초록 ▼

<목표>
○ 소 근육 세포주로부터 성장, 문화 특이적 Sumolyation된 단백질의 분리 및 동정
○ 동정된 Sumolyation된 단백질중 근육세포 성장, 분화에 중요한 자원 확보
○ 선발된 단백질이 근육세포의 성장과 분화에 미치는 작용기작 규명
○ 근육 특이적 단백질의 변형을 이용한 소 육종 및 선발 바이오 marker 개발
<연구내용 및 범위>
○ 소 근육 세포주로부터 성장, 분화 특이적 Sumolyation된 단백질의 분리기법 확립
- 재조합 HA-His-SUMO

<목표>
○ 소 근육 세포주로부터 성장, 문화 특이적 Sumolyation된 단백질의 분리 및 동정
○ 동정된 Sumolyation된 단백질중 근육세포 성장, 분화에 중요한 자원 확보
○ 선발된 단백질이 근육세포의 성장과 분화에 미치는 작용기작 규명
○ 근육 특이적 단백질의 변형을 이용한 소 육종 및 선발 바이오 marker 개발
<연구내용 및 범위>
○ 소 근육 세포주로부터 성장, 분화 특이적 Sumolyation된 단백질의 분리기법 확립
- 재조합 HA-His-SUMO 유전자 과발현 백터 구축
- Sumo 유전자 과발현 안정화 소 근육 세포주 (stable cell line)의 확립
- HA 및 His-tag beads를 이용한 Sumolyation된 단백질 분리 기법 확립
○ Sumolyation된 단백질의 분리, 동정 및 선발된 단백질의 작용기작 분석(I)
- 성장 및 분화단계에서 Sumolyation된 단백질 분리
- 분리된 단백질의 동정 및 기능적 분류
○ 선발된 단백질의 작용기작 규명 (II) 및 육종 및 선발 marker로서 활용을 위한 조직으로 부터 선발된 단백질의 sumoylation이 근육세포 성장 및 분화 촉진 관련 작용기전 연구
- 바이오 marker로서 활용을 위한 조직으로 부터 선발된 단백질 발현과 Sumolyation 양상 분석

Abstract ▼

Post-translational modification of proteins with a small ubiquitin modifier (SUMO) play an important role contributing to dynamic regulation of protein functions such as chromosomal organization, transcriptional factor activity, and nuclear import. Cellular signaling events by change of cell growth

Post-translational modification of proteins with a small ubiquitin modifier (SUMO) play an important role contributing to dynamic regulation of protein functions such as chromosomal organization, transcriptional factor activity, and nuclear import. Cellular signaling events by change of cell growth and differentiation status can lead to dynamic changes in the sumoylation of target proteins. To increase our understanding of regulation system induced by protein sumoylation in growing and differentiated bovine myogenic cells, we applied two-step affinity purification/tandem mass spectrometry for identification of candidate sumoylated proteins. Here we present the identification of 440 (328) and 366 (417) putative sumoylated proteins by Sumo-2 (or Sumo-3) from growing and differentiated bovine myogenic cells, respectively. This study demonstrated that sumoylation is an abundant posttranslational modification in growing and differentiated myogenic cells. Sumolyated substrates with diverse cellular functions were identified, including histones, regulators of transcription and translation, structural proteins, signaling proteins, regulators of cell cycle, molecular chaperones and metabolic enzymes. Our study reveals a role for sumoylation in diverse cell regulatory systems in myogenic cells. Next, we will characterize the biological meaning of the identified proteins in myogenesis.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 9
• CONTENTS ... 10
• 목차 ... 11
• 제 1 장 서론 ... 12
• 1 절: 연구개발의 필요성 및 목적 ... 12
• 2 절: 연구개발의 목표, 내용 및 범위 ... 14
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 16
• 1 절: <국외> ... 16
• 2 절: <국내> ... 16
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 17
• 1 절. 연구 추진전략 및 방법 ... 17
• 2 절. 연구 결과 ... 19
• 1. TA 벡터를 이용한 Sumo-1, 2, 3 유전자의 클로닝 및 염기서열 확인 ... 19
• 2. HA-His-tagged SUMO-1, 2, 3 과발현 벡터 구축 ... 20
• 3. 근육전구세포주의 성장 및 분화조건 확립 ... 21
• 4. 생쥐 근육세포내로 Sumo-1, 2, 3 유전자 과발현 벡터의 도입 (transfection) 및 안정화된 근육세포주(stable cell line)의 확립과 발현확인 ... 21
• 5. 소 근육전구세포내로 Sumo-1, 2, 3 유전자 과발현 벡터의 도입 (transfection) 및 안정화된 세포주 (stable cell line)의 확립 ... 23
• 6. Sumo 과발현이 근육세포의 분화에 미치는 영향 분석 및 small scale에서 sumoylation된 단백질의 분리 기법 확인을 위한 sumoylation된 단백질 동정 ... 23
• 7. Western blot을 이용한 Sumo-1, 2, 3 과발현 세포주 (clone)의 선발 ... 24
• 8. Sumoylation 된 단백질의 분리기법 확립 및 sumoylation된 단백질 동정 ... 25
• 9. Sumoylation 된 단백질의 동정 및 분류 ... 27
• 10. Sumoylation 된 단백질의 functional annotation ... 28
• 11. 성장과 분화 단계별 sumoylation 된 단백질의 발현 패턴의 변화 ... 57
• 12. 근육세포의성장과 분화과정에서 선발된 Sumoylation된 단백질의 발현 조사 ... 57
• 13. 한우 고급육과 저급육 근육조직(등심)을 이용한 일부 선발된 Sumoylation된 단백질의 발현 패턴조사 ... 58
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 60
• 1 절: 연구목표개발 대비 달성도 ... 60
• 2 절: 정량적 성과 ... 60
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 62
• 1 절: 추가연구의 필요성 ... 62
• 2 절: 연구결과의 활용계획 ... 62
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 63
• 제 7 장 기타 중요 변동사항 ... 64
• 제 8 장 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구장비 현황 ... 65
• 제 9 장 참고문헌 ... 66
• 끝페이지 ... 67