초록 ▼

1. 앱식산신호전달 성분 분리
1) 활성화표지 돌연변이체(Activation-tagged mutant) 선별
- activation-tagged mutant screen 조건 확립 및 screen 수행:
>800개의 ABA-hypersensitive (AHS) 돌연변이체,
>150개의 ABA-insensitive (AIS) 돌연변이체 1차선별
- 선별된 돌연변이체의 후세대 표현형 검증: 2, 3차 선별을 통한 검증
113개의 AHS, 26개의 AIS 돌연변이체 최종 선별
- tagged-gene

1. 앱식산신호전달 성분 분리
1) 활성화표지 돌연변이체(Activation-tagged mutant) 선별
- activation-tagged mutant screen 조건 확립 및 screen 수행:
>800개의 ABA-hypersensitive (AHS) 돌연변이체,
>150개의 ABA-insensitive (AIS) 돌연변이체 1차선별
- 선별된 돌연변이체의 후세대 표현형 검증: 2, 3차 선별을 통한 검증
113개의 AHS, 26개의 AIS 돌연변이체 최종 선별
- tagged-gene 동정: TAIL-PCR 및 plasmid rescue를 수행하여 최종 선별된 line 의 T-DNA 삽입부위 동정
2) 앱식산반응 유전자 발현을 조절하는 전사인자 분리
- 앱식산반응요소인 CE1 결합인자 분리: One-hybrid screen을 수행하여 13개의 AP2 domain CE1-결합단백질(CEBF) 유전자 분리
- 생화학적 기능 분석: DNA-binding specificity, transcriptional activity 등 분리된 CEBF의 기본기능 조사
2. 분리된 신호전달 성분의 식물체 내 기능 조사
1) 최종 선별된 3개의 활성화표지 유전자(Activation-tagged genes)의 기능 조사
- 발현분석: 조직별 또는 유도발현 양상, GUS reporter를 이용한 promoter 활성, subcellular localization 등을 조사
- Recapitulation experiment: 기능 확인을 위한 과다발현체 제작 및 분석 수행
- Knockout 또는 RNAi line 확보/제작 및 분석 수행
2) 선별된 CE1 결합인자(CE1-binding factor, CEBF) 기능 조사
- 선별된 CEBF의 과다발현체 제작 및 표현형 분석 수행
- knockout 또는 RNAi line 확보/제작 및 분석 수행
- target gene 동정: RT-PCR, Microarray 등을 통한 유전자 활성화기능 조사
3. 신호전달경로 해석
- 상기 실험결과를 근거로 분리된 유전자의 앱식산신호전달 기능 확인함

Abstract ▼

1. Isolation of ABA signaling components
1) Isolation of Activation-tagged mutants
- isolated 113 ABA-hypersensitive and 26 ABA-insensitive mutants after three rounds of screens.
- T-DNA insertion sites in the mutants were determined by TAIL-PCR & plasmid rescue.
2) Isolation of the ABA

1. Isolation of ABA signaling components
1) Isolation of Activation-tagged mutants
- isolated 113 ABA-hypersensitive and 26 ABA-insensitive mutants after three rounds of screens.
- T-DNA insertion sites in the mutants were determined by TAIL-PCR & plasmid rescue.
2) Isolation of the ABA response element CE1 binding factor (CEBF) genes
- 13 AP2 domain proteins were isolated by Yeast One-hybrid screens.
- DNA-binding and transcriptional activity of CEBFs were determined.
2. Functional analysis of putative ABA signaling components
1) Tagged genes
- expression analysis, subcellular localization of select genes were carried out.
- recapitulation experiments of select genes were carried out by generation and analyses of overexpression lines.
- analysis of knockout/RNAi lines were conducted.
2) CEBFs
- preparation and analysis of overexpression/knockout/RNAi lines were carried out for several CEBFs.
- target gene analysis: microarray or RT-PCR were conducted to identify target genes.
3. Delineation of ABA signal transduction pathways
- Involvement of the isolated genes in ABA response were confirmed.

목차 Contents

• 중견연구자지원사업(핵심연구) 최종보고서 ... 1
• 목차 ... 2
• Ⅰ. 연구계획 요약문 ... 3
• 1. 국문요약문 ... 3
• Ⅱ. 연구결과 요약문 ... 4
• 1. 국문요약문 ... 4
• 2. 영문요약문 ... 5
• Ⅲ. 연구내용 및 결과 ... 6
• 1. 연구개발과제의개요 ... 6
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 8
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 10
• 4. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 37
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 37
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 38
• 7. 주관연구책임자 대표적 연구실적 ... 38
• 8. 참고문헌 ... 39
• 9. 연구성과 ... 41
• 10. 기타사항 ... 41