초록 ▼

○ 연구목적/배경/필요성 : 항암제만으로 암을 치료하는데는 한계가 있으므로 최근에는 생물학적 활성을 억제하는 치료법의 개발에 대한 연구가 선진국에서는 집중적으로 진행되고 있다. 암세포가 증식 및 전이하는데는 주위 세포외 기질(ECM)과 혈관생성이 필수적으로 필요하므로, 혈관생생 억제 기술을 개발하고자 한다. 아울러 이들 발현이 특별히 증가된 환자에서 선택적으로 이 치료를 시행하는, 새로운 치료개념을 정립하고 임상적 응용을 하고자 한다.
○ 연구방법 : MT1-MMP, MMP-2 발현을 RT-PCR로 비교한 다음 세포주에서 MM

○ 연구목적/배경/필요성 : 항암제만으로 암을 치료하는데는 한계가 있으므로 최근에는 생물학적 활성을 억제하는 치료법의 개발에 대한 연구가 선진국에서는 집중적으로 진행되고 있다. 암세포가 증식 및 전이하는데는 주위 세포외 기질(ECM)과 혈관생성이 필수적으로 필요하므로, 혈관생생 억제 기술을 개발하고자 한다. 아울러 이들 발현이 특별히 증가된 환자에서 선택적으로 이 치료를 시행하는, 새로운 치료개념을 정립하고 임상적 응용을 하고자 한다.
○ 연구방법 : MT1-MMP, MMP-2 발현을 RT-PCR로 비교한 다음 세포주에서 MMPI의 억제력 (IC50) 비교를 표준화하였다. MMP-2를 insect cell/baculovirus system을 이용하여 발현 및 정제하여, 천연물 추출물을 대상으로 MMP 저해효과를 분석하였다. KDR의 extracellular domain을 coding 하는 cDNA의 확보 및 이를 발현하는 재조합 레트로바이러스 벡터를 제조 및 확보하였다. 또한 암세포 내로 TIMP-2와 sKDR 유전자를 도입시켜 암세포의 성장 및 침윤과 혈관내피세포 성장에 미치는 영향에 대한 조사를 수행하였다.
○ 연구결과 : MMP-2, MMP-9파 MTI-MMP를 각기 달리 발현하는 세포주를 확보하였으며, 이들에서 TIMP-2 처치시에 나타나는 이들 MMPs의 발현 변화를 확인하였다. 아울러 대상 환자를 결정하는 기준을 설립하였다. 레트로바이라스 벡터를 amphotropic 포장 세포주에 형질도입하여 재조합 레트로바이러스를 획득하였고, 여기에서 얻어진 바이러스 입자를 MuLV-gag-pol/GaLN-env 바이러스 생산 세포주인 PG13 세포에 감염시켜 TIMP2 또는 sKDR를 발현하는 재조합 레트로바이러스 생산 세포주들을 cloning하였다- 다음으로는 높은 titer의 재조합 레트로바이러스를 생산하는 PG13 바이러스 생산 세포주를 선별하였다. sKDR의 과발현은 암의 성장억제에 큰 효과를 나타내지 못하였으나, TIMP2 의 과발현은 암의 성장 뿐 아니라 침윤, 혈과내피세포의 성장, 그리고 폐로의 전이를 효파적으로 억제하였다.
○ 결론/고찰 :MMP 억제제의 효능을 평가할 수 있는 ex vivo 모델이 설립되어 이를 객관화하는 응용적 모델의 개발이 필요하다. TIMP-2의 과발현을 이용한 새로운 유전자치료 protocol 개발에 착수할 예정이며, 유방암 이외에 다른 전이성이 강하다고 알려진 암조직을 대상으로 연구범위를 확대하여 나갈 예정이다.
○ 결과 활용계획: 암의 생물학적 치료를 위해서 선택성이 있는 새로운 저분자 MMP inhibitor를 개발하고, 레트로바이러스벡터의 의한 유전자치료 방법을 개발한 다음 이들 치료법의 효과를 보다 객관적으로 특성화하여 평가하는 신약개발의 평가 및 치료선택 기준을 정립하고자 한다.

Abstract ▼

o Purposes : To overcome the limitation of chemotherapy, two main targetiog strategies have been adopted as a biotherapy. The most obvious factor that might predict the responsiveness of human cancer to MMP inhibitor/anti-angiogenesis treatment is the dependency of the particular cancer on the produ

o Purposes : To overcome the limitation of chemotherapy, two main targetiog strategies have been adopted as a biotherapy. The most obvious factor that might predict the responsiveness of human cancer to MMP inhibitor/anti-angiogenesis treatment is the dependency of the particular cancer on the produced MMPs type or angiogenic factors.
o Methods : The expression level of MTI-MMP and MMPs gene were measured by RT-PCR. Inhibitory effect of MMPI was measured by determining IC50 using zymography. The retroviral vector coding the sKDR cDNA was introduced into a packaging cell line PG13 which produces retorviruses pseudotyped with GaL V envelope. The pseudotyped retroviruses have been used to transduce human breast cancer cells.
o Result: A different expression level of MTI-MMP and MMP genes after MMPI treatment was compared with different dosages of MMPI. Overexpression of TIMP-2 markedly reduced tumor growth whereas sKDR did not affect tumor growth. In addition, in vitro invasion assay of human breast cancer cells transduced with the retrovirus vector encoding the TIMP-2 cDNA revealed the decrease of invasiveness on metrigel coated with collagen. Also, single intratumoral injection of the TIMP-2 retrovirus into human breast tumor tissue established in mammary fat pad of nude mice showed dramatic decrease in size and number of lung metastatic tumor.
o Conclusion : A baseline molecular targeting model system which can be expanded as a surrogates activity measurement was established. Intratumoral, retroviral-mediated transduction of TIMP-2 cDNA into a limited population of human tumor cells is sufficient to inhibit tumor growth and to prevent metastasis.
o Usefulness : By striving to evaluate proposed new endpoints in terms of its ability to select drugs and doses enhances survival, we will assure any meaning assigned to those of newly developed herb extracts and retrovirus system is truly earned by predicting real efficacy.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 최종.연차 연구개발결과보고서 ... 3
• 제출문 ... 4
• 요약문 ... 5
• SUMMARY ... 6
• CONTENTS ... 7
• 목차 ... 8
• 제1장 서 론 ... 9
• 제1절 연구개발의 목적 ... 9
• 제2절 연구개발의 필요성 ... 12
• 제3절 연구개발의 범위 ... 14
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 15
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 20
• 제1절 연구방법 ... 20
• 제2절 연구내용 및 결과 ... 30
• 제4장 연구개발목표의 달성도 및 대외기여도 ... 69
• 제1절 연구개발목표의 달성도 ... 69
• 제2절 정연구개발의 대외기여도 ... 70
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 72
• 제6장 참고문헌 ... 73