초록 ▼

전 세계적으로 인플루엔자 백신은 계란에서 생산된 것을 불활화하여 사용하거나 생백신 형식으로 사용되고 있다. 그러나 2009년 발생한 신종플루의 Pandemic 상황의 경우에서 알 수 있듯이 현재의 백신생산 방법으로는 감염발생 후 적어도 6개월 이상의 시간이 지나야만 백신투여를 시작할 수 있고 그 생산량도 전 국민이 접종받기에는 매우 부족한 상황이다. 수정란을 사용하여 바이러스를 배양하는 현재의 방법은 평상시에 예측된 상황 정도에서 인플루엔자가 유행할 경우 문제가 되지 않는다. 그러나 현재의 방법은 닭의 사육과 연관되어 있어 새로운

전 세계적으로 인플루엔자 백신은 계란에서 생산된 것을 불활화하여 사용하거나 생백신 형식으로 사용되고 있다. 그러나 2009년 발생한 신종플루의 Pandemic 상황의 경우에서 알 수 있듯이 현재의 백신생산 방법으로는 감염발생 후 적어도 6개월 이상의 시간이 지나야만 백신투여를 시작할 수 있고 그 생산량도 전 국민이 접종받기에는 매우 부족한 상황이다. 수정란을 사용하여 바이러스를 배양하는 현재의 방법은 평상시에 예측된 상황 정도에서 인플루엔자가 유행할 경우 문제가 되지 않는다. 그러나 현재의 방법은 닭의 사육과 연관되어 있어 새로운 변종 인플루엔자 바이러스가 대유행할 경우 신속하게 계란의 생산량을 늘릴 수 없는 구조적인 문제를 가지고 있다. 따라서 이를 대체할 수 있는 백신생산기술개발의 필요성이 증대되었고 그중 하나의 대안으로 세포배양백신이 강력한 대체 수단으로 연구되고 있다. 본 과제에서는 새로운 대안으로써의 세포배양방법으로 인플루엔자 바이러스 항원을 대량으로 확보하기 위한 목적으로 수행되고 있으며 구체적으로는 생백신 인플루엔자 바이러스를 대상으로 연구를 진행하고 있으며 다음과 같은 연구결과를 도출하였다. 인플루엔자 바이러스의 생산성에 대해서 여러 조건으로 확인한바 MDCK세포주에서 가장 높은 생산성을 보여주었고, 최적조건으로 확립한 방법으로 항원을 생산 시에 항원자체의 변이에 의한 문제점이나 약독화된 고유한 특성의 변이가 거의 나타나지 않아 안전하고 안정적인 인플루엔자 생백신 항원의 생산 시스템이 구축되었다. 세포주에서 배양된 인플루엔자 생백신을 mouse에 투여하여 혈중항체가 및 체액성 항체가 등을 사백신과 비교분석하였고, 공격접종을 통해 항원의 양과 protection과의 상관관계를 분석한 결과 생백신이 단 1회의 접종만으로도 충분한 면역원성을 나타냄을 확인하였다. Ferret에도 세포배양 인플루엔자 생백신을 농도별로 접종하여 면역원성을 확인한 바 충분한 항체가 만들어짐을 확인하였다. 본 시험결과들과 기존의 여러 가이드라인들을 토대로하여 세포배양을 통한 인플루엔자 생백신 개발 시에 고려해야할 사항(PTC)을 도출하였다.

Abstract ▼

Influenza vaccine has been globally used in an inactivated or live vaccine produced in eggs. However, as shown in the Pandemic situation of swine flu occurring in 2009, the vaccine is available after at least six months upon occurrence of infection with current method for vaccine production, and the

Influenza vaccine has been globally used in an inactivated or live vaccine produced in eggs. However, as shown in the Pandemic situation of swine flu occurring in 2009, the vaccine is available after at least six months upon occurrence of infection with current method for vaccine production, and the volume of vaccine is not enough for all people to get vaccinated. The current method in which virus is cultured using fertilized eggs does not have any problems if the influenza is prevalent under the expected situation. However, the current method has a structural problem in which the production of eggs cannot be increased rapidly because it is associated with raising chicken if new Pandemic influenza viruses are occurred. Therefore, the necessity to develop the new vaccine production technology replacing the conventional method has been growing and the cell culture vaccine is being studied as one of powerful alternative means. This project is being conducted with the purpose to secure the large quantity of influenza virus antigen with cell culture method as an alternative mean. More specifically, the study is being progressed targeting live vaccine for influenza virus and the following results are drawn from our research. As several conditions on the productivity of the influenza viruses are examined, the highest productivity is observed in MDCK cell line and neither problems caused by mutation of antigen itself nor attenuated unique characteristics are observed. It implies that the system to produce the antigens for safe and reliable live vaccine for influenza has been established. After live vaccine for influenza cultured in cell lines is injected into the mouse, serum antibody titer and humoral antibody titer are compared with those from the inactivated vaccine. The results from analyzing the correlation between amount of antigen challenged with wild type virus and protection confirm that live vaccine represents the sufficient immunogenicity with a single dose. Live vaccines for influenza with different concentration are injected into Ferret and immunogenicity is examined. The result confirms that the sufficient amount of antibodies is produced. Based on results of this study and several guidelines, point to consider(PTC) which should be considered upon development of live influenza vaccine through cell culture are drawn.

목차 Contents

• 제출문 ... 1
• 목차 ... 2
• I. 총괄연구개발과제 요약문 ... 4
• 국문 요약문 ... 4
• Summary ... 6
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 8
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 8
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 11
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 14
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 61
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 65
• 제6장 총괄참고문헌 ... 66
• 제7장 총괄첨부서류 ... 68
• III. 제(1)세부연구개발과제 연구결과:인플루엔자 백신용 항원평가 시스템 구축을 위한 연구 ... 69
• 제1장 제(1)세부 연구개발과제 요약문 ... 70
• 제2장 세부연구개발과제의 목적 ... 73
• 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법 ... 75
• 제4장 세부연구개발과제의 결과 및 고찰 ... 78
• 제5장 세부참고문헌 ... 125