초록 ▼

본 연구는 치아법랑질 석회화부전의 원인유전자로 밝혀진 FAM83H의 생체내 작용기전을 유전자적중 마우스를 이용하여 규명하고, 생체내 발현 부위, 시기 및 발현양을 비교분석하고 관련 유전자의 탐색을 통해 조절네트워크를 구축하여 생체내 광화기전을 이해하고, 나아가 기질 석회화 조절을 통한 치아 법랑질 물성개선 및 골대사 관련질환의 개선을 위한 치료방법과 치료제 개발의 토대를 구축하기 위함임. 이를 위하여 다음과 같은 연구를 진행하였음.
1. FAM83H 단백질 특성규명 및 항체 제작
His 서열을 C 말단에 부착시킨 cDNA

본 연구는 치아법랑질 석회화부전의 원인유전자로 밝혀진 FAM83H의 생체내 작용기전을 유전자적중 마우스를 이용하여 규명하고, 생체내 발현 부위, 시기 및 발현양을 비교분석하고 관련 유전자의 탐색을 통해 조절네트워크를 구축하여 생체내 광화기전을 이해하고, 나아가 기질 석회화 조절을 통한 치아 법랑질 물성개선 및 골대사 관련질환의 개선을 위한 치료방법과 치료제 개발의 토대를 구축하기 위함임. 이를 위하여 다음과 같은 연구를 진행하였음.
1. FAM83H 단백질 특성규명 및 항체 제작
His 서열을 C 말단에 부착시킨 cDNA를 클로닝하여 단백질을 발현시키고 이를 His tag을 이용하여 분리 정제하고 항체를 제작. 또한 peptide를 제작하여 anti-peptide 항체를 제작
2. Knockout/GFP knockin 마우스 생산
OSDupDel.Hprt 벡터를 이용하여 exon 2부터 exon 5의 대부분을 결실시키고 그 자리에 GFP 유전자를 삽입하는 타겟팅벡터를 제작하고 이를 이용하여 Knockout/GFP knockin 마우스 생산함. 이를 이용하여 시기별, 부위별 발현양을 보다 더 정확히 확인하고자 함.
3. Knockout 마우스 교배 및 양상분석
특정 조직내에서 발생시기에 따른 유전자 결실의 효과를 확인하기 위하여 conditional knockout mouse를 제작함. 이를 이용하여 마우스 경조직의 조직학적 양상 및 미세경도,무기질 함량, 유기질 함량 및 골밀도 등을 비교 분석함.

Abstract ▼

The purposes of this study are identifying functional role of FAM83H.
mineralization-related gene, using knockout mouse and analysing its expression and finding a gene interaction network in order to understand mechanism of mineralization and to find out a way to improve tooth enamel property and

The purposes of this study are identifying functional role of FAM83H.
mineralization-related gene, using knockout mouse and analysing its expression and finding a gene interaction network in order to understand mechanism of mineralization and to find out a way to improve tooth enamel property and mineralized tissue diseases.
1. Characterization of FAM83H protein and production of Antibody.
; Cloning of his-tagged cDNA. Expression and purification of the tagged protein.Production of antibody. Generation of anti-peptide antibody.
3. Generation of knockout/GFP knockin mouse.
; Generation of knockout/GFP knockin mouse using GFP inserted OSDupDel.Hprt vector deleting all coding sequence(exon 2-5) in order to analyze of expression pattern and amount in detail.
3. Generation of conditional knockout mouse.
; Generation of Cre knockout mouse in order to identify the effect of gene deletion during development in specific tissues. Phenotypic characterization including histologic examination, microhardness of mineralized tissue, mineral and organic content, bone mineral density using microCT and SEM.

목차 Contents

• 중견연구자지원사업(핵심연구) 최종보고서 ... 1
• 목차 ... 3
• Ⅰ. 연구계획 요약문 ... 4
• 1. 국문요약문 ... 4
• Ⅱ. 연구결과 요약문 ... 5
• 1. 국문요약문 ... 5
• 2. 영문요약문 ... 6
• Ⅲ. 연구내용 및 결과 ... 7
• 1. 연구개발과제의개요 ... 7
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 10
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 10
• 4. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 23
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 23
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 23
• 7. 주관연구책임자 대표적 연구실적 ... 24
• 8. 참고문헌 ... 24
• 9. 연구성과 ... 25