초록 ▼

○ 본 연구그룹은 항 HAT 활성을 함유 천연물소재를 이용한 전립선암 치료제 후보물질 개발을 목표로 하고 있으며, 1차적 후보물질의 선정을 위하여 1,000 여종의 천연물 추출물 라이브러리를 대상으로 하여 항 HAT 활성을 비교하는 1차 스크리닝을 수행하였음.
○ 1차 스크리닝은 HeLa cell nuclear extract를 이용하여 in vitro 상으로 histone acetyltransferase activity를 검토함으로써 후보 시료를 선정하였으며, 선정된 후보들을 대상으로 전립선암세포에 대한 세포 사멸능을 검토하여

○ 본 연구그룹은 항 HAT 활성을 함유 천연물소재를 이용한 전립선암 치료제 후보물질 개발을 목표로 하고 있으며, 1차적 후보물질의 선정을 위하여 1,000 여종의 천연물 추출물 라이브러리를 대상으로 하여 항 HAT 활성을 비교하는 1차 스크리닝을 수행하였음.
○ 1차 스크리닝은 HeLa cell nuclear extract를 이용하여 in vitro 상으로 histone acetyltransferase activity를 검토함으로써 후보 시료를 선정하였으며, 선정된 후보들을 대상으로 전립선암세포에 대한 세포 사멸능을 검토하여 최종 후보를 선정하였음.
○ 선정된 후보들을 대상으로 HAT 활성과 특이적 HAT 단백질에 대한 농도별 활성을 검토 하였으며, 상기의 결과에 기초하여 안드로젠 수용체 전사 및 target 단백질의 mRNA 발현 억제의 확인으로 안드로젠 수용체 매개 전사활성에 추출물의 영향을 확인하였음.
○ 최종적으로 Immunoprecipitation과 ChIP assay를 실시하여 히스톤 및 안드로젠 수용체의 아세틸화를 억제함을 확인함.
○ 월등한 HAT 저해 효과를 보인 천연물 추출물을 대상으로 하여 다양한 정제 방법을 이용하여 선정 시료에서의 활성 미량성분의 효과적인 정제 방법을 확립하였으며 이를 이용하여 추출물에서 활성 미량 물질의 정제 및 구조 분석을 진행하였음
○ 천연물 추출물에 특이적으로 함유된 카테킨 성분 중 EGCG 대상으로 다양한 HAT 단백질에 대한 효소특이성을 검토하였으며 그 결과 p300와 CBP의 HAT활성을 특이적으로 저해하는 것을 확인하였음.
○ 또한 EGCG가 항 HAT 활성을 갖는다는 선행 연구를 바탕으로 하여 EGCG을 대상으로 염증에 의해 발생 될 수 있는 안드로젠 비의존성 전립선암 저해 활성에 대한 효과를 보고자 함. 염증 신호전달 체계에서 가장 중요한 역할을 하는 p65가 acetylation됨으로써 활발한 염증 반응이 일어나게되고 이로인해 전립선암이 진행 될 수 있음을 착안하여 항 HAT활성이 있는 EGCG가 p65의 acetylation을 저하시키고 나아가 염증 신호 전달 체계에 어떠한 효과를 갖는지에 대해 구체적으로 살펴봄.
○ In vitro 상에서 효능이 있음을 확인한 시료를 대상으로 하요 in vivo상에서 Luciferase 고발현 전립선암세포를 이용한 xenograft 모델 제작 후 시료 투여에 의한 항암효과를 규명함.
○ 또한 항암 효능이 좋았던 성분의 Pharmaco-core 구조를 기반으로 다양한 유도체 합성 및 구조분석을 진행하였으며 xenograft 모델을 이용하여 최대 항암효과 함유 유도체 선별를 선별하였음.
○ 최종적으로 선정된 항 HAT 유도체들을 대량 생산 하기 위하여 최적의 생산 조건을 만든 후 이를 대량 합성하여 in vitro 상에서 그 효과 및 전립선암 세포주별 (PC3, LNcaP) 사멸효과를 재 검정함

Abstract ▼

The histone acetyltransferase (HAT) inhibition of 100 korea natural plants were compared for treating androgen -dependent prostate cancer. In several plant extracts, extracts from Camellia sinensis, Pimenta diocia, Rosa rugosa, and Oenanthe javanica presented the signifiable inhibitory effect on an

The histone acetyltransferase (HAT) inhibition of 100 korea natural plants were compared for treating androgen -dependent prostate cancer. In several plant extracts, extracts from Camellia sinensis, Pimenta diocia, Rosa rugosa, and Oenanthe javanica presented the signifiable inhibitory effect on androgen dependents prostate cancer in vitro. Especially, extracts of Rosa rugosa, inhibited both p300 and CBP (60 - .70% at 100g/ml) activity. We showed these extracts inhibits agonist-dependent androgen receptor (AR) activation and enhances the action of antagonist for treatment of prostate cancer. The extracts of Rosa rugosa treatment also decreased transcription of AR regulated genes and also reduced histone H3 and AR acetylation in the promoters of prostate-specific antigen (PSA) and -2-microglobulin (B2M). Finally, extracts of Rosa rugosa treatment reduced the growth of LNCaP, a human prostate cancer cell line. The extract of Rosa rugosa was more separated with hexane, chloroform, and ethyl acetate of water, in order. From the first and second silica gel column chromatography, each subfraction which have high inhibitory effect against HAT was selected. This fraction was purified by high performance liquid chromatography (HPLC) and structure analysis of the compounds by ¹H/¹³C-NMR. As a results, the compounds were identified as gallate and EGCG.
Subsequently, we have provided evidence that EGCG, a HAT inhibitor, inhibits p65 acetylation-dependent NF-kB activation and suppresses the tumor-promoting stage in lymphoma. At a dose of 100 mM, EGCG abrogates p300-induced p65 acetylation in vitro and in vivo, increases the level of cytosolicIk-B, and suppresses TNFa-induced NF-kB activation. We have also showed that EGCG prevents TNFa-induced p65 translocation to the nucleus, confirming that hyperacetylation is critical for NF-kB translocation as well as activity. Furthermore, we found that EGCG treatment inhibited the acetylation of p65 and the expression of NF-kB target genes in response to diverse stimuli. Finally, EGCG was shown to reduce the binding of p300 to the promoter region of IL-6 gene with an increased recruitment of HDAC3, which highlights the importance of the balance between HATs and HDACs in the NF-kB-mediated inflammatory signaling pathway. Finally we demonstrated that EGCG at 50 mM dose completely blocks Epstein-Bar Virus (EBV) infection-induced cytokine expression and subsequently the EBV-induced B lymphocyte transformation.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 7
• CONTENTS ... 9
• 목 차 ... 10
• 제 1 장 서 론 ... 11
• 제1절 연구 개발의 목적 ... 11
• 제2절 연구 개발의 필요성 ... 11
• 제3절 연구 개발의 범위 ... 13
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 14
• 제 3 장 연구 개발 수행 내용 및 결과 ... 15
• 제1절 1차년도 연구 수행 내용 및 결과 ... 15
• 제2절 2차년도 연구 수행 내용 및 결과 ... 20
• 제3절 3차년도 연구 수행 내용 및 결과 ... 27
• 제4절 4차년도 연구 수행 내용 및 결과 ... 30
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 35
• 제1절 목표대비 대외달성도 ... 35
• 제2절 정량적 성과 ... 36
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 38
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 38
• 제 7 장 기타 중요 변동사항 ... 38
• 제 8 장 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구장비 현황 ... 38
• 제 9 장 참고문헌 ... 39
• 끝페이지 ... 39