 및 예후 등에 관계되는 유전자와 세포신호전달체계를 VEGF를 중심으로 발굴
- 발굴된 유전자를 이용한 간세포암종의 새로운 예후 분류 및 치료 반응 예측
- 개선된 간세포암종 분류에 따른 개별화된 치료 및 추적 전략의 기초 확립
<당해년도 목표>
1. 저산소증에서 간세포암종 세포주의 증식 및 VEGF 발현 관련 세포신호전달 체계 탐색
2. 간세포암주에서 VEGFR inhibitor 투여시 반응에 따른 유전자발현 차이 연구
3. 간세포암종 환자에서 VEGFR inhibitor의 치료 반응과 그 예후인자 연구
4. 발굴된 VEGF 유전자 다형성의 기능 확인

◆ 연구내용 및 방법
1. 저산소증에서 간세포암종 세포주의 증식 및 VEGF 발현 관련 세포신호전달 체계 탐색
- cell culture, MTT assay, VEGF ELISA, western blot, Affymetrix GeneChip microarray assay, real time PCR, DDR2 siRNA 합성 및 transfection,
- hypoxia에서 COX2 inhibitor에 의해 Hep3B는 VEGF 발현이 저하되나, SNU387은 오히려 VEGF 발현이 증가
- hypoxia에서 COX2 inhibitor 처리시 발현되는 유전자들 중 두 세포 사이에 차이를 보이는 유전자로서 DDR2 및 IGF1R 발굴
- DDR2 siRNA transfection으로 SNU387에서 VEGF 분비가 감소됨으로써 DDR2가 VEGF pathway 상위 확인
- COX2-induced increase of VEGF expression in SNU387 was completely suppressed by an IGF1R inhibitor
- hypoxia-induced VEGF expression in SNU387, but not Hep3B, was decreased by inhibitors of MAPK and PI3K, which are key downstream signals of IGF1R

2. 간암세포주에서 VEGFR inhibitor 투여시 반응에 따른 유전자 발현 차이 연구
- 사용 약제: BMS-582664 (VEGFR2, FGFR1, and FGFR2 inhibitor)
- HCC cell line: Hep3B, SNU387, SNU182, SNU423, SNU449, SNU475, PLC/PRF5
- MTT assay, flow cytometry analysis, VEGF receptor sandwish ELISA, Illumina microarray
- BMS-582664에 의해 세포증식이 가장 많이 억제되는 간암세포주는 SNU449, 증식 억제는 dose dependent
- BMS-582664에 의한 간세포암종 세포 증식 억제는 apoptosis가 관여
- BMS-582664에 의한 간세포암종들의 VEGF receptor phosphorylation 억제 정도를 측정하였으며, SNU449가 억제가 많이 되었음.
- 대상 세포주들에 대한 microarray assay상 VEGFR phosphorylation이 잘 되었던 세포들과 잘 안되었던 세포들 간의 유전자 hierachial clustering 확인
- Six genes (AFP, CAV1, OAF, PEG3, SNTB1, and CAMK2N1 ) showed a significant correlation microarray data and Real-time PCR data. Represented data was (A) AFP (B) CAV1 (C) CAMK2N1 (D) OAF (E) PEG3 , and (F) SNTB1 gene expression and real time PCR results.
- Gene silencing effect on FRFR2 phosphorylation. After siRNA treatment for (A) AFP and (B) PEG3, brivanib treatment effect was changed in SNU 182 and PLC/PLF cell lines. In multivariate model, both of AFP and PEG were significant genes (y=0.17+0.68*AFP+2.43*PEG3, y=phosphorylation of VEGFR2 and FGFR2, x=difference of phosphorylation of siRNA + Brivanib and control + Brivanib, P = 0.044, R2= 0.998).

3. 간세포암종 환자에서 VEGFR inhibitor의 치료 반응과 그 예후인자 연구
- 절제 불가능한 간세포암종 환자에서 경동맥화학색전술 및 쏘라페닙(넥사바) 병행치료에 대한 제2상 연구를 연구자 주도임상(IIS)로 설계하여 식약청 허가를 받아 시행 중
- 간세포암종 환자에서 경동맥화학색전술 후 발열의 임상적 의미와 예후 연구
-간세포암종 환자 말초혈액 내 알파태아단백 및 telomerase 역전사효소 mRNA측정의 임상적 의미 연구를 종료하고 보고함
-B형 만성간염이 동반된 간세포암종 환자에서 clevudine 치료 효과 연구

4. 발굴된 VEGF 유전자 다형성의 기능 확인
VEGF -634에 대한 glucocorticoid receptor binding EMSA 시행하였으며, 결합 가능한 다른 단백질들을 찾아 항체를 사용한 super-shift EMSA 시행

◆ 연구성과
-정량적 성과

1) 총연구기간내 목표 연구성과로 기 제출한 값
* 괄호안은 본과제지원이 명시된 논문
-정성적 성과

Abstract ▼

Primary liver cancer is the sixth most common cancer worldwide in terms of numbers of cases. Hepatocellular carcinoma (HCC), accounting for the majority of primary liver cancers, is classically considered a neoplasm with dismal prognosis. HCC is a typical hypervascular tumor, and an arterial hyperva

Primary liver cancer is the sixth most common cancer worldwide in terms of numbers of cases. Hepatocellular carcinoma (HCC), accounting for the majority of primary liver cancers, is classically considered a neoplasm with dismal prognosis. HCC is a typical hypervascular tumor, and an arterial hypervascular pattern in radiologic examination is a key diagnostic criterion. The mechanisms underlying initiation of hepatocarcinogenesis may depend on hepatitis B virus (HBV) or hepatitis C virus (HCV)-related carcinogenesis or chronic inflammation-malignant transformation pathways, but are not well understood at present. Chronic injury stimulates fibrogenesis to demolish the normal liver blood supply, and high proliferation of tumor cells additionally induces local hypoxia within HCC. Generally, hypoxia suppresses cell proliferation. In contrast, central hypoxia of HCC upregulates proangiogenic growth factors, which are potent mediators of tumor growth and angiogenesis, and is consequently related to tumor progression.
HCC is characterized by abundant vasculature. Angiogenesis contributes to the progression of HCC via specific mediators, including vascular endothelial growth factor (VEGF). Overexpression of VEGF is observed in HCC and hypoxia is a central stimulus of angiogenesis in human HCC through up-regulation of VEGF gene expression. The serum VEGF concentration and VEGF polymorphisms constitute an independent predictor of HCC recurrence and overall survival.
Our studies showed for the first time that DDR2 is associated with VEGF pathways and regulates cell proliferation of hepatocellular carcinoma. We also suggested that several genes are associated with phosphorylation inhibition after brivanib treatment in human HCC cell lines, and especially AFP and PEG3 was involved in FGFR2 phosphorylation. . The other our results indicate that AFP and hTERT mRNA expression in peripheral blood may not be useful HCC prognostic markers. We showed that VEGF increment is associated with prognosis of TACE in patients with HCC.

목차 Contents

• 기관고유연구사업 결과 보고 ...1
• 작성요령 ...2
• 표지 ...3
• 제출문 ...6
• 목 차 ...7
• 요약문 ...8
• Project Summary ...10
• 연구결과 ...11
• 1. 연구의 최종목표 ...11
• 2. 연구의 내용 및 결과 ...11
• 3. 연구결과 고찰 및 결론 ...48
• 4. 연구성과 및 목표달성도 ...51
• 5. 연구결과의 활용계획 ...59
• 6. 참고문헌 ...61
• 7. 첨부서류 ...61