초록 ▼

본 연구과제는 면역반응을 억제할 수 있는 유전자를 형질전환한 돼지의 체세포를 제작하여 이종이식시 발생하는 초급성 면역거부반응 및 세포성 면역반응을 억제할 수 있는 기술을 개발하고 이를 분자생물학적 시스템으로 확인하는 것이다. 궁극적으로는 형질전환돼지를 생산하여 면역반응 억제를 확인하기 위한 것으로 US2, US6, US11, human CD59, human DAF, K3, K5의 각각의 유전자를 단독 또는 복합으로 형질전환하여 세포주를 제작하고 유전자 유무와 단백질의 발현 및 그 기능을 실험적으로 확인하였으며 이를 돼지의 난자에 체

본 연구과제는 면역반응을 억제할 수 있는 유전자를 형질전환한 돼지의 체세포를 제작하여 이종이식시 발생하는 초급성 면역거부반응 및 세포성 면역반응을 억제할 수 있는 기술을 개발하고 이를 분자생물학적 시스템으로 확인하는 것이다. 궁극적으로는 형질전환돼지를 생산하여 면역반응 억제를 확인하기 위한 것으로 US2, US6, US11, human CD59, human DAF, K3, K5의 각각의 유전자를 단독 또는 복합으로 형질전환하여 세포주를 제작하고 유전자 유무와 단백질의 발현 및 그 기능을 실험적으로 확인하였으며 이를 돼지의 난자에 체세포 핵이식을 실시하여 복제란의 체외생산 및 복제란의 생산체계 극대화를 위해 연구개발 하였다. 그러나 체세포 핵치환을 통한 복제기술은 효율적인 측면에서 볼 때 아직 완전하다고 할 수 없으므로 본 팀은 복제 효율성 증진과 형질전환의 안전성 확보의 필요성을 중요히 생각하여 체외성숙, 수정과 염색체의 리모벨링, 재프로그래밍등의 과정에 대한 폭넓은 연구를 진행하고, 난자의 성숙, 수정, 착상 등 배발생 관련 유전자를 발굴하여 그들의 기능을 분자수준에서 규명하고 이연구 결과를 바탕으로 유전자를 조작하여 동물복제 효율을 높이는 연구를 수행할 것이다.

Abstract ▼

Xenotransplantation has the potential to resolve the chronic shortage of donor organs if immunological barriers will be overcome. Especially, the initial type of rejection in xenotransplantation is acute cellular rejection by host $CD8^+$ cytotoxic T lymphocyte(CTL) cells that react to do

Xenotransplantation has the potential to resolve the chronic shortage of donor organs if immunological barriers will be overcome. Especially, the initial type of rejection in xenotransplantation is acute cellular rejection by host $CD8^+$ cytotoxic T lymphocyte(CTL) cells that react to donor class I MHC. The human cytomegalovirus (HCMV) glycoprotein unique short (US) 2 and usn specially target class I MHC heavy chains for dislocation from endoplasmic reticulum (ER) membrane to the cytosol, where they are degraded by the proteasome. HCMV derived glycoprotein US6 inhibits peptide translocation by the transporter associated with antigen processing (TAP) onto MHC class I and antigen presentation to $CD8^+$ T cells. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) protein K3 and K5 inhibits the cytotoxic activity of CTL cells by down-regulation of class I MHC expression. Human complement cascade and natural killer (NK) cells are also major components of the hyperacute and cellular response in xenotransplantation. Hyperacute rejection (HAR) mediated by natural antibodies (Nab) reject xenograft by triggering complement cascade. Human CD59, a kind of the complement regulatory proteins (CRPs), and decay accelerating factor (DAF) prevent the terminal polymerization of the membrane attack complex by complement.
In this study, we produced several minipig clonal cell lines by transfection into minipig fetal fibroblast cells. Produced US2 clonal cell lines, US6 clonal cell lines, usn clonal cell lines and US6!USll/K3/K5 multi transfected clonal cell lines showed reduction of SLA- I expressing level and significantly reduced cytotoxicity In human cytotoxic T lymphocyte assay. CD59 clonal cell lines and HLA-G/hDAF/CD59 clonal cell lines were confirmed high expression on the cell surface and showed reduction of cytotoxicity in human complement assay.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...3
• 요약문...5
• SUMMARY...10
• 목차...12
• 제 1 장 서 론...13
• 제 1 절 연구개발의 목적 및 필요성...13
• 제 2 절 연구개발의 범위...14
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...15
• 제 1 절 국외...15
• 제 2 절 국내...19
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...21
• 제 1 절 연구개발내용 및 방법...21
• 제 2 절 연구결과...26
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도...55
• 제 1 절 연차별 연구목표 및 기여도...55
• 제 2 절 연구성과의 목표달성도...57
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...62
• 제 6 장 기타 중요 변동사항...63
• 제 7 장 참고문헌...64