초록 ▼

(1) 동물의 여러 조직세포에서 TRPM8이나 ANKTM1 유전자 발현여부를 확인하여, TRPM8과 ANKTM1의 조직 분포 특이성을 조사하였다.
(2) 세포가 차가운 온도의 자극을 받았을 때 신경 세포내에서 발현이 조절되는 유전자와, modification 되는 특히 인산화 되는 단백질을 각각 유전자 microarray와 2D proteomics방법으로 분석하였다. 인산화 단백질의 변화를 시간별, 온도별 profiling 함으로써 차가운 온도 자극에 대한 신경계 세포내 방어 기작의 인산화 신호 전달 kinetics를 분석하였

(1) 동물의 여러 조직세포에서 TRPM8이나 ANKTM1 유전자 발현여부를 확인하여, TRPM8과 ANKTM1의 조직 분포 특이성을 조사하였다.
(2) 세포가 차가운 온도의 자극을 받았을 때 신경 세포내에서 발현이 조절되는 유전자와, modification 되는 특히 인산화 되는 단백질을 각각 유전자 microarray와 2D proteomics방법으로 분석하였다. 인산화 단백질의 변화를 시간별, 온도별 profiling 함으로써 차가운 온도 자극에 대한 신경계 세포내 방어 기작의 인산화 신호 전달 kinetics를 분석하였다.
(3) in silico analysis 에 의한 TRPM8과 ANKTM1 homologue 유전자를 제안하였다.
(4) 세포소기관 자체의 유전자를 가지고 있고, 에너지 대사 작용에 중요한 mitochondria가 세포가 저온에 노출되었을 때 보이는 기능 및 조절양상의 변화를 cell viability, mitochondrial physiology (MTT, membrane potential, ATP level, ROS level) 측면에서 조사하여 membrane potential 증가와 ATP level 증가를 확인하였다.
(5) allodynia에 효과가 있는 anticonvulsant인 pregabalin을 통증에서 activation 되는 substance P로 자극시킨 glial cell 모델에 처리하고 proteome을 분석하였다. pharmacoproteomics 방법을 이용하여 pregablin이 glial cell cytoskeleton remodeling mechanism을 보인다는 새로운 사실을 제시하였다.
(6) 저온 신호에 의해서 변화하는 phosphoproteome 분석후 인산화 kinetics를 제시하였고 인산화 변화 단백질들이 기능적으로 RNA binding 단백질들임을 제시하였다.

Abstract ▼

(1) Cellular distribution of cold receptor was identified in various tissue cells.
(2) To investigate cellular signaling and explore a novel receptor, analyze microarray and 2D proteome profiling according to time or temperature Genes differentially expressed in cold-responsive neuronal cell line

(1) Cellular distribution of cold receptor was identified in various tissue cells.
(2) To investigate cellular signaling and explore a novel receptor, analyze microarray and 2D proteome profiling according to time or temperature Genes differentially expressed in cold-responsive neuronal cell lines (sub-physiological temperature culturing (< 37℃) of mammalian cells) are identified using c-DNA microarray To profile protein modification, 2D proteomics are used.
(3) As a candidate of novel cold-sensitive receptor, find TRPM8- and ANKTM1-related genes using in silico analysis and perform a functional analysis
(4) Mitochondrial function analysis after the exposing cells to sub-physiological temperatures in terms of cell viability, mitochondrial physiology (MTT, membrane potential, ATP level, ROS level)
(5) Pregabalin is a lipophilic amino acid derivative of c-amino butyric acid that displays anticonvulsant and analgesic activities against neuropathic pain. To identify immediate early protein targets of pregabalin in glial cells, a differential proteomics approach in C6 rat glioma cells treated with pregabalin was used. These results suggest a previously undefined role of pregabalin in the regulation of chaperone activity and cytoskeleton remodelling in glial cells.
(6) We applied a phosphoproteome profiling approach to the human lung epithelial cell line BEAS-2B to elucidate cellular cold-responsive processes. Identified proteins were mainly RNA-related (i.e., they were involved in RNA binding and splicing). The data indicated a time-shift between two temperatures. The phosphorylation of putative cold responsive markers, such as ribosomal protein large P0 and heterochromatin-associated proteins 1, were verified by Western blotting in cells transfected with TRPM8 or TRPA1

목차 Contents

• 일반연구자지원사업 최종보고서 ... 1
• 목차 ... 3
• 연구 계획 요약문 ... 4
• 연구 결과 요약문 ... 6
• 한글요약문 ... 6
• SUMMARY ... 8
• 연구내용 및 결과 ... 9
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 9
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 12
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 15
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 39
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 40
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 41
• 7. 주관연구책임자(공동연구원) 대표적 연구 실적 ... 41
• 8. 참고 문헌 ... 42
• 9. 연구 성과 ... 43
• 10. 기타사항(중요 연구 변경사항 등) ... 47