초록 ▼

본 연구는 1. 노로바이러스와 A형 간염바이러스 등에 의한 식중독 사고 발생 시 신속한 원인체 규명 등 역학조사를 위한 동시다중 신속 검출법 개발, 2. 식품용수 아스트로바이러스 및 장관아데노바이러스 시험법 개발, 3. 국내ㆍ외 노로바이러스 유전자 증폭(Conventional RT-PCR) 시험법 평가를 목표로 하였다.
국내ㆍ외에 노로바이러스와 A형 간염바이러스 Realtime RT-PCR법과 관련한 probe와 primer을 조사하고, Multiplex Realtime RT-PCR에 적용하기 위해 각 probe의 Report

본 연구는 1. 노로바이러스와 A형 간염바이러스 등에 의한 식중독 사고 발생 시 신속한 원인체 규명 등 역학조사를 위한 동시다중 신속 검출법 개발, 2. 식품용수 아스트로바이러스 및 장관아데노바이러스 시험법 개발, 3. 국내ㆍ외 노로바이러스 유전자 증폭(Conventional RT-PCR) 시험법 평가를 목표로 하였다.
국내ㆍ외에 노로바이러스와 A형 간염바이러스 Realtime RT-PCR법과 관련한 probe와 primer을 조사하고, Multiplex Realtime RT-PCR에 적용하기 위해 각 probe의 Report dye와 primer의 Sequence는 Primer Express를 이용하여 조절하였다. 노로바이러스와 A형 간염바이러스를 동시에 검출하기 위해 선정된 primer, probe는 Multiplex Realtime RT-PCR에 교차 적용하여 최적화 하였다. 또한, 노로바이러스 GI, GII Group을 동시에 검출하기 위한 Duplex Realtime RT-PCR 검출법을 만들기 위해 GI, GII의 Single Realtime RT-PCR에서 민감도가 높은 primer, probe set를 선별하였고, Standard RNA를 이용해 개발된 노로바이러스 Duplex Realtime RT-PCR법의 검출한계를 정량화 하였다.
식품용수(지하수)의 아스트로바이러스 및 장관아데노바이러스 시험법 마련을 위해 바이러스 흡착단계(2종의 양전하 필터), 농축단계(PEG, Ultracentrifuge, Disc filter), 유전자 증폭 단계(PCR, RT-PCR ELISA)를 단계별 효율을 비교하였다.
우리나라, 미국, 일본에서 대표적으로 사용하고 있는 노로바이러스 Conventional RT-PCR 시험법에 사용하는 primer를 노로바이러스 GI과 GII의 유전자형 별로 적용하여 민감도를 상호 비교 평가하였다.
노로바이러스 GI, GII group과 A형 간염바이러스를 동시 검출이 가능한 Triple Realtime RT-PCR 신속검출법 개발하였다. 노로바이러스 GI, GII group을 1 copy까지 동시에 검출할 수 있는 Duplex Realtime RT-PCR 시험법을 마련하여 범정부 노로바이러스 표준화 시험법으로 제안하였다.
아스트로바이러스는 Nanoceram 필터-PEG, Ultracentrifuge 농축-Realtime RT-PCR,가 가장 적합한 검출방법이었으며. 장관아데노바이러스는 Nanoceram 필터-Ultracentrifuge-PCR 확인되었다. 노로바이러스 Conventional RT-PCR primer의 검출 민감도를 비교한 결과 우리나라 식품공전의 노로바이러스 primer는 본 연구에서 대상으로 한 GI의 3개 type과 GII의 6개 type을 모두 검출하였다.

Abstract ▼

The objectives of this study were 1. development of detection method for Norovirus and Hepatitis A virus, using multiplex Realtime RT-PCR, 2. development of detection method of Astrovirus and enteric Adenovirus in water used for food processing, and evaluation of Norovirus conventional RT-PCR method

The objectives of this study were 1. development of detection method for Norovirus and Hepatitis A virus, using multiplex Realtime RT-PCR, 2. development of detection method of Astrovirus and enteric Adenovirus in water used for food processing, and evaluation of Norovirus conventional RT-PCR method.
Probe and primer related to Norovirus and Hepatitis A virus Realtime RT-PCR were investigated and we modified probe Report dye and primer sequence for Multiplex Realtime RT-PCR. The selected primer and probe for multiplex detection of those viruses were optimized for Multiplex Realtime RT-PCR. Moreover, in order to develop Duplex Realtime RT-PCR detection method that can be used to detect Norovirus GI,GII group, primer and probe set with high sensitivity in GI, GII Realtime RT-PCR were selected. We also quantified the detection limit of Duplex Realtime RT-PCR developed by Standard RNA.
We studied about the comparison of step efficiency for positive charge filter(1MDS, Nanoceram), concentration(PEG, Ultracentrifuge, Disc filter), detection methods(PCR, RT-PCR, ELISA) of Astrovirus and enteric Adenovirus in water used for food processing.
The primer which is commonly used for Norovirus Conventional RT-PCR method widely was applied to the each genotype of Norovirus GI, GII, and we compared the sensitivity rate.
We developed Triple Realtime RT-PCR method for detection of Norovirus GI, GII group and Hepatitis A virus at once.
We established Duplex Realtime RT-PCR method for detection up to 1 copy of norovirus GI and GII, and we suggested this method for Norovirus standard method.
In this study, the most suitable method of Astrovirus(Nanoceram- PEG/Ultracetriguge- Realtime RT-PCR) and enteric Adenovirus(Nanoceram-Ultracentrifuge-PCR) in water used for food processing, were established.
Norovirus primer which we used was detected in all of GI, GII type we had(3 type of GI, 6 type of GII).

목차 Contents

• 자체연구개발과제 최종보고서...1
• 표지...2
• 요약문...4
• Summary...5
• 목차...6
• I. 연구개발과제 연구결과...13
• 제1장 연구개발과제의 개요...13
• 제2장 연구개발과제의 필요성...25
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과...31
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...109
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...113
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획...114
• 제7장 참고문헌...115
• 제8장 첨부서류...122