초록 ▼

○ 면역 유도한 곤충으로부터 차별화 선별법을 이용하여 분리한 고기능성 항생 펩타이드에 대한 우수활성영역 확보 및 특성을 분석
○ 신규 항균 펩타이드 유전자의 항균 및 항암 활성 검정
○ 우수 유도체 펩타이드에 대한 인간의 여러 조직기원의 면역 암 세포주 AML-2 등 3종에서 DNA 단편화 즉 세포사멸 및 apoptosis의 여러 가능한 신호전달체계를 구명한다.
○ 프로테옴 비교 연구를 수행하여 곤충 면역관련 단백질을 분리 동정하고 아미노산 서열 분석을 통하여 항균펩타이드를 대량 선발
○ 항균펩타이드 대량생산을

○ 면역 유도한 곤충으로부터 차별화 선별법을 이용하여 분리한 고기능성 항생 펩타이드에 대한 우수활성영역 확보 및 특성을 분석
○ 신규 항균 펩타이드 유전자의 항균 및 항암 활성 검정
○ 우수 유도체 펩타이드에 대한 인간의 여러 조직기원의 면역 암 세포주 AML-2 등 3종에서 DNA 단편화 즉 세포사멸 및 apoptosis의 여러 가능한 신호전달체계를 구명한다.
○ 프로테옴 비교 연구를 수행하여 곤충 면역관련 단백질을 분리 동정하고 아미노산 서열 분석을 통하여 항균펩타이드를 대량 선발
○ 항균펩타이드 대량생산을 위한 최적의 박테리아 발현벡터 구축
○ Cecropin등 항균펩타이드 재조합 발현 및 분리정제 기술 확립
○ 재조합 항균펩타이드에 대한 항균활성 검정 및 기능분석
○ 초파리 장 질환 관련 유전자 선발 및 형질전환 초파리 제작
○ 장 질환 유도 시 특이적으로 발현된 유전자 선발 및 특성 분석
○ 장 질환 관련 유전자가 knock down된 형질전환 초파리 제작
○ 선발된 유전자를 이용한 염증성장질환의 분자적 메커니즘 해명
○ 울도하늘소(P sacothea hilaris)유래의 Psacotheasin을 이용하여 병원성 균주에 대한 항균 활성을 확인하고 작용 기작을 검토하였다.
○ Psacotheasin의 생체 안전성 검토하였다.
○ Psacotheasin에 의해 유발되는 진균 세포의 Apoptosis 유도현상 검토하였다.
○ 곤충펩타이드에 의한 대장상피세포의 세포생물학적 반응확인
○ Survivin 발현량 증가 메커니즘 규명
○ 펩타이드 자극으로 인한 신호체계 동정

Abstract ▼

To identify genes that are differentially expressed, we compared the mRNA expression profile of Harmonia axyridis larvae untreated and treated with LPS. We extracted mRNAs from the larvae with or without LPS treatment, and subjected them to ACP RT-PCR analysis using a combination of 120 arbitrary pr

To identify genes that are differentially expressed, we compared the mRNA expression profile of Harmonia axyridis larvae untreated and treated with LPS. We extracted mRNAs from the larvae with or without LPS treatment, and subjected them to ACP RT-PCR analysis using a combination of 120 arbitrary primers ACP1-ACP120) andoligo (dT)primer(dT-ACP2). AftersynthesizedcloningDNAfrom37 DEGs, it practiced the sequencing homology analysis using BLAST search. Among the 37 DEGs differentially expressed, we identified a cDNA showing homology with previously reported antibacterial peptide. A cDNA encoding a 82-mer propeptide was identified and its predicted molecular mass and pI was 9.25 kDa and 7.54, respectively. A 35-mer mature peptide was also selected and named herein as Hamoniasin.
In the present study we investigated and selected the immune-related proteins from the lepidopteran Antheraea yamami. We identified 10 potential antimicrobial peptides such as 2 attacin antibacterial peptides, cecropin A, cecropin B, cecropin-like peptide(CLP), 2 molicin-like peptides (MLP), lebocin-like peptide, heliocin-like peptide and defensin. we also identified 12 immune-related genes included Spatzle, peptidoglycan recognition protein (PGRP), Clip domain serine protease, Serpin, C-type lectin, prophenolocidas activating factor, toll-like receptor and immune-induced protein. we report successful production of high performance antimicrobial peptide as insoluble fusion protein efficiently in bacterial expression system. To increase productivity and stabilizing effect, antimicrobial peptides(moricins and cecropins) were fused with KSI and expressed in E. coli cells. The conditions for culture and induction were also optimized. Expression, purification and characterization of recombinant AMPs have been carried out, and antimicrobial activity of the purified recombinant AMPs were tested. A method using KSI fusion expression system in E. coli led to production of insoluble fusion protein, which has non-toxic effect to the host. The availability of high purity peptide with low costs of production at a large scale allows us to apply it for a diverse purpose in the future.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 4
• SUMMARY ... 8
• 제1장 서론 ... 11
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 14
• 제 3 장 연구개발 수행 내용 및 결과 ... 16
• 제 1 절 신규 항균 펩타이드 유전자 선발 및 의약 소재화 ... 16
• 제 2 절 곤충 면역 관련 단백질 분리 및 의약 소재화 ... 30
• 제 3 절 형질전환 초파리를 이용한 염증성 장질환 복구 메커니즘 구명 ... 48
• 제 4 절 항생제 내성균을 제어할 수 있는 항생제 개발 ... 63
• 제 5 절 고기능성 항생 펩타이드를 이용한 장염의 약리효과 구명 ... 74
• 제 4 장 연구개발 목표 달성도 및 대외기여도 ... 83
• 제 1 절 목표대비 대외달성도 ... 83
• 제 2 절 정량적 성과 ... 85
• 제 5 장 연구개발 결과의 활용계획 ... 91
• 제 6 장 기타 중요 변동사항 ... 91
• 제 7 장 참고문헌 ... 92